疫苗制造課件

細(xì)菌性滅活疫苗制造細(xì)菌性活疫苗制造病毒性動(dòng)物組織疫苗制造

病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造疫苗制造

細(xì)菌性滅活疫苗制造

接種培養(yǎng)基濃縮佐劑菌種種子液菌液

菌苗原液滅活菌液配苗、乳化分裝檢驗(yàn)

凍干接種培養(yǎng)基

保護(hù)劑弱毒菌種種子液菌液菌苗原液配苗檢驗(yàn)活疫苗

細(xì)菌性活疫苗制造

佐劑種毒健康動(dòng)物感染動(dòng)物毒液保護(hù)劑分裝凍干活疫苗滅活病毒液乳化分裝滅活苗病毒性動(dòng)物組織疫苗制造

注意事項(xiàng):

動(dòng)物選擇種毒常用的接種途徑觀察與收獲制苗腦內(nèi)注射靜脈注射肌肉注射皮下注射腹腔注射離心佐劑種毒雞胚收獲尿囊液濃縮病毒配苗分裝檢驗(yàn)病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造

適應(yīng)于雞胚的種毒包括自然弱毒與人工培育的弱毒兩類。多為凍干毒。凍干毒種需按規(guī)定要求在雞胚繼代復(fù)壯，通常繼代3代以上，經(jīng)檢定符合標(biāo)準(zhǔn)后方可作為生產(chǎn)疫苗的毒種,包括無(wú)菌檢測(cè)、毒價(jià)和其他項(xiàng)目的檢定等。種毒與毒種繼代

受精卵必須來(lái)自SPF雞群,從受精卵入孵開始至培育全過(guò)程都應(yīng)保持無(wú)菌，要求一定的溫度和濕度，且需不斷翻動(dòng)。

5～8日齡胚適用于卵黃囊接種：9－11日齡胚用于尿囊腔接種；10～12日齡胚適于羊膜腔接種；11～13日齡胚用于絨毛尿囊膜接種。（SPF：無(wú)特定病原菌）雞胚選擇

尿囊腔：流感病毒卵黃囊接種：乙型腦膜炎病毒絨毛尿囊膜：皰疹病毒。羊膜腔接種：流行性感冒病毒、流行性腮腺炎病毒雞胚培養(yǎng)法【目的】了解用雞胚分離、培養(yǎng)病毒的基本方法?！驹怼侩u胚培養(yǎng)法是常用的病毒培養(yǎng)法之一，操作簡(jiǎn)便，來(lái)源容易，本身帶病毒的情況也極為少見，一般選用白色殼薄的受精卵，主要用4種途徑接種不同部位，即絨毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔及卵黃囊等。多數(shù)病毒都可以在雞胚的不同部位增殖?！静牧稀?、雞受精卵、蛋架、檢卵燈、磨蛋機(jī)、透明膠紙。2、滅菌的手術(shù)刀、鑷子、剪刀、平皿、1m1注射器及6號(hào)針頭、12號(hào)針頭。3、乙型腦炎病毒液、單純皰疹病毒懸液、流感病毒稀釋液

病毒接種途徑1、尿囊腔接種法：（1）取10—11天齡雞胚，在檢卵燈下畫出氣室界限，于胚胎附近大血管處作好標(biāo)記；消毒后，用滅菌刀尖打一小孔；用滅菌注射器吸取流感病毒懸液0.2m1，刺入0.5cm后，進(jìn)行注射；以透明膠紙封閉注射孔，蠟筆做好標(biāo)記。（2）置35℃孵箱中孵育，每日進(jìn)行檢視雞胚的死活。如果雞胚在接種后24h內(nèi)死亡者，為非特異性死亡，棄之。（3）孵育3天后取出，放入4℃冰箱過(guò)夜。（4）次日取出雞胚，消毒氣室部分卵殼，用無(wú)菌剪刀去卵殼，用小鑷子撕去卵膜。以無(wú)菌毛細(xì)吸管吸取尿囊液放于無(wú)菌試管中。2、卵黃囊接種法（1）取6～8天雞胚，檢卵燈下畫出胎位和氣室，垂直放于蛋架上，氣室端向上。碘酒消毒氣室中央，刀尖錐一小孔。（2）以1ml注射器及12號(hào)針頭吸取乙型腦炎病毒液0.5ml，自小孔穿入垂直接種于卵黃囊內(nèi)，深度為3cm左右，注入標(biāo)本0.2ml～0.5m1，退出注射器。膠紙封口，37℃孵育。每天檢卵并翻動(dòng)2次。（3）取孵育24h以上瀕死的雞胚，于氣室端開口，用鑷子提起卵黃蒂，擠去卵黃液，用無(wú)菌生理鹽水洗去卵黃囊上的卵黃液后將卵黃囊置于無(wú)菌平皿內(nèi)，低溫保存?zhèn)溆谩?、絨毛尿囊膜接種法

（1）取12天齡雞胚，檢卵燈下標(biāo)記胎位，于附近無(wú)大血管處碘酒消毒。用小鋸片在其雞胚旁無(wú)大血管處的卵殼上鋸一四方形（勿傷殼膜），同時(shí)于氣室用刀尖錐一小孔。（2）打開四邊形之卵殼，勿傷及卵殼膜，滴加滅菌生理鹽水一滴于殼膜上。用橡皮乳頭從氣室小孔吸氣，可見鹽水被吸下，絨毛膜下沉，形成人工氣室。（3）用注射器吸取0.2ml～0.5ml單純皰疹病毒液滴于絨毛尿囊膜上，膠紙封口。37℃孵育4～5天后收獲。（4）收獲：剪開氣室，如接種效果成功，絨毛尿囊膜上可見明顯疹斑。用無(wú)菌剪刀剪下此膜，置于無(wú)菌平皿內(nèi)低溫保存，備用。4、羊膜腔接種法（1）取12天雞胚，經(jīng)照視后劃出氣室，并標(biāo)明胚胎位置。（2）在氣室端開方形天窗，緊捏無(wú)菌鑷子，選無(wú)大血管處，快速穿刺絨毛尿囊膜，鑷子頭進(jìn)入尿囊后，再夾起羊膜，輕輕將其自絨毛尿囊膜破裂處拉出，以1ml注射器穿破羊膜，注入病毒液0.1ml～0.2ml。（3）用鑷子將羊膜輕輕送回原位，用玻璃膠紙封閉氣室端天窗，置孵箱37℃孵育。（4）培養(yǎng)3～5天后，即可收獲，經(jīng)消毒人工氣室，剪去殼膜及絨毛尿囊膜，吸棄尿囊液，夾起羊膜，用細(xì)頭毛細(xì)吸管穿入羊膜吸取羊水于小瓶中冷藏。

雞胚接種途徑主要有尿囊腔接種、羊膜腔接種、卵黃囊接種和絨毛尿囊膜接種4種。雞胚接毒后培養(yǎng)增殖的時(shí)間、溫度、濕度，以及收獲的標(biāo)準(zhǔn)與內(nèi)容物依不同的病毒和不同疫苗而異。接毒與收獲經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)合格后即可進(jìn)行配苗。濕苗：

通常于雞胚液內(nèi)按每毫升加入青、鏈霉素500～1000ul，放置0～10℃冷暗處處理后分裝。凍干苗：

按比例加入保護(hù)劑，充分混合后過(guò)濾，在濾液內(nèi)按每毫升加入青、