堿性磷酸酶檢測(cè)與臨床應(yīng)用

簡(jiǎn)介堿性磷酸酶是廣泛分布于人體各臟器器官中，其中以肝臟為最多其次為腎臟，骨骼、腸、和胎盤(pán)等組織,這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團(tuán)，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端。

第一頁(yè)，共31頁(yè)。但它不是單一的酶，而是一組同功酶。目前已發(fā)現(xiàn)有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5與AKP6六種同功酶。其中第1、2、6種均來(lái)自肝臟，第3種來(lái)自骨細(xì)胞，第4種產(chǎn)生于胎盤(pán)及癌細(xì)胞，而第5種則來(lái)自小腸絨毛上皮與成纖維細(xì)胞。

第二頁(yè)，共31頁(yè)。血清中的ALP主要來(lái)自肝臟和骨骼。生長(zhǎng)期兒童血清內(nèi)的大多數(shù)來(lái)自成骨細(xì)胞和生長(zhǎng)中的骨軟骨細(xì)胞，少量來(lái)自肝。第三頁(yè)，共31頁(yè)。生物化學(xué)特征堿性磷酸酶是一種能夠?qū)?duì)應(yīng)底物去磷酸化的酶，即通過(guò)水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團(tuán)除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，這類(lèi)底物包括核酸、蛋白、生物堿等。

第四頁(yè)，共31頁(yè)。而該脫去磷酸基團(tuán)的過(guò)程被稱(chēng)為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶是磷酸酶的一種，磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，將磷酸基團(tuán)加到對(duì)應(yīng)底物分子上。堿性磷酸酶在堿性環(huán)境有最大活力，對(duì)來(lái)源于細(xì)菌中的ALP來(lái)說(shuō)，其最適pH是8.0，而對(duì)來(lái)源于牛的ALP則是8.5。

第五頁(yè)，共31頁(yè)。ALP是一種含鋅的糖蛋白，在堿性環(huán)境中（最適Ph為10左右）可以水解各種天然及人工合成的磷酸單酯化合物底物。第六頁(yè)，共31頁(yè)。引起堿性磷酸酶升高的原因當(dāng)肝臟受到損傷或者障礙時(shí)經(jīng)淋巴道和肝竇進(jìn)入血液，同時(shí)由于肝內(nèi)膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清堿性磷酸酶明顯升高。堿性磷酸酶偏高的原因可以分為生理性原因和病理性原因，具體討論如下：

第七頁(yè)，共31頁(yè)。1、生理性原因兒童骨骼發(fā)育期、孕婦、骨折愈合期，這些情況下骨組織中的堿性磷酸酶很活躍，所以檢測(cè)時(shí)值會(huì)偏高。2、病理性原因當(dāng)人體患有阻塞性黃疸、原發(fā)性肝癌、繼發(fā)性肝癌、膽汁淤積性肝炎等時(shí)，肝細(xì)胞過(guò)度制造ALP，經(jīng)淋巴道和肝竇進(jìn)入血液，同時(shí)由于膽汁排泄障礙，反流入血，引起血清中的堿性磷酸酶偏高。第八頁(yè)，共31頁(yè)。3、骨骼有病時(shí)，例如佝僂病、骨上腫瘤、軟骨病等。4、其他不是很常見(jiàn)的疾病，例如腎病、嚴(yán)重性貧血、甲狀腺機(jī)能不全、白血病等。第九頁(yè)，共31頁(yè)。堿性磷酸酶高對(duì)人體的影響堿性磷酸酶主要用于阻塞性黃疸、原發(fā)性肝癌、繼發(fā)性肝癌、膽汁淤積性肝炎等的檢查?它主要經(jīng)淋巴道和肝竇進(jìn)入血液，同時(shí)由于肝內(nèi)膽道膽汁排泄障礙，反流入血而引起血清堿性磷酸酶明顯升高。

第十頁(yè)，共31頁(yè)。但由于骨組織中此酶亦很活躍。因此，孕婦、骨折愈合期、骨軟化癥。佝僂病、骨細(xì)胞癌、骨質(zhì)疏松、肝膿腫、肝結(jié)核、肝硬變、白血病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)時(shí)，血清堿性磷酸酶亦可升高，所以對(duì)人體的危害是比較大的。

第十一頁(yè)，共31頁(yè)。測(cè)定方法我國(guó)曾應(yīng)用較廣的為磷酸苯二鈉比色法，但現(xiàn)在應(yīng)用較多的是連續(xù)檢測(cè)法。原理為以磷酸對(duì)硝基酚為底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇或二乙醇胺為磷酸?；氖荏w。在堿性環(huán)境下，ALP催化4-NPP水解產(chǎn)生游離的對(duì)硝基酚，在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成黃色。根據(jù)405nm處吸光度增高速率來(lái)計(jì)算ALP活性單位。

第十二頁(yè)，共31頁(yè)。正常范圍正常范圍（連續(xù)監(jiān)測(cè)法）女性，1-12歲小于500U/L；大于15歲，40-150U/L；男性，1-12歲小于500U/L；12-15歲，小于750U/L；大于15歲，40-150U/L。

第十三頁(yè)，共31頁(yè)。臨床意義

臨床上測(cè)定ALP主要用于骨骼、肝膽系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷，尤其是黃疸的鑒別診斷。對(duì)于不明原因的高ALP血清水平，可測(cè)定同工酶以協(xié)助明確其器官來(lái)源。

第十四頁(yè)，共31頁(yè)。1．生理性增高：兒童在生理性的骨骼發(fā)育期，堿性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。處于生長(zhǎng)期的青少年，以及孕婦和進(jìn)食脂肪含量高的食物后均可以升高。

第十五頁(yè)，共31頁(yè)。2．病理性升高：(1)骨骼疾病如佝僂病、軟骨病、骨惡性腫瘤、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移等；(2)肝膽疾病如肝外膽道阻塞、肝癌、肝硬化、毛細(xì)膽管性肝炎等；(3)其他疾病如甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)。第十六頁(yè)，共31頁(yè)。3．病理性降低：見(jiàn)于重癥慢性腎炎、兒童甲狀腺機(jī)能不全、貧血等。第十七頁(yè)，共31頁(yè)。抑制作用除來(lái)源于胎盤(pán)外所有哺乳動(dòng)物的ALP同工酶都能被高精氨酸所抑制；而除來(lái)源于腸和胎盤(pán)外所有的ALP同工酶都能被左旋咪唑所抑制；而除了來(lái)源于胎盤(pán)的ALP(PALP和SEAP)外，幾乎所有的ALP都能在65℃2小時(shí)即被滅活。

第十八頁(yè)，共31頁(yè)。單乙醇胺對(duì)堿性磷酸酶有溫度依賴(lài)的抑制作用；較高濃度的無(wú)機(jī)磷可競(jìng)爭(zhēng)性地抑制堿性磷酸酶的活性；EDTA通過(guò)絡(luò)合堿性磷酸酶而導(dǎo)致該酶活性中心微環(huán)境構(gòu)象發(fā)生變化，從而不可逆地抑制堿性磷酸酶的活性；

第十九頁(yè)，共31頁(yè)。其他的抑制劑還有聯(lián)苯胺(競(jìng)爭(zhēng)性)、L-苯丙氨酸和丹酰-L-苯丙氨酸(反競(jìng)爭(zhēng)性)、含氮雜環(huán)氧釩配合物(選擇性)、五氯酚(對(duì)人胎盤(pán)堿性磷酸酶反競(jìng)爭(zhēng)性抑制)等。

第二十頁(yè)，共31頁(yè)。肝膽疾病引起的ALP升高肝細(xì)胞參與合成ALP，肝膽疾病時(shí)增高的ALP來(lái)自肝細(xì)胞。

第二十一頁(yè)，共31頁(yè)。淤膽性疾病時(shí)ALP的升高

ALP存在于毛細(xì)膽管面的微絨毛上，在膽汁分泌障礙時(shí)明顯增高。因膽汁酸刺激而ALPmRNA轉(zhuǎn)譯增高，肝細(xì)胞合成ALP亦增高。ALP經(jīng)膽汁排出，肝內(nèi)外膽管阻塞時(shí)，ALP有非常明顯的升高，ALP升高先于黃疸的出現(xiàn)，在黃疸消退后還可持續(xù)異常。在原發(fā)性膽汁肝硬化、藥物性肝炎、肝移植排斥或淤膽型病毒性肝炎引起的肝內(nèi)淤膽，都會(huì)使ALP升高，甚至高達(dá)正常值的4倍。第二十二頁(yè)，共31頁(yè)。肝內(nèi)占位性病變時(shí)ALP的升高

即使無(wú)黃疸，在肝占位性病變時(shí)血清ALP也可升高，包括肝腫瘤和肝膿腫，機(jī)制不明，可能與存在小膽管阻塞有關(guān)。在單小葉或節(jié)段的膽管阻塞，血清ALP升高可以是唯一的檢驗(yàn)異常。惡性腫瘤時(shí)ALP明顯升高，是腫瘤的標(biāo)記酶。在肝硬化病人的病程觀(guān)察中如發(fā)現(xiàn)血清ALP升高，須考慮合并HCC的可能性。肝轉(zhuǎn)移性腫瘤與其他肝占位性病變一樣，血清ALP可明顯升高。某些肝外腫瘤也可合成ALP，并不表示肝外腫瘤已有肝轉(zhuǎn)移。

第二十三頁(yè)，共31頁(yè)。成骨細(xì)胞與ALP

成骨細(xì)胞的活性及成骨作用的變化與血清ALP的活力密切相關(guān)。骨骼疾病患者主要由于成骨細(xì)胞增殖使血清ALP升高?；涡怨茄罪@著升高，為正常參考值上限的10倍至幾十倍，但血清鈣磷多正常。

第二十四頁(yè)，共31頁(yè)。佝僂病和骨軟化癥患者ALP變化與病程、病情有關(guān)，早期ALP輕度升高，隨病情加重而呈持續(xù)性上升，可達(dá)正常上限的4~10倍。治療2周后酶活力下降。骨折愈合期ALP活力輕度升高，成骨骨癌者顯著升高。

第二十五頁(yè)，共31頁(yè)。各種類(lèi)型的骨質(zhì)疏松，良性成骨細(xì)胞瘤等ALP無(wú)明顯變化。甲狀旁腺功能亢進(jìn)患者因田狀旁腺素過(guò)多引起溶骨作用加強(qiáng)，使ALP活力中度或重度升高，同時(shí)血鈣升高，血磷降低。此點(diǎn)有助于與畸形骨炎、佝僂病的鑒別。

第二十六頁(yè)，共31頁(yè)。對(duì)血清ALP成分的測(cè)定結(jié)果表明，其主要作用在于鑒別血清中升高的ALP是單獨(dú)地還是同時(shí)來(lái)自肝和骨組織。血液中同時(shí)出現(xiàn)肝型和骨型ALP升高，最常見(jiàn)于惡性腫瘤。

第二十七頁(yè)，共31頁(yè)。肝型ALP增加幾乎都是肝臟惡性腫瘤浸潤(rùn)的結(jié)果。肝型ALP繼發(fā)性沉積于骨組織，?？梢鸪晒欠磻?yīng)，因而伴有骨型ALP增高。所以惡性腫瘤患者血清肝型和骨型都增高的比例較大，定量測(cè)定肝型與骨型ALP同工酶，對(duì)判斷腫瘤的擴(kuò)散和療效均具有重要價(jià)值。

第二十八頁(yè)，共31頁(yè)。堿性磷酸酶偏低的原因堿性磷酸酶可出現(xiàn)偏高癥狀，同時(shí)，也可出現(xiàn)偏低癥狀，堿性磷酸酶偏低的原因，主要可分以下幾種：

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