(1.67)-7.5.4電化學發(fā)光免疫試驗

7.5.4電化學發(fā)光免疫試驗電化學發(fā)光免疫試驗概況電化學發(fā)光免疫試驗（ECLIA）

是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應。通過三聯(lián)吡啶釕標記抗原或抗體的抗原-抗體反應順磁性微粒分離技術廣泛應用于臨床各種項目的定量檢測自動化分析要點（以雙抗體夾心法為例）電化學發(fā)光免疫試驗1.抗原抗體結合2.電化學發(fā)光反應3.光信號檢測4.檢測完畢臨床檢測試劑盒組成電化學發(fā)光免疫試驗MR1R2甲胎蛋白（AFP）試劑盒M：鏈霉親合素包被的微粒（透明瓶蓋）R1：生物素化的抗AFP單克隆抗體（灰蓋）R2：三聯(lián)吡啶釕標記的抗AFP單克隆抗體（黑蓋）RU電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理1.抗原抗體結合溫育RU將生物素標記的特異性抗體、待測標本和三聯(lián)吡啶釕標記抗體，加入反應杯中共同孵育，形成生物素-抗體-待測抗原-釕標記抗體復合物。RUMR1R2電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理1.抗原抗體結合溫育RU然后加入鏈霉親合素包被的順磁性微粒共同孵育，使順磁性微粒表面形成鏈霉親合素-生物素-抗體-待測抗原-釕標記抗體復合物。RUMR1R2電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理2.電化學發(fā)光反應工作電極磁鐵RURU通過蠕動泵將上述生成的復合物送入到流動測量室。溶液中還可能包含未結合的標記抗體、抗原、順磁性微粒等。電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理2.電化學發(fā)光反應工作電極磁鐵當磁性微粒流經電極表面時，磁性微粒被安裝在工作電極下磁鐵吸附于電極表面。RURU電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理2.電化學發(fā)光反應工作電極磁鐵同時，含有三丙胺（TPA）緩沖液流入，未結合的標記抗體等被沖走。RUTPATPATPATPATPATPARU電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理2.電化學發(fā)光反應工作電極磁鐵與此同時電極加壓，啟動電化學發(fā)光反應，使三聯(lián)吡啶釕和三丙胺（TPA）在電極表面進行電子轉移，產生電化學發(fā)光RUTPARU2+e-RU3+e-電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理2.電化學發(fā)光反應工作電極磁鐵RUTPARU2+RU3+H++e-RU3+與此同時電極加壓，啟動電化學發(fā)光反應，使三聯(lián)吡啶釕和三丙胺（TPA）在電極表面進行電子轉移，產生電化學發(fā)光電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理3.光信號檢測工作電極磁鐵反應釋放出的光信號通過光電倍增管測量其光強度，并計算出被分析物的相應濃度。RUTPARU2+光電倍增管電化學發(fā)光免疫試驗檢測原理4.檢測完畢工作電極磁鐵終止電壓，撤去磁場，蠕動泵將清洗液泵進流動室清洗電極表面，準備下一次檢測。RUTPA光電倍增管清洗液電化學發(fā)光免疫試驗總結工作原理：電化學發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標記抗體（抗原）,與相應配體發(fā)生特異的結合反應后進入流動測量室，電發(fā)光過程被啟動。特點：電化學發(fā)光免疫測定有諸多特點，三聯(lián)吡啶釕在電場中因不斷得到三丙胺提供的電子，可周而復始地發(fā)光，持續(xù)時間長，信號強度高，容易測定容易控