總糖的測定-蒽酮比色法教學提綱

總糖的測定-蒽比色法植物組中總糖還原糖量的測（蒽比色法一、實目的掌握蒽酮比色法測定總糖和還原糖含量的原理和方法，學會正確使用分光光度計。二、實原理游離的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在濃硫酸的作用下脫水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物與蒽酮縮合成藍色的化合物，在處有最大吸收，在一定糖濃度范圍內(nèi)（200ug/ml），溶液吸光度值與糖溶液的濃度成線性關系。用酸將植物組織中沒有還原性的多糖和寡糖徹底水解成具有還原性的單糖，或直接提取植物組織中的還原糖，即可對植物組織中的總糖和還原糖進行定量測定。三、實材料．可見分光光度計、電子天平(1/100)、粉碎機、水浴鍋、電爐。．研缽、量筒、三角燒瓶、燒杯、容量瓶、玻璃漏斗、試管1.5cm×15cm刻度吸管、膠頭滴管、pH試紙、坐標紙。．植物原料，如銀耳、木耳、菜葉等。四、實試劑．蒽酮試劑：取2g蒽酮溶于l000ml體積分數(shù)為％的硫酸中，當日配制使用。．標準葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：稱取100mg葡萄糖，溶于蒸餾水并稀釋至000ml（可滴加幾滴甲苯作防腐劑）。．6mol／LHCl溶液：50ml鹽酸，加水至100ml．10％NaOH溶液：稱取10gNaOH固體，溶于蒸餾水并稀釋至100ml。五、操步驟1．葡萄糖標準曲線的繪制取干凈試管6支，按下表進行操作。以吸光度為縱坐標，各標準液濃度mg為橫坐標做圖。2．樣品中還原糖的提取和測定稱取植物原料干粉0.1，加水約3ml，在研缽中磨成勻漿，轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，并用約30ml的蒸餾水沖洗研缽～3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。于50℃水浴中保溫半小時（使還原糖浸出），取出，冷卻后定容至。過濾，取lml濾液進行還原糖的測定：吸取lml總糖類溶液置試管中，浸于冰浴中冷卻，再加入蒽酮試劑，沸水浴中準確加熱10min，取出用自來水冷卻后比色，其他條件與做標準曲線相同，測得的吸光度值由標準曲線查算出樣品液的糖含量。（樣品液顯色后若顏色很深，其吸光度超過標準曲線濃度范圍，則應將樣品提取液適當稀釋后再加蒽酮顯色測定）。標準曲線的制作及樣品測定參考表管號1#（空步驟白）

2#3#4#5#6#

7#（樣8#（樣品）品）標準葡萄糖溶液(ml)

00.20.40.60.81.0

還原糖總糖蒸餾水(1.00.80.60.40.20樣品液(／／／／／／1.01.0糖溶液濃度0.020.040.060.080.10待測待測(mg/ml)蒽酮試劑(ml)A620nm

置冰水浴中冷卻4.04.04.04.04.04.04.04.0沸水浴中準確加熱，取出，用自來水冷卻，室溫放置3．樣品中總糖的提取、水解和測定稱取植物原料干粉0.1，加水約3ml，在研缽中磨成勻漿，轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，并用約12ml的蒸餾水沖洗研缽～3次，洗出液也轉(zhuǎn)入三角燒瓶中。再向三角燒瓶中加入6mol/L鹽酸10ml，攪拌均勻后在沸水浴中水解半小時，冷卻后用10％NaOH溶液中和pH呈中性。然后用蒸餾水定容至，過濾，取濾液10ml，用蒸餾水定容，成稀釋1000倍的總糖水解液。取總糖水解液，測定其還原糖的含量：吸取lml糖類溶液置試管中，浸于冰浴中冷卻，再加入蒽酮試劑，沸水浴中準確加熱10min取出用自來水冷卻后比色，其他條件與做標準曲線相同，測得的吸光度值由標準曲線查算出樣品液的糖含量。六、實結(jié)果按照下列公式分別計算植物原料干粉中還原糖和總糖的質(zhì)量分數(shù)（ω）。ω（還原糖）=（CV/m）×100％11ω（總糖）=（CV/m）×0.9①×100％22式中ω（還原糖）：還原糖的質(zhì)量分數(shù)（％）；ω（總糖）：總糖的質(zhì)量分數(shù)（％）；C：還原糖的質(zhì)量濃度（／ml）；1C：水解后還原糖的質(zhì)量濃度（／ml）；2V：樣品中還原糖提取液的體積（）；1V：樣品中總糖提取液的體積（）；2m：樣品質(zhì)量（mg）。注①：計算總糖含量的公式，在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時適用，乘0.9是為了從測定出的總糖水解成的單糖量中，扣除水解時所消耗的水量。七、注事項．總糖：食品中的總糖通常是指具有還原性的糖（葡萄糖果糖,乳糖,麥芽糖等）和在測定條件下能水解為還原性單糖的糖的總量。．本法適用于可溶性還原糖測定。測定結(jié)