抗生素類藥物的分析好

抗生素類藥物的分析好第1頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第一節(jié)概述抗生素的定義

抗生素是細(xì)菌、放線菌和真菌等微生物的代謝產(chǎn)物，對(duì)各種病原微生物有強(qiáng)大的抑制或殺滅作用。1.生物合成（發(fā)酵）2.化學(xué)合成或半合成抗生素的來(lái)源第2頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五抗生素類藥物的特點(diǎn)3、穩(wěn)定性差1、化學(xué)純度較低2、活性成分易發(fā)生變異第3頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五抗生素質(zhì)量的復(fù)雜性產(chǎn)品穩(wěn)定性差分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)定，降解后療效下降、失效或增加毒副作用發(fā)酵過(guò)程不易控制易受污染生產(chǎn)工藝復(fù)雜第4頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五發(fā)酵液中雜質(zhì)

無(wú)機(jī)鹽、脂肪、各種蛋白質(zhì)、各種降解產(chǎn)物、色素、熱原、毒性物質(zhì)增加異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素、熱原、降壓物質(zhì)、無(wú)菌[檢查]第5頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五含量測(cè)定方法（一）生物學(xué)方法測(cè)定抗生素抑菌或殺菌的能力優(yōu)點(diǎn)1、與臨床效果一致2、靈敏度高3、干擾物質(zhì)少缺點(diǎn)1、操作繁瑣2、培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)3、測(cè)定誤差大第6頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（二）化學(xué)及物理化學(xué)方法以理化方法測(cè)定主藥含量?jī)?yōu)點(diǎn)1.準(zhǔn)確度高2.簡(jiǎn)單、快速1.不一定代表生物效價(jià)缺點(diǎn)2.易受雜質(zhì)干擾第7頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五分類（按結(jié)構(gòu)）：

β–內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類林可霉素類、其他抗生素類第8頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第二節(jié)β–內(nèi)酰胺類抗生素

青霉素類第9頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五頭孢菌素類第10頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五青霉素（青霉素G、芐青霉素）第11頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五氨芐西林

（氨芐青霉素）第12頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五阿莫西林

（羥氨芐青霉素）第13頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五普魯卡因青霉素第14頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五頭孢氨芐第15頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五頭孢羥氨芐第16頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五酸性一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽

（一）羧基

易溶于水第17頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五與有機(jī)堿(普魯卡因)成鹽

難溶于水普魯卡因青霉素第18頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（二）手性C

頭孢菌素類C6C7青霉素類C3C5C6

旋光性﹡﹡﹡﹡﹡第19頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

（三）共軛體系

頭孢菌素類母核有共軛體系青霉素類母核無(wú)明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基

UV第20頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（四）β–內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性

水溶液不穩(wěn)定干燥純凈穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大(β–內(nèi)酰胺環(huán))

酰胺鍵易水解第21頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第22頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（一）呈色反應(yīng)1.羥肟酸鐵反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類NaOH呈色Fe3+/3H+二、鑒別第23頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五H+Fe3+/3

（紅、棕、褐）第24頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五.①雙縮脲反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類（開環(huán)分解）似肽鍵2、肽鍵特征反應(yīng)第25頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五②.茚三酮反應(yīng)△

α-氨基第26頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五藍(lán)紫色第27頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3.與重氮苯磺酸反應(yīng)（偶合）酚羥基頭孢哌酮第28頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（偶合）第29頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（二）沉淀反應(yīng)1.鈉鹽反應(yīng)：遇酸→↓在過(guò)量HCl或有機(jī)溶劑中溶解第30頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2.有機(jī)胺鹽反應(yīng)（1）重氮化-偶合反應(yīng)

重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基第31頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五普魯卡因普魯卡因青霉素第32頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第33頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五K+、Na+反應(yīng)（三）

焰色→鮮黃色

+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+

焰色→紫色

+0.1%四苯硼鈉+HAc→↓白

K+第34頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五光譜法（四）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物Cu2+頭孢氨芐λmax=262nm青霉素V鈉

A280nm/A264nm=1.30～1.50第35頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五Cu2+pH3.8△第36頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第37頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五氯唑青霉素3410.682雙氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)第38頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2、（五）IR法β-內(nèi)酰胺環(huán)仲酰胺基第39頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五色譜法（六）1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法第40頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五三、特殊雜質(zhì)的檢查（一）高分子雜質(zhì)檢查分子排阻色譜法、離子交換色譜法、反相色譜法（二）吸光度檢查第41頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五汞量法（二）1.原理（水解）青霉素類ChP四、含量測(cè)定第42頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2.方法醋酸鹽緩沖液pH4.6滴定水解pH4.6滴定樣品

以未經(jīng)水解的樣品作空白測(cè)定第43頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五例青霉素鈉含量測(cè)定

取本品約50mg，精密稱定，加水5ml溶解后，加1mol/L氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，放置15分鐘，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸鹽緩沖液(pH4.6)20ml及水20ml，搖勻，照電位滴定法(附錄ⅦA),用鉑電極為指示電極，汞-硫酸亞汞電極為參比電極，在35～40℃，用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)緩慢滴定，第44頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（控制滴定過(guò)程約為15分鐘），不計(jì)第一個(gè)等當(dāng)點(diǎn)，計(jì)算第二個(gè)等當(dāng)點(diǎn)時(shí)消耗滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于7.128mg的總青霉素(按C16H17N2NaO4S計(jì)算)。另取本品約0.5g，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，終點(diǎn)判斷方法同上.第45頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相當(dāng)于7.128mg的降解物（按C16H17N2NaO4S計(jì)算）。

總青霉素的百分含量與降解物的百分含量之差值即為青霉素的含量。第46頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3、討論（1）以第二次滴定突躍為終點(diǎn)電位法指示終點(diǎn)（2）反應(yīng)摩爾比1:1（3）空白試驗(yàn)消除已降解產(chǎn)物干擾（4）優(yōu)點(diǎn)不需標(biāo)準(zhǔn)品第47頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五4、計(jì)算第48頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

精密稱取含水量為0.5%的青霉素鈉0.0502g，按藥典方法測(cè)定總青霉素含量時(shí)，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密稱取上述樣品0.5013g，按藥典方法測(cè)定降解物含量時(shí)，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品計(jì)算，求樣品中青霉素的含量。例青霉素鈉含量測(cè)定第49頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五HPLC法（二）ChP頭孢菌素類內(nèi)標(biāo)法＋校正因子外標(biāo)法特點(diǎn)快速、高效、靈敏專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好一法多用（鑒別、檢查、含測(cè)）第50頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五哌拉西寧原料藥含量測(cè)定色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇–0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液–10％氫氧化四乙基銨溶液–水（400︰50︰3︰547）用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.5為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。第51頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第三節(jié)氨基糖苷類抗生素鏈霉素慶大霉素阿米卡星新霉素卡那霉素妥布霉素第52頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺苷元糖鏈霉雙糖胺第53頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第54頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺第55頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五慶大霉素

糖苷元絳紅糖胺+2-脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖第56頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第57頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3第58頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺第59頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心堿性水溶性溶解性（一）第60頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五穩(wěn)定性（三）二糖胺結(jié)構(gòu)，PH4～7穩(wěn)定

酸性：鏈霉胍＋鏈霉雙糖胺N-甲基-L-葡萄糖胺

堿性：鏈霉胍＋鏈霉雙糖胺

麥芽酚（專屬）慶大霉素pH2～12（二）旋光性第61頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五UV（四）鏈霉素在230nm處有吸收，慶大霉素、奈替米星無(wú)第62頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五二、

鑒別

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)第63頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（二）α-萘酚第64頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

麥芽酚反應(yīng)（三）

鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排第65頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五紫紅麥芽酚第66頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（四）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基苯甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）第67頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（五）硫酸鹽反應(yīng)H+TLC法（六）CHP慶大霉素及其制劑第68頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五三、

檢查鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）

方法TLC中的對(duì)照品法（CHP、BP）1.來(lái)源反應(yīng)中間體第69頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

操作方法：

供試品溶液：0.25mg－－10mg/ml甲醇液

對(duì)照溶液：甘露糖36mg---72ug/ml(1mg甘露糖相當(dāng)于４.13mg的鏈霉素Ｂ）

薄層板：硅膠Ｇ展開劑：甲苯－醋酸－甲醇（５０：２５：２５）顯色劑：０.2%1,3-萘二酚乙醇溶液與20%硫酸液等體積混合。

第70頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五四、含量測(cè)定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法

本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。第71頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第四節(jié)四環(huán)素類抗生素ABCD第72頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五123456789101112第73頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五四環(huán)素（TC）tetracycline第74頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五金霉素(CTC)chlortetracycline氯四環(huán)素第75頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五土霉素(OTC)oxytetracycline氧四環(huán)素第76頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五多西環(huán)素(DOTC)doxycycline脫氧土霉素第77頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五美他環(huán)素（METC）metacycline第78頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五結(jié)構(gòu)特點(diǎn)Yourcompanyslogan四并苯或萘并萘衍生物第79頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第80頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1、酸堿性與溶解度（兩性化合物、具引濕性）C4：二甲氨基[－N(CH3)2]－－－弱堿性C10：酚羥基(-OH);共軛系統(tǒng)－－－弱酸性

臨床多為鹽酸鹽。鹽酸鹽易溶于水，溶于酸、堿溶液，不溶于有機(jī)溶劑。

（二）性質(zhì)

PH4.5-7.2,難溶于水PH>8or<4,溶解度增加游離堿第81頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2、旋光性具有不對(duì)稱碳原子，有旋光性，可定性、定量。3、紫外、熒光性質(zhì)共軛雙鍵系統(tǒng)－－UV

降解產(chǎn)物－－FLA

四環(huán)素降解后呈黃色熒光，區(qū)別于其他抗生素第82頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五4、不穩(wěn)定性（1）差向異構(gòu)化性質(zhì)（四環(huán)素、金霉素）四環(huán)素在PH2.0-6.0發(fā)生，C4構(gòu)型改變?？咕芰p弱或消失。AApH2.0~6.0

土霉素、多西環(huán)素，C5羥基和C4二甲氨形成氫鍵，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。第83頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（2）降解性質(zhì)（四環(huán)素、金霉素）

酸性降解：PH<2，C環(huán)脫水，生成脫水四環(huán)素。DDDCBBCBC脫水四環(huán)素類A脫水金霉素435nmA脫水四環(huán)素445nm淡黃→黑第84頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五（3）堿性降解：堿性溶液中，-OH作用，C環(huán)開環(huán)，形成無(wú)活性內(nèi)酯，生成異四環(huán)抗生素。異四環(huán)素第85頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+與金屬離子絡(luò)合（六）第86頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第87頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五二、鑒別試驗(yàn)H2SO4反應(yīng)（一）第88頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五FeCl3反應(yīng)（二）第89頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五熒光法（三）UV綠色熒光H+UV第90頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五TLC法（四）正相分配薄層色譜高效液相色譜法CHP（五）EDTA克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象第91頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五三、檢查·4-差向四環(huán)素（ETC）

·脫水四環(huán)素（ATC）

·差向脫水四環(huán)素（EATC）

·鹽酸金霉素（CTC）有關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法（2010版）標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法鹽酸四環(huán)素第92頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五吸收度（二）第93頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五雜質(zhì)吸收度（2010版A530）第94頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五四、含量測(cè)定ChP、USPHPLC法（外標(biāo)法）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)1.防護(hù)柱2.預(yù)試溶液

4-差向脫水四環(huán)素四環(huán)素3.RSD≤2.0%第95頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五JP比色法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）標(biāo)△樣△原理第96頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1.熟悉抗生素類藥物分析的特點(diǎn)及其常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。了解抗生素類藥物的分析現(xiàn)狀，熟悉生物學(xué)法與物理化學(xué)法測(cè)定效價(jià)的原理及優(yōu)缺點(diǎn)。2.掌握β－內(nèi)酰胺類抗生素的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、鑒別及含量測(cè)定。第十一章復(fù)習(xí)內(nèi)容第97頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3.掌握氨基糖苷類抗生素的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及鑒別，了解其檢查及含量測(cè)定4.掌握四環(huán)素類抗生素的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)，了解其鑒別、檢查及含量測(cè)定5.了解抗生素類藥物的質(zhì)量考察方法第98頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1．下列哪個(gè)藥物會(huì)發(fā)生羥肟酸鐵反應(yīng)

A.青霉素

B.慶大霉素

C.紅霉素

D.鏈霉素

E.維生素C第99頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2．中國(guó)藥典(2010年版)測(cè)定頭孢菌素類藥物的含量時(shí)，多數(shù)采用的方法是

A.微生物法

B.碘量法

C.汞量法

D.正相高效液相色譜法

E.反相高效液相色譜法第100頁(yè)，共106頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3．屬于-內(nèi)酰胺類的抗生素藥物有

A.青霉素

B.紅霉素