環(huán)境化學(xué)試驗教程

本文格式為Word版，下載可任意編輯——環(huán)境化學(xué)試驗教程試驗一水體富營養(yǎng)化程度的評價--水體中總磷和葉綠素含量的測定前言

富營養(yǎng)化(eutrophication)是指在人類活動的影響下，生物所需的氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)大量進(jìn)入湖泊、河口、海灣等緩流水體，引起藻類及其他浮游生物迅速繁殖，水體溶解氧量下降，水質(zhì)惡化，魚類及其他生物大量死亡的現(xiàn)象。在自然條件下，湖泊也會從貧營養(yǎng)狀態(tài)過渡到富營養(yǎng)狀態(tài)，沉積物不斷增多，先變?yōu)檎訚桑笞優(yōu)殛懙?。這種自然過程十分緩慢，常需幾千年甚至上萬年。而人為排放含營養(yǎng)物質(zhì)的工業(yè)廢水和生活污水所引起的水體富營養(yǎng)化現(xiàn)象，可以在短期內(nèi)出現(xiàn)。水體富營養(yǎng)化后，即使切斷外界營養(yǎng)物質(zhì)的來源，也很難自凈和恢復(fù)到正常水平。水體富養(yǎng)化嚴(yán)重時，湖泊可被某些繁生植物及其殘骸淤塞，成為沼澤甚至干地。局部海區(qū)可變成“死海〞，或出現(xiàn)“赤潮〞現(xiàn)象。植物營養(yǎng)物質(zhì)的來源廣、數(shù)量大，有生活污水、農(nóng)業(yè)面源、工業(yè)廢水、垃圾等。每人每天帶進(jìn)污水中的氮約50g。生活污水中的磷主要來源于洗滌廢水，而施入農(nóng)田的化肥有50%～80%流入江河、湖海和地下水體中。

大量參數(shù)可用作水體富營養(yǎng)化的指標(biāo)，常用的是總磷、葉綠素-a含量和初級生產(chǎn)率的大?。ㄒ姳?-1）。

一、試驗?zāi)康?/p>

1.把握總磷、葉綠素-a及初級生產(chǎn)率的測定原理及方法。2.評價水體的富營養(yǎng)化狀況。二、儀器設(shè)備及試劑1.儀器

(1)可見分光光度計。

(2)移液管：1mL、2mL、10mL。(3)容量瓶：100mL、250mL。

(4)錐型瓶：250mL。(5)比色管：25mL。(6)BOD瓶：250mL。(7)具塞小試管：10mL。

(8)玻璃纖維濾膜、剪刀、玻棒、夾子(9)多功能水質(zhì)檢測儀2.試劑

(1)過硫酸銨（固體）。(2)濃硫酸。

(3)1mol/L硫酸溶液。(4)2mol/L鹽酸溶液。(5)6mol/L氫氧化鈉溶液。

(6)1%酚酞：1g酚酞溶于90mL乙醇中，加水至100mL。(7)丙酮:水（9:1）溶液。

(8)酒石酸銻鉀溶液：將4.4gK(SbO)C4H4O6·1/2H2O溶于200mL蒸餾水中，用棕色瓶在4℃時保存。

(9)鉬酸銨溶液：將20g(NH4)6MO7O24·4H2O溶于500mL蒸餾水中，用塑料瓶在4℃時保存。

(10)抗壞血酸溶液：0.1mol/L（溶解1.76g抗壞血酸于100mL蒸餾水中，轉(zhuǎn)入棕色瓶，若在4℃時保存，可維持一個星期不變）。(11)混合試劑：50mL2mol/L硫酸、5mL酒石酸銻鉀溶液、15mL鉬酸銨溶液和30mL抗壞血酸溶液。混合前，先讓上述溶液達(dá)到室溫，并按上述次序混合。在參與酒石酸銻鉀或鉬酸銨后，如混合試劑有渾濁，須搖動混合試劑，并放置幾分鐘，至澄清為止。若在4℃下保存，可維持1個星期不變。

(12)磷酸鹽儲存液（1.00mg/mL磷）：稱取1.098gKH2PO4，溶解后轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得1.00mg/mL磷溶液。

(13)磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液：量取1.00mL儲存液于100mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得磷含

量為10μg/mL的工作液。

三、試驗過程

1.磷的測定(1)原理

在酸性溶液中，將各種形態(tài)的磷轉(zhuǎn)化成磷酸根離子(PO4)。隨之用鉬酸銨和酒石酸銻鉀與之反應(yīng)，生成磷鉬銻雜多酸，再用抗壞血酸把它還原為深色鉬藍(lán)。

砷酸鹽與磷酸鹽一樣也能生成鉬藍(lán)，0.1g/mL的砷就會干擾測定。六價鉻、二價銅和亞硝酸鹽能氧化鉬藍(lán)，使測定結(jié)果偏低。(2)步驟

①水樣處理：水樣中如有大的微粒，可用攪拌器攪拌2～3min，以至混合均勻。量取100mL水樣（或經(jīng)稀釋的水樣）2份，分別放入250mL錐型瓶中，另取100mL蒸餾水于250mL錐型瓶中作為對照，分別參與1mL2mol/LH2SO4，3g(NH4)2S2O8，微沸約1h，補(bǔ)加蒸餾水使體積為25～50mL（如錐型瓶壁上有白色凝聚物，應(yīng)用蒸餾水將其沖入溶液中），再加熱數(shù)分鐘。冷卻后，加一滴酚酞，并用6mol/LNaOH將溶液中和至微紅色。再滴加2mol/LHCl使粉紅色恰好褪去，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，移取25mL至50mL比色管中，加1mL混合試劑，搖勻后，放置10min，加水稀釋至刻度再搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，用1cm比色皿，于波長880nm處測定吸光度（若分光光度計不能測定880nm處的吸光度，可選擇710nm波長）。②標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別吸取10μg/mL磷的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL于50mL比色管中，加水稀釋至約25mL，參與1mL混合試劑，搖勻后放置10min，加水稀釋至刻度，再搖勻，10min后，以試劑空白作參比，用1cm比色皿，于波長880nm處測定吸光度。（3）結(jié)果處理

由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷的含量，按下式計算水中磷的含量：

ρP=Wp/V

式中，ρP為水中磷的含量，g/L；Wp為由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得磷含量，μg；V為測定時吸取水樣的體積（本試驗V=25.00mL）。2.生產(chǎn)率的測定(1)原理

綠色植物的生產(chǎn)率是光合作用的結(jié)果，與氧的產(chǎn)生量成比例。因此測定水體中的氧可看作對生產(chǎn)率的測量。然而在任何水體中都有呼吸作用產(chǎn)生，要消耗一部分氧。因此在計算生

3-

產(chǎn)率時，還必需測量因呼吸作用所損失的氧。本試驗用測定2只無色瓶和2只深色瓶中一致樣品內(nèi)溶解氧變化量的方法測定生產(chǎn)率。此外，測定無色瓶中氧的減少量，提供校正呼吸作用的數(shù)據(jù)。(2)試驗過程

①取四只BOD瓶，其中兩只用鋁箔包裹使之不透光，這些分別記作“亮〞和“暗〞瓶。從一水體上半部的中間取出水樣，測量水溫柔溶解氧。假使此水體的溶解氧未過飽和，則記錄此值為ρOi，然后將水樣分別注入一對“亮〞和“暗〞瓶中。若水樣中溶解氧過飽和，則緩緩地給水樣通氣，以除去過剩的氧。重新測定溶解氧并記作ρOi。按上法將水樣分別注入一對“亮〞和“暗〞瓶中。

②從水體下半部的中間取出水樣，按上述方法同樣處理。

③將兩對“亮〞和“暗〞瓶分別懸掛在與取水樣一致的水深位置，調(diào)整這些瓶子，使陽光能充分照射。一般將瓶子暴露幾個小時，暴露期為清早至中午，或中午至黃昏，也可清早到黃昏。為便利起見，可選擇較短的時間。

④暴露期終止即取出瓶子，逐一測定溶解氧，分別將“亮〞和“暗〞瓶的數(shù)值記為ρ和ρOd。(3)結(jié)果處理

①呼吸作用：氧在暗瓶中的減少量R=ρ

Oi

OL

-ρOd

凈光合作用：氧在亮瓶中的增加量Pn=ρOl-ρOi總光合作用：Pg=呼吸作用+凈光合作用=（ρ②計算水體上下兩部分值的平均值。

③通過以下公式計算來判斷每單位水域總光合作用和凈光合作用的日速率：i.把暴露時間修改為日周期

日Pg′(mgO2·L·日)=Pg×每日光周期時間/暴露時間

ii.將生產(chǎn)率單位從mgO2/L改為mgO2/m，這表示1m水面下水柱的總產(chǎn)生率。為此必需知道產(chǎn)生區(qū)的水深：

日Pg\2·m·日)=Pg×每日光周期時間/暴露時間×10×水深(m)10是體積濃度mg/L換算為mg/m的系數(shù)。

ⅲ.假設(shè)全日24h呼吸作用保持不變，計算日呼吸作用

3

3

-2

-1

3

2

2

-1

-1

Oi

-ρOd）+（ρOl-ρOi）=ρOl-ρOd

日R（mgO2·m·日）=R×24/暴露時間（h）×10×水深（m）ⅳ、計算日凈光合作用：

日Pn（mgO2·L·日）=日Pg–日R

④假設(shè)符合光合作用的理想方程（CO2+H2O→CH2O+O2），將生產(chǎn)率的單位轉(zhuǎn)換成固定碳的單位：

日Pm（mgC·m·日）=日Pn（mgO2m·日）×12/323.葉綠素-a的測定

(1)原理

測定水體中的葉綠素-a的含量，可估計該水體的綠色植物存在量。將色素用丙酮萃取，測量其吸光度值，便可以測得葉綠素-a的含量。

(2)試驗過程

①將100～500mL水樣經(jīng)玻璃纖維濾膜過濾，記錄過濾水樣的體積。將濾紙卷成香煙狀，放入小瓶或離心管。加10mL或足以使濾紙吞噬的90%丙酮液，記錄體積，塞住瓶塞，并在4℃下暗處放置4h。如有渾濁，可離心萃取。將一些萃取液倒入1cm玻璃比色皿，加比色皿蓋，以試劑空白為參比，分別在波長665nm和750nm處測其吸光度。

②加1滴2mol/L鹽酸于上述兩只比色皿中，混勻并放置1min，再在波長665nm和750nm處測定吸光度。

(3)結(jié)果處理

酸化前：A=A665-A750，酸化后：Aa=A665a-A750a

在665nm處測得吸光度減去750nm處測得值是為了校正渾濁液。

用下式計算葉綠素-a的濃度（μg/L）：葉綠素-a=29(A-Aa)V萃取液/V樣品，式中，V萃取液，萃取液體積，ml；V樣品，萃取液體積，ml。

根據(jù)測定結(jié)果，并查閱有關(guān)資料，評價水體富營養(yǎng)化狀況。

-2

-1

-2

-1

-1

-1

-2-13

四、思考題

1.水體中氮、磷的主要來源有哪些？2.在計算日生產(chǎn)率時，有幾個主要假設(shè)？3.被測水體的富營養(yǎng)化狀況如何？

試驗二水體自凈程度的指標(biāo)--“三氮〞的測定

前言

各種形態(tài)的氮相互轉(zhuǎn)化和氮循環(huán)的平衡變化是環(huán)境化學(xué)和生態(tài)系統(tǒng)研究的重要內(nèi)容之一。水體中氮產(chǎn)物的主要來源是生活污水和某些工業(yè)廢水及農(nóng)業(yè)面源。當(dāng)水體受到含氮有機(jī)物污染時，其中的含氮化合物由于水中微生物和氧的作用，可以逐步分解氧化為無機(jī)的氨

+--(NH3)或銨(NH4)、亞硝酸鹽(NO2)、硝酸鹽(NO3)等簡單的無機(jī)氮化物。氨和銨中的氮稱

為氨氮；亞硝酸鹽中的氮稱為亞硝酸鹽氮；硝酸鹽中的氮稱為硝酸鹽氮。尋常把氨氮、亞硝酸鹽氮和硝酸鹽氮稱為三氮。這幾種形態(tài)氮的含量都可以作為水質(zhì)指標(biāo)，分別代表有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮的各個不同階段。在有氧條件下，氮產(chǎn)物的生物氧化分解一般按氨或銨、亞硝酸鹽、硝酸鹽的順序進(jìn)行，硝酸鹽是氧化分解的最終產(chǎn)物。隨著含氮化合物的逐步氧化分解，水體中的細(xì)菌和其它有機(jī)污染物也逐步分解破壞，因而達(dá)到水體的凈化作用。

有機(jī)氮、氨氮、亞硝酸鹽氮和硝酸鹽氮的相對含量，在一定程度上可以反映含氮有機(jī)物污染的時間長短，對了解水體污染歷史以及分解趨勢和水體自凈狀況等有很高的參考價值，見表6-1。目前應(yīng)用較廣的測定三氮方法是比色法，其中最常用的是：納氏試劑比色法測定氨氮，鹽酸萘乙二胺比色法測定亞硝酸鹽氮，二磺酸酚比色法測定硝酸鹽氮。

一、試驗?zāi)康?/p>

1.把握測定三氮的基本原理和方法。

2.解測定三氮對環(huán)境化學(xué)研究的作用和意義。

二、儀器器材

(1)玻璃蒸餾裝置。(2)pH計。(3)恒溫水浴。(4)分光光度計。(5)電爐：220V/1KW。(6)比色管：50mL。

(7)陶瓷蒸發(fā)皿：100或200mL。

(8)移液管：1mL、2mL、5mL。容量瓶：250mL。

三、試驗步驟

1.氨氮的測定——納氏試劑比色法

(1)原理

氨與納氏試劑反應(yīng)可生成黃色的絡(luò)合物，其色度與氨的含量成正比，可在425nm波長下比色測定，檢出限為0.02μg/mL。如水樣污染嚴(yán)重，需在pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中預(yù)蒸餾分開。(2)試劑

①不含氨的蒸餾水：水樣稀釋及試劑配制均用無氨蒸餾水。配制方法包括蒸餾法（每升蒸餾水中參與0.1mL濃硫酸，進(jìn)行重蒸餾，流出物接受于玻璃容器中）和離子交換法（讓蒸餾水通過強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂來制備較大量的無氨水）。②磷酸鹽緩沖溶液（pH為7.4）：稱14.3g磷酸二氫鉀和68.8g磷酸氫二鉀，溶于水中并稀釋至1L。配制后用pH計測定其pH值，并用磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀調(diào)至pH為7.4。

③吸收液：2%硼酸或0.01mol/L硫酸。2%硼酸溶液：溶解20g硼酸于水中，稀釋至1L。

0.01mol/L硫酸：量取20mL0.5mol/L的硫酸，用水稀釋至1L。

④納氏試劑：稱取5g碘化鉀，溶于5mL水中，分別參與少量氯化汞（HgCl2）溶液（2.5gHgCl2溶于40mL水中，必要時可微熱溶解），不斷攪拌至微有朱紅色沉淀為止。冷卻后參與氫氧化鉀溶液（15g氫氧化鉀溶于30mL水中），充分冷卻，加水稀釋至100mL。靜置一天，取上層清液貯于塑料瓶中，蓋緊瓶蓋，可保存數(shù)月。

⑤酒石酸鉀鈉溶液：稱取50g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6·4H2O）溶于水中，加熱煮沸以驅(qū)除氨，冷卻后稀釋至100mL。

⑥氨標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取3.819g無水氯化銨（NH4Cl）（預(yù)先在100℃枯燥至衡重），溶于水中，轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，稀釋至刻度，即配得1.00mgNH3-N/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲存液。取此溶液10.00mL稀釋至1000mL，即為10μgNH3-N/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。(3)步驟

較清潔水樣可直接測定，如水樣受污染一般按以下步驟進(jìn)行。

①水樣蒸餾：為保證蒸餾裝置不含氨，須先在蒸餾瓶中加200mL無氨水，加10mL磷酸鹽緩沖溶液、幾粒玻璃珠，加熱蒸餾至流出液中不含氨為止（用納氏試劑檢驗），冷卻。然后將此蒸餾瓶中的蒸餾液傾出（但仍留下玻璃珠），量取水樣200mL，放入此蒸餾瓶中（如預(yù)先試驗水樣含氨量較大，則取適量的水樣，用無氨水稀釋至200mL，然后參與10mL磷酸鹽緩沖液）。另準(zhǔn)備一只250mL的容量瓶，移入50mL吸收液（吸收液為0.01mol/L硫酸或2%硼酸溶液），然后將導(dǎo)管末端浸入吸收液中，加熱蒸餾，蒸餾速度為每分鐘6～8mL，至少收集150mL餾出液，蒸餾至最終1～2min時，把容量瓶放低，使吸收液的液面脫離冷凝管出口，再蒸餾幾分鐘以洗凈冷凝管和導(dǎo)管，用無氨水稀釋至250mL，混勻，以備比色測定。

②測定：如為較清潔的水樣，直接取50mL澄清水樣置于50mL比色管中。一般水樣則取用上述方法蒸餾出的水樣50mL，置于50mL比色管中。若氨氮含量太高可酌情取適量水樣用無氨水稀釋至50mL。

另取8支50mL比色管，分別參與銨標(biāo)準(zhǔn)溶液（含氨氮10μg/mL）0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00、10.00mL，加無氨水稀釋至刻度。

在上述各比色管中，分別參與1.0mL酒石酸鉀鈉，搖勻，再加1.5mL納氏試劑，搖勻放置10min，用1cm比色管，在波長425nm處，以試劑空白為參比測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得水樣中氨氮的含量（μg/mL）。2.亞硝酸鹽氮的測定—鹽酸萘乙二胺比色法(1)原理

在pH2.0～2.5時，水中亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸生成重氮鹽，再與鹽酸萘乙二胺偶聯(lián)生成紅色染料，最大吸收波長為543nm，其色度深淺與亞硝酸鹽含量成正比，可用比色法測定，檢出限為0.005μg/mL，測定上限為0.1μg/mL。(2)試劑

①不含亞硝酸鹽的蒸餾水：蒸餾水中參與少量高錳酸鉀晶體，使呈紅色，再加氫氧化鋇（或氫氧化鈣），使呈堿性，重蒸餾。棄去50mL初餾液，收集中間70%的無錳部分。也可于每升蒸餾水中參與1mL濃硫酸和0.2mL硫酸錳溶液（每100mL蒸餾水中含有36.4gMnSO4·H2O），及1～3mL0.04%高錳酸鉀溶液使呈紅色，然后重蒸餾。②亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲存液：稱取1.232g亞硝酸鈉溶于水中，參與1mL氯仿，稀釋至1000mL。此溶液每毫升含亞硝酸鹽氮約為0.25mg。由于亞硝酸鹽氮在濕空氣中易被氧化，所以儲存液需標(biāo)定。

標(biāo)定方法：吸取50.00mL0.050mol/L高錳酸鉀溶液，加5mL濃硫酸及50.00mL亞硝酸鈉儲存液于300mL具塞錐型瓶中（加亞硝酸鈉貯備液時需將吸管插入高錳酸鉀溶液液面以下）混合均勻，置于水浴中加熱至70～80℃，按每次10.00mL的量參與足夠的0.050mol/L草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，使高錳酸鉀溶液褪色并過量，記錄草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液用量（V2）；再高錳酸鉀溶液滴定過量的草酸鈉到溶液呈微紅色，記錄高錳酸鉀溶液用量（V1）。用50mL不含亞硝酸鹽的水代替亞硝酸鈉貯備液，如上操作,用草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定高錳酸鉀溶的濃度，按下式計算高錳酸鉀溶液濃度（mol/L）：ρ1/5KMnO4=0.0500*V4/V3

按下式計算亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)儲存液的濃度：

ρ

亞硝酸鹽氮

=(V1*ρ

1/5KMnO4

-0.0500*V2)*7.00*1000/50.00

式中，ρ1/5KMnO4是經(jīng)標(biāo)定的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；V1是滴定標(biāo)準(zhǔn)儲存液時，參與高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液總量，mL；V2是滴定亞硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)儲存液時，參與草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液總量，mL；V3是滴定水時，參與高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液總量，mL；V4是滴定水時，參與草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液總量，mL；7.00是亞硝酸鹽氮（1/2N）的摩爾質(zhì)量，g/mol；50.00是亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)

儲存液取用量，mL；0.0500是草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（1/2Na2C2O4，0.0500mol/L）。③亞硝酸鹽使用液：臨用時將標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制成每毫升含1.0μg的亞硝酸鹽氮的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

④草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1/2Na2C2O4，0.0500mol/L）：稱取3.350g經(jīng)105℃枯燥2h的優(yōu)級純無水草酸鈉溶于水中，轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中加水稀釋至刻度。

⑤高錳酸鉀溶液（1/5KMnO4，0.050mol/L）：溶解1.6g高錳酸鉀于約1.2L水中，煮沸0.5h至1h，使體積減小至1000mL左右，放置過夜，用G3號熔結(jié)玻璃漏斗過濾后，濾液貯于棕色試劑瓶中，用上述草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定其確鑿濃度。

⑥氫氧化鋁懸浮液：溶解125g硫酸鋁鉀[KAl(SO4)2·12H2O]或硫酸鋁銨[NH4Al(SO4)2·12H2O]于1L水中，加熱到60℃，在不斷攪拌下漸漸參與55mL濃氨水，放置約1h，轉(zhuǎn)入試劑瓶內(nèi)，用水反復(fù)洗滌沉淀，至洗液中不含氨、氯化物、硝酸鹽和亞硝酸鹽為止。澄清后，把上層清液盡量全部傾出，只留濃的懸浮物，最終加100mL水。使用前應(yīng)振蕩均勻。⑦鹽酸萘乙二胺顯色劑：50mL冰醋酸與900mL水混合，參與5.0g對氨基苯磺酸，加熱使其全部溶解，再參與0.05g鹽酸萘乙二胺，攪拌溶解后用水稀釋至1L。溶液無色，貯存于棕色瓶中，在冰箱中保存可穩(wěn)定一個月（當(dāng)有顏色時應(yīng)重新配制）。(3)步驟

①水樣如有顏色和懸浮物，可在每100mL水樣中參與2mL氫氧化鋁懸浮液，攪拌后，靜置過濾，棄去25mL初濾液。

②取50.00mL澄清水樣于50mL比色管中（如亞硝酸鹽氮含量高，可酌情少取水樣，用無亞硝酸鹽蒸餾水稀釋至刻度）。③取7支50mL比色管，分別參與含亞硝酸鹽氮1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL，用水稀釋至刻度。

④在上述各比色管中分別參與2mL顯色劑，20min后在540nm處，用2cm比色皿，以試劑空白作參比測定其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得水樣中亞硝酸鹽氮的含量（μg/mL）。3.硝酸鹽氮的測定—二磺酸酚比色法(1)原理

濃硫酸與酚作用生成二磺酸酚，在無水條件下二磺酸酚與硝酸鹽作用生成二磺酸硝基酚，二磺酸硝基酚在堿性溶液中發(fā)生分子重排生成黃色化合物，最大吸收波長在410nm處，利用其色度和硝酸鹽含量成正比，可進(jìn)行比色測定。少量的氯化物即能引起硝酸鹽的損失，使結(jié)果偏低?？杉恿蛩徙y，使其形成氯化銀沉淀，過濾去除，以消除氯化物的干擾，（允許氯離子存在的最高濃度為10μg/mL，超過此濃度就要干擾測定）。亞硝酸鹽氮含量超過0.2μg/mL時，將使結(jié)果偏高，可用高錳酸鉀將亞硝酸鹽氧化成硝酸鹽，再從測定結(jié)果中減去

亞硝酸鹽的含量。本法的檢出限為0.02μg/mL硝酸鹽氮，檢測上限為2.0μg/mL。(2)試劑

①二磺酸酚試劑：稱取15g精制苯酚，置于250mL三角燒瓶中，參與100mL濃硫酸，瓶上放一個漏斗，置沸水浴內(nèi)加熱6h，試劑應(yīng)為淺棕色稠液，保存于棕色瓶內(nèi)。

②硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲存液：稱取0.7218g分析純硝酸鉀（經(jīng)105℃烘4h），溶于水中，轉(zhuǎn)入1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。此溶液含硝酸鹽氮100μg/mL。如參與2mL氯仿保存，溶液可穩(wěn)定半年以上。

③硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液：確鑿移取100mL硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲存液，置于蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，然后參與4.0mL二磺酸酚，用玻棒磨擦蒸發(fā)皿內(nèi)壁，靜置10min，參與少量蒸餾水，移入500mL

-容量瓶中，用蒸餾水稀釋至標(biāo)線，即為20μgNO3-N/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液(相當(dāng)于88.54μgNO3)。④硫酸銀溶液：稱取4.4g硫酸銀，溶于水中，稀釋至1L，于棕色瓶中避光保存。此溶

-液1.0mL相當(dāng)于1.0mg氯（Cl）。⑤高錳酸鉀溶液（1/5KMnO4，0.100mol/L）：稱取0.3g高錳酸鉀，溶于蒸餾水中，并稀釋至1L。

⑥乙二胺四乙酸二鈉溶液：稱取50g乙二胺四乙酸二鈉，用20mL蒸餾水調(diào)成糊狀，然后參與60mL濃氨水，充分混合，使之溶解。

⑦碳酸鈉溶液（1/2Na2CO3，0.100mol/L）：稱取5.3g無水碳酸鈉，溶于1L水中。試驗用水預(yù)先要加高錳酸鉀重蒸餾，或用去離子水。(3)步驟

①標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別吸取硝酸鹽氮標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、4.00mL50mL比色管中，參與1.0mL二磺酸酚，參與3.0mL濃氨水，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。用1mL比色皿，以試劑空白作參比，于波長410nm處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

②樣品的測定

脫色：污染嚴(yán)重或色澤較深的水樣（即色度超過10度），可在100mL水樣中參與2mLAl(OH)3懸浮液。搖勻后，靜置數(shù)分鐘，澄清后過濾，棄去最初濾出的部分溶液（5～10mL）。除去氯離子：先用硝酸銀滴定水樣中的氯離子含量，據(jù)此參與相當(dāng)量的硫酸銀溶液。當(dāng)氯離子含量小于50mg/L時，參與固體硫酸銀。1mg氯離子可與4.4mg硫酸銀作用。取50mL水樣，參與一定量的硫酸銀溶液或硫酸銀固體，充分?jǐn)嚢韬?。再通過離心或過濾除去氯化銀沉淀，濾液轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中定容至刻度；也可在80℃水浴中加熱水樣，搖動三角燒瓶，使氯化銀沉淀凝聚，冷卻后用多層慢速濾紙過濾至100mL容量瓶，定容至刻度?？鄢齺喯跛猁}氮影響：如水樣中亞硝酸鹽氮含量超過0.2mg/L，可事先將其氧化為硝酸鹽氮。具體方法如下：在已除氯離子的100mL容量瓶中參與1mL0.5mol/L硫酸溶液，混合

移入蒸餾瓶中加熱蒸餾，收集流出液備用。本試驗用水應(yīng)為無酚水。

注：無酚水應(yīng)貯備于玻璃瓶中，取用時應(yīng)避免與橡膠制品（橡皮塞或乳膠管）接觸。（2）淀粉溶液：稱取1g可溶性淀粉，用少量水調(diào)成糊狀，加沸水至100mL，冷卻，置冰箱保存。

（3）溴酸鉀-溴化鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液（1/6KBrO3濃度=0.1mol/L）：稱取2.784g溴酸鉀溶于水中，參與10g溴化鉀，使其溶解，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。

（4）碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液（1/6KIO3濃度=0.0125mol/L）：稱取預(yù)先在180℃烘干的碘酸鉀0.4458g溶于水中，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。

（5）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（Na2S2O3濃度≈0.0125mol/L）：稱取3.1g硫代硫酸鈉溶于煮沸放冷的水中，參與0.2g碳酸鈉，稀釋至1000mL，臨用前，用碘酸鉀標(biāo)定。標(biāo)定方法：取10.0mL碘酸鉀溶液置于250mL碘量瓶中，加水稀釋至100mL，加1g碘化鉀，再加5mL（1+5）硫酸，加塞，輕輕搖勻。置暗處放置5min，用硫代硫酸鈉溶液滴定至淡黃色，加1mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至蘭色剛褪去為止，記錄硫代硫酸鈉溶液用量。按下式計算硫代硫酸鈉溶液濃度（mol/L）：

CNa2S2O3.5H2O=0.0125*V4/V3

式中，V3—硫代硫酸鈉溶液消耗量，mL；V4—移取碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液量，mL；0.0125—碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)參考溶液濃度，mol/L。

（6）苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲存液：稱取1.00g無色苯酚溶于水中，移入1000mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線。在冰箱內(nèi)保存，至少穩(wěn)定一個月。

標(biāo)定方法：吸取10.00mL苯酚儲存液于250mL碘量瓶中，加水稀釋至100mL，加10.0mL0.1mol/L溴酸鉀-溴化鉀溶液，馬上參與5mL鹽酸，蓋好瓶塞，輕輕搖勻，在暗處放置10min。參與1g碘化鉀，蓋好瓶塞，再輕輕搖勻，在暗處放置5min。用0.0125mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃色，參與1mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至蘭色剛好腿色，記錄用量。同時以水代替苯酚儲存液作空白試驗，記錄硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定用量。苯酚儲存液的濃度由下式計算：

ρ

苯酚

=（V1-V2）*c*15.68/V

式中，V1—空白試驗中硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定用量，mL；V2—滴定苯酚儲存液時，硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定用量，mL；V—取用苯酚儲存液體積，mL；c—硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L）；15.68—1/6苯酚摩爾質(zhì)量，g/