常規(guī)培養(yǎng)基的制作

常規(guī)培養(yǎng)基制作

疾控中心歲源E-mail：Tel：QQ：37316315現(xiàn)在是1頁\一共有81頁\編輯于星期四第一節(jié)基本理論培養(yǎng)基的定義：培養(yǎng)基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，由人工配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)，它專供微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存用。培養(yǎng)基的用途：主要用于繁殖及分離純化細(xì)菌、傳代和保存菌種、鑒別細(xì)菌種屬、研究細(xì)菌生理及生化特性、制造菌苗、疫苗和其他微生物制劑等?，F(xiàn)在是2頁\一共有81頁\編輯于星期四一、培養(yǎng)基的分類1.按用途分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基現(xiàn)在是3頁\一共有81頁\編輯于星期四基礎(chǔ)培養(yǎng)基含細(xì)菌所需最基本營養(yǎng)成分，可供大多數(shù)細(xì)菌生長。常用的如含適量蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽、的營養(yǎng)肉湯和營養(yǎng)瓊脂。營養(yǎng)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基再加入一些其他營養(yǎng)成分，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等，以滿足營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌生長繁殖所需要的營養(yǎng)?，F(xiàn)在是4頁\一共有81頁\編輯于星期四增菌培養(yǎng)基多為液體培養(yǎng)基，主要目的是增加標(biāo)本中目的菌數(shù)量，以提高目的菌檢出率。選擇性培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入抑制物質(zhì)，使之具有選擇性，有利于目的菌檢出和識別，而抑制其他非目的菌生長或者使其生長不佳?，F(xiàn)在是5頁\一共有81頁\編輯于星期四加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基：分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基：分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基：分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基：分離自養(yǎng)型微生物加入氨基嘌呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基：分離雜交瘤細(xì)胞現(xiàn)在是6頁\一共有81頁\編輯于星期四鑒別培養(yǎng)基利用各種細(xì)菌分解糖類和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同，即生化反應(yīng)能力不同，在培養(yǎng)基中加入特定的作用底物和指示劑，以此來區(qū)別各種細(xì)菌。主要用于檢查各種細(xì)菌的生化反應(yīng)。如伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基可鑒別大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物有機(jī)酸與伊紅—美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈現(xiàn)綠色金屬現(xiàn)在是7頁\一共有81頁\編輯于星期四大腸桿菌EMB平板現(xiàn)在是8頁\一共有81頁\編輯于星期四沙門氏菌BS瓊脂現(xiàn)在是9頁\一共有81頁\編輯于星期四沙門氏菌XLD（木糖賴氨酸去氧膽酸鹽）瓊脂現(xiàn)在是10頁\一共有81頁\編輯于星期四顯色培養(yǎng)基細(xì)菌在生長繁殖過程中可合成和釋放某些特異性酶，按酶的特性，選用相應(yīng)底物和指示劑，將其配制在相關(guān)培養(yǎng)基中。根據(jù)細(xì)菌反應(yīng)后出現(xiàn)的菌落顏色變化，確定待分離可疑菌株，有助于細(xì)菌快速診斷?，F(xiàn)在是11頁\一共有81頁\編輯于星期四副溶血性弧菌現(xiàn)在是12頁\一共有81頁\編輯于星期四副溶API20E現(xiàn)在是13頁\一共有81頁\編輯于星期四2.按物理性狀分類液體培養(yǎng)基流體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基現(xiàn)在是14頁\一共有81頁\編輯于星期四液體培養(yǎng)基：不含凝固劑，利于菌體的快速繁殖、代謝和積累產(chǎn)物流體培養(yǎng)基：含0.05-0.07%瓊脂粉，可降低空氣中氧進(jìn)入培養(yǎng)基的速度，利于一般厭氧菌的生長繁殖半固體培養(yǎng)基：含0.2-0.8%瓊脂粉，多用于細(xì)菌的動力觀察、菌種傳代保存及貯運(yùn)細(xì)菌標(biāo)本材料；固體培養(yǎng)基：含1.5-2%瓊脂，用于細(xì)菌的分離、鑒定、菌種保存及細(xì)菌疫苗制備等多方面現(xiàn)在是15頁\一共有81頁\編輯于星期四液體培養(yǎng)基現(xiàn)在是16頁\一共有81頁\編輯于星期四固體培養(yǎng)基現(xiàn)在是17頁\一共有81頁\編輯于星期四半固體培養(yǎng)基現(xiàn)在是18頁\一共有81頁\編輯于星期四液體培養(yǎng)基：主要用于工業(yè)生產(chǎn)；固體培養(yǎng)基：主要用于分離、鑒定等；半固體培養(yǎng)基：主要用于觀察、保藏菌種?，F(xiàn)在是19頁\一共有81頁\編輯于星期四3.按成分分類合成培養(yǎng)基由化學(xué)物質(zhì)和成分已知的各種物質(zhì)所組成，可以是無機(jī)鹽和有機(jī)物質(zhì)等。天然培養(yǎng)基由化學(xué)物質(zhì)不完全清楚或各批物質(zhì)很難一致的天然物質(zhì)所組成，如蛋白胨、牛肉膏、血液、馬鈴薯等。半合成培養(yǎng)基由不明化學(xué)成分的天然物質(zhì)和已知化學(xué)成分的物質(zhì)組成現(xiàn)在是20頁\一共有81頁\編輯于星期四天然培養(yǎng)基化學(xué)成分不明確，主要用于工業(yè)生產(chǎn)；合成培養(yǎng)基化學(xué)成分明確，主要用于分類、鑒定?，F(xiàn)在是21頁\一共有81頁\編輯于星期四天然培養(yǎng)基：優(yōu)點：取材便利、營養(yǎng)豐富、配制簡便；缺點：營養(yǎng)成分難以控制、實驗結(jié)果的重復(fù)性較差。天然培養(yǎng)基如培養(yǎng)細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）?，F(xiàn)在是22頁\一共有81頁\編輯于星期四合成培養(yǎng)基:優(yōu)點：化學(xué)成分及其含量明確、實驗的可重復(fù)性好；缺點：配制繁瑣、成本較高?，F(xiàn)在是23頁\一共有81頁\編輯于星期四二、培養(yǎng)基的主要成分及其作用1.營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)菌在生長繁殖過程中所需要的營養(yǎng)成分，因細(xì)菌種類不同而異，有的對營養(yǎng)要求不高，僅需碳源、氮源即可；有的則要求較高，除碳源、氮源外，還需要雞蛋、血清、血液等。主要有蛋白胨、牛肉浸液、牛肉浸膏、糖醇類、血液、雞蛋和動物血清、生長因子、無機(jī)鹽類等?，F(xiàn)在是24頁\一共有81頁\編輯于星期四1.1蛋白胨：蛋白胨是培養(yǎng)基中作為氮源應(yīng)用最廣泛的基本成分，它用于合成菌體蛋白質(zhì)、酶類以及細(xì)菌生長繁殖。其特點是易溶于水，吸水性強(qiáng)，故須干燥密封保存。此外，蛋白胨受高熱不凝固，遇酸不沉淀，在培養(yǎng)基中具緩沖作用，并含有各種游離氨基酸，易被細(xì)菌所利用?，F(xiàn)在是25頁\一共有81頁\編輯于星期四蛋白胨是動物或植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶或酸堿分解而產(chǎn)生的中間產(chǎn)物。蛋白質(zhì)消化越徹底，含氨基酸越多，越有利于細(xì)菌生長繁殖。由于蛋白質(zhì)來源不同，消化程度不同，制成的胨質(zhì)量相差很大。通常的商品蛋白胨是由胃蛋白酶消化蛋白質(zhì)而制成的含胨、多肽及多種氨基酸的混合物，可供大多數(shù)細(xì)菌生長需要。其缺點是含某些氨基酸較少。胰蛋白胨是胰蛋白酶在堿性條件下消化蛋白質(zhì)所獲得的分解產(chǎn)物，其中含有很多氨基酸和多肽，特別是富含色氨酸，更適合作靛基質(zhì)試驗用的蛋白胨水?，F(xiàn)在是26頁\一共有81頁\編輯于星期四1.2牛肉浸液牛肉浸液是將新鮮不含脂肪、肌膜、肌腱等精牛肉浸泡煮沸制成的肉汁。包括兩類浸出物。一類為含氮可溶性浸出物（如肌酸、尿酸、腺苷酸、黃嘌呤、核苷酸、尿素、谷氨酸、肌肽等），另一類為非含氮浸出物質(zhì)（如肝糖、磷酸己糖、乳糖、琥珀酸、肌醇、脂肪與無機(jī)鹽等）。牛肉浸液可作為細(xì)菌氮源和碳源，但因含氮物質(zhì)較少，尚不能滿足細(xì)菌生長需要?，F(xiàn)在是27頁\一共有81頁\編輯于星期四1.3牛肉浸膏為牛肉浸液經(jīng)長時間加熱，蒸發(fā)掉水分后濃縮而成的膏狀制品。牛肉浸液中的不耐熱物質(zhì)如糖類等已被破壞，因而其營養(yǎng)價值不如肉浸液，但其因不含糖和使用方便，故可作腸道細(xì)菌鑒別培養(yǎng)基基礎(chǔ)成分?，F(xiàn)在是28頁\一共有81頁\編輯于星期四1.4糖、醇類糖類是細(xì)菌生長繁殖所需的碳源、能源的基本成分。最常用的單糖是葡萄糖、阿拉伯糖等；雙糖是乳糖、蔗糖等；多糖有菊糖和淀粉.醇類有甘露醇、衛(wèi)矛醇等。其他的糖類和醇類主要用于發(fā)酵反應(yīng)以及鑒定細(xì)菌。糖不耐熱，過久的高熱會被破壞，在堿性及與氮源一起高溫情況下，破壞更快，制備這類培養(yǎng)基時，通常不用高溫，并與培養(yǎng)基中其他成分分別滅菌?，F(xiàn)在是29頁\一共有81頁\編輯于星期四1.5血液培養(yǎng)基中加入血液，可增加蛋白質(zhì)、多種氨基酸、糖類、無機(jī)鹽等營養(yǎng)成分，同時還能提供輔酶、血紅素等特殊生長因子，供某些對營養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長繁殖之用。此外，含血液的培養(yǎng)基還可以用于觀察細(xì)菌溶血反應(yīng)，作為細(xì)菌鑒定的一項指標(biāo)?，F(xiàn)在是30頁\一共有81頁\編輯于星期四血平板溶血現(xiàn)象現(xiàn)在是31頁\一共有81頁\編輯于星期四1.6雞蛋和動物血清雞蛋和動物血清對一部分細(xì)菌來說是必須營養(yǎng)成分，可作為養(yǎng)料直接被細(xì)菌利用。常用于制備特殊培養(yǎng)基，如Braid-Praker瓊脂培養(yǎng)結(jié)核桿菌的羅氏培養(yǎng)基和白喉棒狀桿菌的呂氏血清培養(yǎng)基等。此外雞蛋和血清還具有凝固劑作用，便于觀察細(xì)菌菌落形態(tài)和生長情況?，F(xiàn)在是32頁\一共有81頁\編輯于星期四1.7生長因子在細(xì)菌生長繁殖過程中，需要一定的輔助生長因子。生長因子根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)及代謝功能不同分為三大類：維生素、氨基酸和嘌呤與嘧啶。細(xì)菌對這些物質(zhì)需要量不大，但如缺少，某些細(xì)菌就不能生長。通常肝浸液、肉浸液、酵母浸液和血液中含有大部分生長因子，但有時需要另外加入。現(xiàn)在是33頁\一共有81頁\編輯于星期四1.8無機(jī)鹽類制備培養(yǎng)基時常加入氯化鈉和磷酸鹽，這是因為細(xì)菌生長繁殖需要無機(jī)鹽類，如K、Na、Mg、Fe、磷酸鹽、氯化物等。其中，有的需要量極微，如Mn、Cu等。這些無機(jī)離子除作為構(gòu)成菌體的成分外，還是酶的激活劑，并起維持一定滲透壓的作用?，F(xiàn)在是34頁\一共有81頁\編輯于星期四2.水分細(xì)菌細(xì)胞75%-80%由水組成。水是細(xì)菌營養(yǎng)、代謝過程中不可缺少的物質(zhì)；水又是良好的溶劑，培養(yǎng)基中許多營養(yǎng)物質(zhì)均需溶于水才能被細(xì)菌吸收。蒸餾水和離子交換水不含雜質(zhì)，在制備培養(yǎng)基時，一般需使用蒸餾水和離子交換水。無蒸餾水可以用自來水代替，因其中含有某些微量元素，有利于細(xì)菌生長，但應(yīng)先煮沸使部分鹽類沉淀，過濾澄清后再使用。現(xiàn)在是35頁\一共有81頁\編輯于星期四3.凝固物質(zhì)配制固體培養(yǎng)基的凝固物質(zhì)有瓊脂、明膠和蛋白、血清等，最常用瓊脂，特殊目的也可用明膠等。瓊脂是從石花菜等海藻中提取出來的一種膠狀物質(zhì)，屬多糖類，一般不被細(xì)菌分解利用，無營養(yǎng)價值。瓊脂在98攝氏度以上融化，在低于45攝氏度時則凝固成膠凍狀態(tài)。用途不同的培養(yǎng)基中瓊脂含量不同，固體培養(yǎng)基含量為2%-2.5%，半固體培養(yǎng)基瓊脂含量為0.3%-0.5%。現(xiàn)在是36頁\一共有81頁\編輯于星期四4.抑制劑和指示劑抑制劑和指示劑是由于選擇、鑒定和判斷結(jié)果的需要而加入到培養(yǎng)基中的物質(zhì)，并不為細(xì)菌生長繁殖所需。4.1抑制劑加入目的是抑制非檢出菌生長或其少生長，以利于檢出菌生長。根據(jù)所要抑制選擇不同抑制劑。常用抑制劑有膽鹽、煌綠、玫瑰紅酸、亞硫酸鈉、四硫磺酸鹽、疊氮鈉及一些染料和某些抗生素等。在選擇抑制劑時需注意抑制劑應(yīng)具有選擇性抑制作用。現(xiàn)在是37頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2指示劑是為方便了解和觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中糖、醇類物質(zhì)，而在培養(yǎng)基中加入的成分。常用指示劑多為酸堿指示劑，如酚紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、中性紅、甲基紅、堿性復(fù)紅等，還有氧化還原指示劑，如亞甲藍(lán)。此外，一些新的氧化還原指示劑如四氮唑鹽類等，也已廣泛用于細(xì)菌快速培養(yǎng)和鑒定以及快速藥敏試驗方面?，F(xiàn)在是38頁\一共有81頁\編輯于星期四三、培養(yǎng)基配制原則：（1）目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制培養(yǎng)基的種類，因為不同的微生物對培養(yǎng)物質(zhì)的需求不同。（2）營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。（3）pH要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同。細(xì)菌pH為：；放線菌pH為：；真菌pH為：?，F(xiàn)在是39頁\一共有81頁\編輯于星期四第二節(jié)實驗內(nèi)容現(xiàn)在是40頁\一共有81頁\編輯于星期四一、實驗?zāi)康恼莆赵谡婢?、?xì)菌、放線菌分離培養(yǎng)工作中常用的合成和半合成培養(yǎng)基配制的一般原理、方法、程序、環(huán)節(jié)及要求和注意事項?，F(xiàn)在是41頁\一共有81頁\編輯于星期四二、實驗原理培養(yǎng)基的配制是進(jìn)行微生物學(xué)實驗工作的重要基礎(chǔ)。由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而用于培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方組成及配制方法雖各有差異,但一般培養(yǎng)基配制的常規(guī)程序卻大致相同，例如器皿的準(zhǔn)備，培養(yǎng)基的配制與分裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)?，F(xiàn)在是42頁\一共有81頁\編輯于星期四肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種廣泛用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基，屬于半合成培養(yǎng)基。其主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。它們分別提供微生物生長繁殖所需要的碳源、氮源、能源、生長因子和無機(jī)鹽等。培養(yǎng)基都是水溶液，這是因為一切生物細(xì)胞都必須要有水的參與?，F(xiàn)在是43頁\一共有81頁\編輯于星期四高氏一號培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的可溶性淀粉作為碳源和能源，KNO3作為氮源，K2HPO4、MgSO4和FeSO4作為無機(jī)鹽等?，F(xiàn)在是44頁\一共有81頁\編輯于星期四馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)酵母菌和霉菌，為半合成培養(yǎng)基。食品檢測國標(biāo)使用虎紅培養(yǎng)基?，F(xiàn)在是45頁\一共有81頁\編輯于星期四1.培養(yǎng)基的配制過程1.1液體培養(yǎng)基的配制稱量一般可用1/100粗天平稱量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計算各成分的用量然后進(jìn)行準(zhǔn)確稱量。注意：染料、指示劑、膽鹽等物質(zhì)何時加入？調(diào)整pH后。溶化將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水，然后加熱溶解，并不斷用玻璃棒攪動。注意：含銅大于0.3mol/L時，細(xì)菌不易生長；含鐵大于0.14mol/L妨礙細(xì)菌產(chǎn)生毒素?，F(xiàn)在是46頁\一共有81頁\編輯于星期四定容待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。問：如某種藥品用量太少如何稱量？答：可先配置成較濃溶液，然后按比例吸收一定體積溶液，加入到培養(yǎng)基中?，F(xiàn)在是47頁\一共有81頁\編輯于星期四調(diào)PH一般用pH試紙測定培養(yǎng)基pH。用剪刀剪出一段pH紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養(yǎng)基中蘸一下，觀察其pH范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。注意：調(diào)節(jié)pH時，應(yīng)逐漸加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至達(dá)到所需pH為止?，F(xiàn)在是48頁\一共有81頁\編輯于星期四注：一般將培養(yǎng)基pH調(diào)整高出所需值的個pH單位，經(jīng)高壓滅菌后，其pH要降低個單位?，F(xiàn)在是49頁\一共有81頁\編輯于星期四過濾用濾紙或多層紗布過濾培養(yǎng)基。一般無特殊要求時，此步可省去?，F(xiàn)在是50頁\一共有81頁\編輯于星期四1.2固體培養(yǎng)基的配制配制固體培養(yǎng)基時，應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，最后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去的水分?，F(xiàn)在是51頁\一共有81頁\編輯于星期四2.培養(yǎng)基的分裝根據(jù)不同需要，可將已配好的培養(yǎng)基分裝入試管或錐形瓶內(nèi)，分裝時注意不要使培養(yǎng)基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培養(yǎng)基沾污管口或瓶口時，可用鑷子夾一小塊脫脂棉，擦去管口或瓶口的培養(yǎng)基，并將脫脂棉棄去?，F(xiàn)在是52頁\一共有81頁\編輯于星期四2.1試管的分裝取一個玻璃漏斗，裝在鐵架上，漏斗下連一根橡皮管，橡皮管下端再與玻璃管相接，橡皮管的中部加一彈簧夾。分裝時，用左手拿住空試管中部，并將漏斗下的玻璃管嘴插入試管內(nèi)，以右手拇指及食指開放彈簧夾，中指及無名指夾住玻璃嘴，使培養(yǎng)基直接流入試管內(nèi)。注：分裝在不同規(guī)格三角燒瓶、試管等容器中，分裝量不宜超過容器的2/3，否則會溢出?，F(xiàn)在是53頁\一共有81頁\編輯于星期四裝入試管培養(yǎng)基的量，視試管大小及需要而定。若所用試管大小為15*150mm時，液體培養(yǎng)基可分裝至試管高度1/4左右為宜；如分裝固體或半固體培養(yǎng)基時，瓊脂完全融化后，應(yīng)趁熱分裝于試管中?，F(xiàn)在是54頁\一共有81頁\編輯于星期四2.2錐形瓶的分裝用于振蕩培養(yǎng)微生物時，可在250ml錐形瓶中加入50ml的液體培養(yǎng)基；若用于制作平板培養(yǎng)基時，可在250ml錐形瓶中加入150ml培養(yǎng)基，然后再加入3g瓊脂粉（按2%計算）。滅菌時瓶中瓊脂粉同時被融化?，F(xiàn)在是55頁\一共有81頁\編輯于星期四3.棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎為了培養(yǎng)好氧性微生物，需提供優(yōu)良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必須對通入試管或錐形瓶內(nèi)空氣先進(jìn)行過濾，除菌。通常方法是在試管及錐形瓶口加上棉花塞等?，F(xiàn)在是56頁\一共有81頁\編輯于星期四3.1試管棉塞的制作制棉塞時，應(yīng)選取用大小，厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的圓孔中，用右手食指將棉花從中央壓入圓孔中制成棉塞，然后直接壓入試管或錐形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊法制作棉塞。制作的棉塞應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準(zhǔn)。棉塞的2/3在試管內(nèi)，1/3在試管外?，F(xiàn)在是57頁\一共有81頁\編輯于星期四將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或蓋好管帽的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用鉛筆注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。滅菌待用?，F(xiàn)在是58頁\一共有81頁\編輯于星期四3.2錐形瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進(jìn)行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包上8層紗布或蓋好培養(yǎng)容器封口膜的錐形瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線捆好，滅菌待用?，F(xiàn)在是59頁\一共有81頁\編輯于星期四4.培養(yǎng)基的滅菌下一章節(jié)詳述?，F(xiàn)在是60頁\一共有81頁\編輯于星期四5.斜面和平板的制作5.1斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱傾斜固定，凝固后即成斜面。斜面長度不超過試管長度1/2為宜。如制作半固體或固體深層培養(yǎng)基時，滅菌后則應(yīng)垂直放置至冷凝?，F(xiàn)在是61頁\一共有81頁\編輯于星期四葡萄糖：乳糖＝1：9下黃上不黃為分解葡萄糖，不分解乳糖上下均黃為分解葡萄糖、乳糖上下均不黃為非發(fā)酵菌中間變?yōu)楹谏珵楫a(chǎn)H2S現(xiàn)在是62頁\一共有81頁\編輯于星期四5.2平板的制作將裝在錐形瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，冷卻至50攝氏度左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時，皿蓋上冷凝水太多，溫度低于50攝氏度，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應(yīng)在酒精燈旁進(jìn)行，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶的底部或試管，左手同時用小指和手掌將棉塞打開，灼瓶口。用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫。置于桌上，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿。使培養(yǎng)基均勻分布于整個平皿中，冷凝后即成平板?，F(xiàn)在是63頁\一共有81頁\編輯于星期四三、實驗材料3.1藥品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、酵母膏、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4?7H2O和FeSO4?7H2O、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂等?，F(xiàn)在是64頁\一共有81頁\編輯于星期四3.2溶液1mol/LNaOH、1mol/LHCl?，F(xiàn)在是65頁\一共有81頁\編輯于星期四3.3儀器天平、高壓蒸汽滅菌器?，F(xiàn)在是66頁\一共有81頁\編輯于星期四3.4玻璃器皿移液管、試管、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等?，F(xiàn)在是67頁\一共有81頁\編輯于星期四3.5其他常用器皿藥匙、pH試紙、稱量紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等?，F(xiàn)在是68頁\一共有81頁\編輯于星期四四、實驗內(nèi)容4.1肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基成分牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15-20g水1000mlPh7.2現(xiàn)在是69頁\一共有81頁\編輯于星期四配制方法（1）稱量及融化分別稱取蛋白胨和NaCl的所需量，置于燒杯中，加入所需水量的2/3左右的蒸餾水，用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一燒杯中，進(jìn)行稱量。然后加入少量蒸餾水于小燒杯中，加熱融化。倒入上述燒杯中。將燒杯置于石棉網(wǎng)上加熱，用玻璃棒攪拌，使藥品全部融化?，F(xiàn)在是70頁\一共有81頁\編輯于星期四（2）調(diào)Ph待溶液冷卻至室溫時，用1mol/lNaOH溶液調(diào)pH至7.2。（3）定容將溶液倒入量筒中，補(bǔ)充水量至所需體積。（4）加瓊脂加入所需量的瓊脂，加熱融化，補(bǔ)充失水。（5）分裝、加塞、包扎。（6）高壓蒸汽滅菌0.1MPa滅菌20min?，F(xiàn)在是71頁\一共有81頁\編輯于星期四4.2高氏合成一號培養(yǎng)基4.3馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基現(xiàn)在是72頁\一共有81頁\編輯于星期四4.4培養(yǎng)基使用注意事項配制培養(yǎng)基所用的化學(xué)藥品，均應(yīng)化學(xué)純凈。配制培養(yǎng)基時各種成分應(yīng)準(zhǔn)確稱量。培養(yǎng)基的酸堿度，必須準(zhǔn)確測定，特別對含有指示劑的培養(yǎng)基；測定酸堿度須于冷卻后測定為準(zhǔn)。制備的培養(yǎng)基必須保持澄清，以便細(xì)菌生長后，容易觀察。液體培養(yǎng)基沉淀法和濾紙法；固體培養(yǎng)基可用脫脂棉花濾清?，F(xiàn)在是73頁\一共有81頁\編輯于星期四培養(yǎng)基使用注意事項培養(yǎng)基必須達(dá)到完全無菌的目的。要注意有些