藥物分析第二章藥物鑒別試驗(yàn)_第1頁(yè)
藥物分析第二章藥物鑒別試驗(yàn)_第2頁(yè)
藥物分析第二章藥物鑒別試驗(yàn)_第3頁(yè)
藥物分析第二章藥物鑒別試驗(yàn)_第4頁(yè)
藥物分析第二章藥物鑒別試驗(yàn)_第5頁(yè)
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1.取樣2.鑒別3.檢查4.含量測(cè)定5.檢驗(yàn)報(bào)告工作程序藥品檢驗(yàn)工作的基本內(nèi)容1第一頁(yè),共73頁(yè)。鑒別

是根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì),采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)?鑒別方法要求:專(zhuān)屬性強(qiáng)、再現(xiàn)性好、靈敏度高、簡(jiǎn)便快速2第二頁(yè),共73頁(yè)。鑒別

《中國(guó)藥典》鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)方法,僅反應(yīng)藥品某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)的特征,不完全代表對(duì)該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確認(rèn)3第三頁(yè),共73頁(yè)。鑒別試驗(yàn)特點(diǎn)1.已知物的確證試驗(yàn),不是鑒定未知物的組成和結(jié)構(gòu),僅用于證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所標(biāo)示的藥物,而非對(duì)未知物的鑒別。2.鑒別試驗(yàn)是個(gè)別分析不是系統(tǒng)分析(采用靈敏度高專(zhuān)屬性強(qiáng)的方法,試驗(yàn)項(xiàng)目少)3.選用藥物的化學(xué)鑒別反應(yīng),光譜特征,色譜行為,物理常數(shù)等不同方法鑒別同一個(gè)供試品4.鑒別制劑注意消除輔料的干擾4第四頁(yè),共73頁(yè)。

鑒別試驗(yàn)

鑒別試驗(yàn)項(xiàng)目鑒別方法鑒別試驗(yàn)條件鑒別5第五頁(yè),共73頁(yè)。鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目鑒別(一)性狀(二)一般鑒別試驗(yàn)(三)專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)6第六頁(yè),共73頁(yè)。性狀——包括顏色、臭味等應(yīng)有的外觀以及溶解度和物理常數(shù).

是質(zhì)量重要表征之一,在一定程度上反映藥品的純度及療效.7第七頁(yè),共73頁(yè)。1.外觀

指藥物外表感觀和色澤,包括聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭味等性質(zhì)。

如《中國(guó)藥典》對(duì)二巰基丁二鈉的描述為“本品為白色至微黃色的粉末;有類(lèi)似蒜的特臭”。2.溶解度溶解度是藥物的一種物理性質(zhì),在一定程度上反映了藥品的純度。

如磺胺嘧啶“在乙醇或丙酮中微溶,在水中幾乎不溶;在氫氧化鈉試液中易溶,在稀鹽酸中溶解”。

鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目8第八頁(yè),共73頁(yè)。尼莫地平

在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶,在乙醇中溶解,在乙醚中微溶,在水中幾乎不溶。《中國(guó)藥典》9第九頁(yè),共73頁(yè)。

3.物理常數(shù)

物理常數(shù):評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)

藥物鑒別,藥品的純雜程度。

《中國(guó)藥典》收載的物理常數(shù)包括:相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。。鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目10第十頁(yè),共73頁(yè)。

(1)熔點(diǎn):由固體熔化成液體的溫度熔融同時(shí)分解的溫度在熔化時(shí)初熔至全熔的一段溫度。

(2)比旋度:在一定波長(zhǎng)與溫度下,偏振光透過(guò)長(zhǎng)1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度稱(chēng)為比旋度。

反映手性藥物特性及其純度的主要指標(biāo)用途:鑒別藥品純度檢查含量測(cè)定鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目11第十一頁(yè),共73頁(yè)。鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

例1:

溴化新斯的明項(xiàng)下所述:“本品的熔點(diǎn)為171℃~176℃,熔融時(shí)同時(shí)分解”。例2:如維生素C的比旋度測(cè)定:“取本品,精密稱(chēng)定,加水溶解并定量稀釋使成每1ml中約含0.10g的溶液,依法測(cè)定,比旋度為+20.5°至+21.5°”。

12第十二頁(yè),共73頁(yè)。

(3)吸收系數(shù):

在給定的波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下,吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度稱(chēng)為吸收系數(shù)。

表示方法:摩爾吸收系數(shù)百分吸收系數(shù)

用途:

檢查純度測(cè)定制劑含量鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目13第十三頁(yè),共73頁(yè)。依據(jù)某一類(lèi)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征,通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)舞b別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一般鑒別試驗(yàn)14第十四頁(yè),共73頁(yè)。無(wú)機(jī)藥物:根據(jù)陰、陽(yáng)離子(鈉鹽、鈣鹽、硫酸鹽、氯化物)的特殊反應(yīng),并以藥典附錄項(xiàng)下的一般鑒別試驗(yàn)為依據(jù);有機(jī)藥物:多采用典型的官能團(tuán)反應(yīng)(芳香第一胺、水楊酸鹽).鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一般鑒別試驗(yàn)15第十五頁(yè),共73頁(yè)。只能證實(shí)是某一類(lèi)藥物,而不能證實(shí)是哪一種藥物。例如:鈉鹽的焰色試驗(yàn),不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯鉀酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物.只適用于確認(rèn)單一的化學(xué)藥物,對(duì)多種藥物的混合物或有干擾物存在時(shí),不適用。鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一般鑒別試驗(yàn)16第十六頁(yè),共73頁(yè)。無(wú)機(jī)酸鹽有機(jī)酸鹽無(wú)機(jī)金屬鹽類(lèi)有機(jī)氟化物類(lèi)芳香第一胺類(lèi)托烷生物堿類(lèi)丙二酰脲類(lèi)《中國(guó)藥典》17第十七頁(yè),共73頁(yè)。1.有機(jī)氟化物無(wú)機(jī)氟化物+茜素氟藍(lán)+硝酸亞鈰pH4.3藍(lán)紫色絡(luò)合物二、一般鑒別試驗(yàn)18第十八頁(yè),共73頁(yè)。

1.

有機(jī)氟化物

(地塞米松、依諾沙星、氧氟沙星、醋酸曲安奈德、醋酸氟輕松、醋酸氟輕可的松)

取供試品約7mg,照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞,用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液,待燃燒完全后,充分振搖,取吸收液2ml,加茜素氟藍(lán)試液0.5ml,再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml,用水稀釋至4ml,加硝酸亞鈰試液0.5ml,即顯藍(lán)紫色,同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)。

一般鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別方法19第十九頁(yè),共73頁(yè)。

2.有機(jī)酸鹽(1)水楊酸1)鑒別方法一:取供試品的稀溶液,加三氯化鐵試液1滴,即顯紫堇色。2)反應(yīng)原理:本品在中性或弱酸性條件下,與三氯化鐵試液生成配位化合物,在中性時(shí)呈紅色,弱酸性時(shí)呈紫色。

一般鑒別實(shí)驗(yàn)20第二十頁(yè),共73頁(yè)。二、一般鑒別試驗(yàn)2.水楊酸鹽鑒別方法二FeCl3反應(yīng)弱酸性中性②加稀HCl,即析出白色沉淀;分離,沉淀溶于醋酸銨溶液。①21第二十一頁(yè),共73頁(yè)。(2)酒石酸鹽1)鑒別方法:取供試品的中性溶液,置潔凈的試管中,加氨制硝酸銀試液數(shù)滴,置水浴中加熱,銀即游離并附在試管內(nèi)壁成銀鏡。一般鑒別實(shí)驗(yàn)22第二十二頁(yè),共73頁(yè)。

2)

反應(yīng)原理:其反應(yīng)式為:HO—CH—COOH︳+2Ag(NH3)2OH→HO—CH—COOHHO—C—COONH42Ag+‖+2NH3+2H2OHO—C—COONH423第二十三頁(yè),共73頁(yè)。3.

芳香第一胺類(lèi)(1)鑒別方法:取供試品約50mg,加稀鹽酸1ml,必要時(shí)緩緩煮沸使溶,放冷,加亞硝酸鈉溶液(0.1mol/L)數(shù)滴,滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴,視供試品不同,生成橙黃色到猩紅色沉淀。(2)反應(yīng)原理:重氮化-偶合反應(yīng)一般鑒別實(shí)驗(yàn)24第二十四頁(yè),共73頁(yè)?!吨袊?guó)藥典》2005版二部芳香第一胺反應(yīng)鑒別的藥物

對(duì)乙酰氨基酚鹽酸普魯卡因艾司唑侖硝西泮奧沙西泮磺胺嘧啶25第二十五頁(yè),共73頁(yè)。

4.

托烷生物堿類(lèi)

(硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿、氫溴酸東莨菪堿)

(1)鑒別方法:取供試品約10mg,加發(fā)煙硝酸5滴,置水浴上蒸干,即得黃色的殘?jiān)?,放冷,加乙?-3滴,加固體氫氧化鉀一小顆,即顯深紫色。(2)反應(yīng)原理:托烷生物堿類(lèi)均具有莨菪酸結(jié)構(gòu),有Vitali反應(yīng),顯紫色。后馬托品具莨菪醇結(jié)構(gòu)而不具莨菪酸結(jié)構(gòu),無(wú)此反應(yīng)。一般鑒別實(shí)驗(yàn)26第二十六頁(yè),共73頁(yè)。莨菪酸三硝基衍生物醌式化合物硝基化反應(yīng)莨菪醇27第二十七頁(yè),共73頁(yè)。5.無(wú)機(jī)金屬鹽(1)Na、K、Ca的焰色反應(yīng)

1)鑒別方法:取鉑絲,用鹽酸濕潤(rùn)后,蘸取供試品,在無(wú)色火焰中燃燒,火焰即顯各離子的特征顏色。

Na+鮮黃色

K+紫色

Ca2+磚紅色一般鑒別實(shí)驗(yàn)28第二十八頁(yè),共73頁(yè)。2)測(cè)定原理:火焰光譜的譜線(xiàn)不同Na589.0nm、589.6nm,顯黃色。K766.49nm、769.90nm,由于人眼在此波長(zhǎng)附近敏感度較差,顯紫色。Ca622nm、554nm、442.67nm與602nm,622nm的譜線(xiàn)最強(qiáng),磚紅色。一般鑒別實(shí)驗(yàn)29第二十九頁(yè),共73頁(yè)。(2)銨鹽

鑒別方法:

供試品+NaOH

NH3a.發(fā)生氨臭;b.遇濕潤(rùn)的紅色石蕊試紙藍(lán)c.硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的濾紙

黑一般鑒別實(shí)驗(yàn)30第三十頁(yè),共73頁(yè)。

6.

無(wú)機(jī)酸根(1)氯化物

鑒別一:硝酸銀反應(yīng):Cl-+AgNO3AgCl

NH3H2O

沉淀溶解+HNO3

沉淀生成

如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽,須先加氨試液使成堿性,將析出的沉淀濾過(guò)除去,取濾液進(jìn)行試驗(yàn)。一般鑒別實(shí)驗(yàn)31第三十一頁(yè),共73頁(yè)。

鑒別二

取供試品少量,置試管中,加等量的二氧化錳,混勻,加硫酸濕潤(rùn),緩緩加熱,即發(fā)生氯氣.

Cl2+KI-淀粉試紙藍(lán)色一般鑒別實(shí)驗(yàn)32第三十二頁(yè),共73頁(yè)。(2)硫酸鹽

鑒別一:SO42-+BaCl2BaSO4

沉淀在HCl或HNO3中不溶解。

鑒別二:

取供試品溶液,加醋酸鉛試液,即生成白色沉淀;分離,沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。一般鑒別實(shí)驗(yàn)33第三十三頁(yè),共73頁(yè)。(3)硝酸鹽

鑒別一:取供試品溶液,加等量硫酸,混合冷卻沿壁管加FeSO4試液,使成兩液層,界面顯棕色

鑒別二:取供試品溶液,加硫酸和銅絲,加熱即生成紅棕色蒸汽。一般鑒別實(shí)驗(yàn)34第三十四頁(yè),共73頁(yè)。(三)專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)證實(shí)某一種藥物的依據(jù)它根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其引起的物理化學(xué)性質(zhì)不同,選用某些靈敏的定性反應(yīng),來(lái)鑒別藥物真?zhèn)?鑒別實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目35第三十五頁(yè),共73頁(yè)。

一般鑒別試驗(yàn),區(qū)別不同類(lèi)別的藥物。

專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn),區(qū)別各個(gè)藥物單體,達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹?6第三十六頁(yè),共73頁(yè)。苯巴比妥司可巴比妥鈉巴比妥37第三十七頁(yè),共73頁(yè)。中國(guó)藥典2005年版(二部)

用于鑒別的儀器分析法紫外-可見(jiàn)分光光度法546種紅外分光光度法593種高效液相色譜法484種薄層色譜法199種氣相色譜法3種38第三十八頁(yè),共73頁(yè)。化學(xué)鑒別法化學(xué)鑒別法必須反應(yīng)迅速、現(xiàn)象明顯類(lèi)型:(1)呈色反應(yīng)鑒別法(2)沉淀生成反應(yīng)鑒別法(3)熒光反應(yīng)鑒別法(4)氣體生成鑒別法(5)使試劑褪色鑒別法39第三十九頁(yè),共73頁(yè)。(1)呈色反應(yīng)鑒別法①三氯化鐵呈色反應(yīng)對(duì)乙酰氨基酚②異羥肟酸鐵反應(yīng)氯貝丁酯

Cl化學(xué)鑒別法40第四十頁(yè),共73頁(yè)。(1)呈色反應(yīng)鑒別法③茚三酮呈色反應(yīng)④重氮化-偶合呈色反應(yīng)左旋多巴

對(duì)乙酰氨基酚化學(xué)鑒別法41第四十一頁(yè),共73頁(yè)。(2)沉淀生成鑒別法①與重金屬離子沉淀反應(yīng)②還原基團(tuán)的銀鏡反應(yīng)異煙肼化學(xué)鑒別法42第四十二頁(yè),共73頁(yè)。

(3)熒光反應(yīng)鑒別法①藥物本身在可見(jiàn)光下發(fā)射熒光②藥物溶液+硫酸③藥物溶液+溴④藥物溶液+間苯二酚化學(xué)鑒別法43第四十三頁(yè),共73頁(yè)。(4)氣體生成反應(yīng)鑒別法化學(xué)鑒別法①大多數(shù)伯胺(銨)類(lèi)藥物、酰尿類(lèi)以及某些酰胺類(lèi)藥物,可經(jīng)強(qiáng)堿處理后加熱產(chǎn)生氨氣.②化學(xué)結(jié)構(gòu)含硫藥物,可經(jīng)強(qiáng)酸處理后加熱產(chǎn)生硫化氫氣體.硫鳥(niǎo)嘌呤

巴比妥類(lèi)藥物44第四十四頁(yè),共73頁(yè)。(4)氣體生成反應(yīng)鑒別法化學(xué)鑒別法③含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱可生成紫色碘蒸氣.碘苷④含醋酸酯和乙酰胺醋酸酯類(lèi)藥物經(jīng)硫酸水解后,加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯的香味.對(duì)乙酰氨基酚45第四十五頁(yè),共73頁(yè)。二、光譜鑒別法1.紫外光譜鑒別法(Ultravioletspectrophotometry)美法侖測(cè)定λmax,或同時(shí)測(cè)定λmin;測(cè)定一定濃度的供試液在λmax處的A規(guī)定λ和E規(guī)定λ和Aλ1/Aλ2經(jīng)化學(xué)處理后,測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。λ1λ246第四十六頁(yè),共73頁(yè)。1紫外光譜鑒別法①測(cè)定λmax,或同時(shí)測(cè)定λmin乙胺嘧啶供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì)中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處為谷.光譜鑒別法47第四十七頁(yè),共73頁(yè)。②測(cè)定一定濃度的供試液在λmax處的A鹽酸布比卡因濃度0.4mg/ml溶液,在263nm、271nm光譜鑒別法48第四十八頁(yè),共73頁(yè)。③規(guī)定λ和E

光譜鑒別法④經(jīng)化學(xué)處理后,測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性.49第四十九頁(yè),共73頁(yè)。⑤規(guī)定λ和Aλ1/Aλ2兩性霉素在362nm、381nm、405nm波長(zhǎng)處有最大吸收.規(guī)定362nm與381nm處吸收度比值不大于0.6、381nm與405nm波長(zhǎng)比值不大于0.9.光譜鑒別法50第五十頁(yè),共73頁(yè)。在200~400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描兩溶液,要求在相同的波長(zhǎng)處有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系數(shù),或吸收比在規(guī)定的范圍內(nèi).與對(duì)照品比較,對(duì)比吸收光譜的一致性光譜鑒別法51第五十一頁(yè),共73頁(yè)。

2紅外光譜法特點(diǎn):專(zhuān)屬性強(qiáng),應(yīng)用廣(固體、液體、氣體)用途:原料藥同類(lèi)藥(其他方法不易區(qū)分的)磺胺類(lèi)、甾體激素類(lèi)、半合成抗生素光譜鑒別法52第五十二頁(yè),共73頁(yè)。

2紅外光譜法Ch.P(2005)采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法BP(2005)采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法USP(29)采用對(duì)照品法JP(15)采用規(guī)定條件下測(cè)定一定波數(shù)處的特征吸收峰試樣制備方法:壓片法、糊法、膜法、溶液法光譜鑒別法53第五十三頁(yè),共73頁(yè)。光譜鑒別法特征區(qū)指紋區(qū)54第五十四頁(yè),共73頁(yè)。

3近紅外光譜法測(cè)定物質(zhì)在近紅外譜區(qū)750-2500nm的特征光譜,用化學(xué)計(jì)量的方法提取信息進(jìn)行定性、定量分析。特點(diǎn):快速、準(zhǔn)確、對(duì)樣品無(wú)破壞光譜鑒別法55第五十五頁(yè),共73頁(yè)。光譜鑒別法3.近紅外光譜法(Near-Infraredspectrophotometry)56第五十六頁(yè),共73頁(yè)。

4原子吸收法利用原子蒸汽可以吸收由該元素作為空心陰極燈發(fā)出的特征譜線(xiàn),供試液溶液在特征譜線(xiàn)處的最大吸收和特征譜線(xiàn)強(qiáng)度減弱程度進(jìn)行定性、定量分析。光譜鑒別法57第五十七頁(yè),共73頁(yè)。

5核磁共振法測(cè)定供試品指定基團(tuán)上質(zhì)子峰的化學(xué)位移δ和偶合常數(shù)進(jìn)行藥物的鑒別光譜鑒別法58第五十八頁(yè),共73頁(yè)。

結(jié)晶物質(zhì)的鑒別比較供試品已知物質(zhì)的X射線(xiàn)粉末衍射圖依據(jù):各衍射線(xiàn)的衍射角(2θ)相對(duì)強(qiáng)度面間距X射線(xiàn)粉末衍射法59第五十九頁(yè),共73頁(yè)。色譜譜鑒別法

適用于復(fù)雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時(shí)進(jìn)行的特點(diǎn).高效液相色譜法(HPLC)——供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致.氣相色譜法(GC)——同HPLC要求薄層掃描法(TLC)——對(duì)照品比較法,供試品斑點(diǎn)與對(duì)照品的Rf值及斑點(diǎn)的顏色應(yīng)一致.色譜法(HPLCGCTLCMS)60第六十頁(yè),共73頁(yè)。1.薄層色譜法(TLC)61第六十一頁(yè),共73頁(yè)。色譜譜鑒別法①同濃度對(duì)照品在同一塊薄層板比較②供試品與對(duì)照品等體積混合在同一塊薄層板比較③供試品與和其化學(xué)結(jié)構(gòu)相似對(duì)照品比較④將③下兩溶液等體積混合點(diǎn)樣、比較1.薄層色譜法(TLC)62第六十二頁(yè),共73頁(yè)。色譜譜鑒別法高效液相色譜法(HPLC)——供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致.內(nèi)標(biāo)法時(shí),藥物峰保留時(shí)間與內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間比值一致氣相色譜法(GC)——同HPLC要求2.高效液相色譜法(HPLC)63第六十三頁(yè),共73頁(yè)。GC和HPLC鑒別法色譜鑒別法64第六十四頁(yè),共73頁(yè)。色譜譜鑒別法

在高真空狀態(tài)下將被測(cè)物質(zhì)離子化,按質(zhì)子的質(zhì)荷比(m/z)大小分離進(jìn)行定性和定量分析3.質(zhì)譜法(MS)65第六十五頁(yè),共73頁(yè)。色譜鑒別法3.質(zhì)譜鑒別法(MassSpectrometry)66第六十六頁(yè),共73頁(yè)。

生物鑒別法特點(diǎn):利用微生物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物進(jìn)行鑒別用途:抗生素生化藥物

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