安捷倫1290超高效液相色譜儀操作規(guī)程

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維和藥業(yè)安捷倫1290Infinity型超高效液相色譜儀使生效日期用、維護、保養(yǎng)規(guī)程起草人審核人批準人起草日期審核日期批準日期頒發(fā)部門編號復(fù)印份數(shù)分發(fā)至目的：建立一個安捷倫1290Infinity型高效液相色譜儀使用、維護、保養(yǎng)規(guī)程，保證檢驗人員能按規(guī)程正確使用儀器，確保儀器的確鑿性、縝密度。防止儀器損壞，延長使用壽命，保證儀器正常運行。

范圍：適用于安捷倫1290Infinity型高效液相色譜儀的使用、維護和保養(yǎng)。責任：質(zhì)量管理部。程序：1.開機

1.1開啟計算機，進入WindowsXP畫面。

1.2開啟Agilent1290InfinityHPLC各模塊電源。1.3待各模塊自檢完成后，雙擊“儀器1聯(lián)機〞圖標，化學(xué)工作站自動與Agilent1290InfinityHPLC通訊。

1.4從“視圖〞菜單中選擇“方法和運行控制〞、“系統(tǒng)視圖〞、“命令行〞，使其命令前有“√〞標志來調(diào)用所需的界面。

1.5右鍵點擊泵下面的瓶圖標，選擇“瓶填充〞，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。也可輸入停泵的體積。點擊“確定〞。

1.6從菜單“視圖〞中，選中“在線信號〞，選中“信號窗口1〞，然后點擊“改變?〞鈕，將所要繪圖的信號移到右邊的框中，點擊“確定〞。(宛如時檢測二個信號，則重復(fù)，選中“信號窗口2〞。)2.排氣

2.1首先在泵模塊單擊右鍵，在方法編輯中，泵的參數(shù)設(shè)置部分，選好需要排空的通道（保證是開的）。

2.2右鍵點擊儀器狀態(tài)視圖中泵的圖標，選擇控制。2.3勾上清洗，并且輸入流量、時間、比例，開啟“泵〞、“清洗〞功能，點擊“確定〞，就可以排空管道。排空的時候閥會自動切換，無需人為介入。

2.4當我們發(fā)現(xiàn)泵頭里面有氣泡出不來的時候，選擇開啟“注入〞，然后點擊確定。此時泵會用很猛烈的方式朝外泵液體，并持續(xù)20次自動中止。3.編輯數(shù)據(jù)采集方法3.1開始編輯完整方法：

從“方法〞菜單中選擇“編輯完整方法?〞項，在方法編輯選項僅選擇“儀器/采集〞，點擊“確定〞，進圖下一畫面。

3.2方法信息：

在“方法解釋〞中參與方法的信息（如：Thisisfortest!），點擊“確定〞，進入下一畫面。3.3進樣方式選擇

根據(jù)自動進樣器的類型，選擇適合的進樣方式，本機默認為“HipAls〞。3.4泵參數(shù)設(shè)定：

在“流量〞處輸入流量，如1.5ml/min，中止時間：10min。在“溶劑B〞處輸入70.0，(A=100-B)，也可“添加〞一行“時間表〞，編輯梯度。在“壓力限〞處輸入柱標題機要第1頁共1頁

維和藥業(yè)標題安捷倫1290Infinity型超高效液相色譜儀使用、維護、保養(yǎng)規(guī)程頒發(fā)部門質(zhì)量管理部編號SOP-ZL(WB)091-02子的最大耐高壓，以保護柱子。3.5自動進樣器參數(shù)設(shè)定:

選擇適合的進樣方式，如：“進樣體積1.0ul，標準進樣〞只能輸入進樣體積，此方式無洗針功能；“進樣量1.0ul，針清洗后進樣〞此方式有洗針功能，“針清洗〞一般選擇為“沖洗端口，時間3.0秒〞。3.6柱溫箱參數(shù)設(shè)定:

在“溫度〞下面，如無特別規(guī)定，左側(cè)、右側(cè)設(shè)置成同樣溫度，使柱箱溫度左右一致。

3.7DAD檢測器參數(shù)設(shè)定:

檢測波長:254nm，帶寬=4nm，參比波長=360nm，帶寬=100nm;

檢測波長：一般選擇最大吸收處的波長。樣品帶寬：一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度。參比波長：一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)域。參比帶寬：至少要與樣品信號的帶寬相等，大量狀況下用100nm作為缺省值。峰寬（響應(yīng)時間）：其值盡可能接近要測的窄峰峰寬。狹縫-狹縫窄，光譜分辯率高；寬時，噪音低。同時可以輸入采集光譜方式，步長，范圍，閾值。選中所用的燈?？梢蚤_啟光學(xué)單元溫度控制；可以設(shè)定8通道信號等。3.8保存方法

從“方法〞菜單，選中“方法另存為?〞，輸入一方法名，如“測試〞，點擊“確定。

4.單次樣品運行

從“運行控制〞菜單中，選擇“樣品信息〞選項，輸入操名稱，如“安裝工程師〞；在“數(shù)據(jù)文件〞中選擇“手動〞或“前綴/計數(shù)器〞；在“樣品參數(shù)〞中填入“樣品位置〞、“樣品名稱〞。

點擊“確定〞，在“儀器〞菜單項選擇擇“系統(tǒng)開啟〞。

等儀器準備好，基線平穩(wěn)，從“運行控制〞菜單中選擇“運行方法〞，進樣。5.面積百分比數(shù)據(jù)處理5.1選擇界面

退出“儀器1聯(lián)機〞界面，雙擊“儀器1脫機〞圖標，進入數(shù)據(jù)分析畫面。5.2調(diào)用信號

從“文件〞菜單項選擇擇“調(diào)用信號〞，選中您的數(shù)據(jù)文件名。點擊“確定〞，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。

5.3做譜圖優(yōu)化：

從“圖形〞菜單中選擇“信號選項〞。從“范圍〞中選擇“滿量程〞或“自動量程〞及適合的時間范圍或選擇“自定義量程〞調(diào)整。反復(fù)進行，直到圖的比例適合為止。點擊“確定〞。5.4積分優(yōu)化:

從“積分〞菜單中選擇“積分事件〞選項。選擇適合的“斜率靈敏度〞、“峰寬〞、“最小峰面積〞、“最小峰高〞。

從“積分〞菜單中選擇“積分〞選項，則數(shù)據(jù)被積分。

如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。點擊左邊“√〞圖標，將積分參數(shù)存入方法。5.5打印報告:

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維和藥業(yè)標題安捷倫1290Infinity型超高效液相色譜儀使用、維護、保養(yǎng)規(guī)程頒發(fā)部門質(zhì)量管理部編號SOP-ZL(WB)091-02從“報告〞菜單中選擇“設(shè)定報告〞選項。點擊“定量結(jié)果〞框中“定量〞右側(cè)的黑三角，選中“面積百分比〞，其它選項不變。點擊“確定〞。

從“報告〞菜單中選擇“打印報告〞，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊“報告〞頂部的“打印〞鈕。6.關(guān)機

關(guān)機前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。

退出化學(xué)工作站，依提醒關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計算機。關(guān)閉Agilent1290各模塊電源開關(guān)。關(guān)閉穩(wěn)壓器。7.定量數(shù)據(jù)處理

7.1點擊“方法〞菜單，選擇“調(diào)用方法L..〞，在方法目錄中選擇要進行定量設(shè)定的方法，

該方法是經(jīng)過積分和譜圖優(yōu)化過的方法。點擊“確定〞，則選擇的方法被調(diào)出。7.2從“文件〞菜單中選擇“調(diào)用信號?〞選項，選中標樣的數(shù)據(jù)文件名，點擊“確定〞，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。檢查確認積分和譜圖優(yōu)化的參數(shù)是否適合。

7.3從“校正〞菜單中選擇，“新建校正表〞按鈕，確認選項在“自動設(shè)定〞，級別為“1〞，點擊“確定〞。若要信號單獨計算，則選擇“校正模式〞中的“每個信號單獨計算〞。

7.4在覆蓋現(xiàn)有校準表中對話框中，選擇“是（Y）〞。若方法中沒有舊的校準表，無此項。

7.5則所有積過分的峰，其保存時間、峰面積按序顯示在校準表中。依次輸入化合物的名稱、含量，校準曲線顯示在右下方?？梢栽O(shè)定參考峰等。若用內(nèi)標方法定量，還須選擇內(nèi)標，點擊“內(nèi)標“下的區(qū)域，選擇那個峰作為內(nèi)標峰，指定每個色譜峰以那個內(nèi)標為參比。點擊“確定〞。

7.6在刪除含量為零的行對話框中選擇“是（Y）〞。則校準表中未輸入含量的峰從表中刪除。

7.7點擊“校正〞菜單，選擇“校正設(shè)置〞按鈕，輸入單位：如“mg/ml〞；其它項不變。點擊“確定〞。7.8打印報告:

從“報告〞菜單中選擇“設(shè)定報告（R）?〞選項。點擊“定量結(jié)果〞框中“定量〞右側(cè)的黑三角，選中“外標法〞，其它選項不變。點擊“確定〞。若是用內(nèi)標法定量，則選“內(nèi)標法〞。

從“報告〞菜單中選擇“打印報告“，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點擊“報告〞頂部的“打印〞鈕?？梢赃x擇打印到文件中，如PDF格式。7.9若有多個濃度標樣，則依次調(diào)出校正數(shù)據(jù)，調(diào)出每一個校正數(shù)據(jù)后，點擊“校正〞菜單，選擇“添加級別“，第2級數(shù)入〞2“，類推。在校準表中輸入每級的組份濃度。7.10在方法菜單中，選擇“運行時選項表〞，確認“標準數(shù)據(jù)分析選項〞也被選中，點擊“確定〞。點擊“保存〞按鈕，存儲修改的方法。此方法包含校準表，建立完畢。8.使用后填寫使用登記。

9.HPLC使用過程中的本卷須知

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維和藥業(yè)標題安捷倫1290Infinity型超高效液相色譜儀使用、維護、保養(yǎng)規(guī)程頒發(fā)部門質(zhì)量管理部編號SOP-ZL(WB)091-029.1滾動相使用中的問題9.1.1要求使用色譜純級的溶劑。

9.1.2HPLC應(yīng)使用超純水，混合水溶液需用＜0.2μm的濾膜過濾。水必需放在棕色瓶中，使用前要經(jīng)過超聲處理。由于水長時間放置易滋生細菌，因此應(yīng)盡量使用新鮮制得的純水。當有機溶劑的比例低于10%時，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，放置不應(yīng)超過三天。當純水做為單獨一元溶劑時，應(yīng)每天更換。且長時間不用，該管道及濾頭應(yīng)保存在有機溶劑中。9.1.3注意過濾水相或有機相時選用不同的濾膜。常用0.45μm的濾膜，假使使用亞二微米顆粒色譜柱，檢驗使用0.2μm的濾膜。

9.1.4四氫呋喃、醚類等有機溶劑應(yīng)放在棕色瓶中，以防光照變質(zhì)。9.1.5注意要定期更換、過濾容積，特別是水相或緩沖鹽滾動相。9.2溶劑轉(zhuǎn)換問題

9.2.1反相色譜中溶劑轉(zhuǎn)換

若系統(tǒng)及柱子中為純甲醇（或乙腈），如需換到緩沖液滾動相，則至少應(yīng)以20-30ml90%的水/甲醇（或乙腈）作為過渡，以免滾動相中的緩沖鹽析出，造成系統(tǒng)壓力過高，甚而可能堵塞管路及色譜柱。當試驗終止，沖洗柱子時，同樣也應(yīng)當注意沖洗的溶劑與滾動相的兼容性。

9.2.2反相色譜與正相色譜的轉(zhuǎn)換

一般兩種條件的轉(zhuǎn)換中間一定要充足的溶劑轉(zhuǎn)換，一般會選用與水和正己烷均能以任意比例混溶的異丙醇沖洗。假使異丙醇沖洗的時間不夠，則可能會在檢測器內(nèi)形成油珠狀液滴。出現(xiàn)類似檢測器內(nèi)有氣泡的病癥。9.3避免的溶劑

9.3.1鹵化物堿金屬溶液對不銹鋼有腐蝕性的酸溶液。9.3.2高濃度的無機酸，例如：硝酸和硫