動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用課件

2.2動(dòng)物細(xì)胞工程1、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用2、對(duì)比說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的學(xué)習(xí)目標(biāo)：動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)、生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)復(fù)習(xí)：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。

原理是細(xì)胞增殖（有絲分裂）。聚焦一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁：

懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？分散的單個(gè)細(xì)胞容易攝取所需的營(yíng)養(yǎng)，排出代謝廢物；而用大塊組織培養(yǎng)時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)（膠原纖維）。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.2～8.4。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無(wú)限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)一般傳至10代直至50代就不能再分裂了，這時(shí)細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)未發(fā)生變化，形成的細(xì)胞群傳代培養(yǎng)過程中有個(gè)別細(xì)胞傳至50代以后，由于遺傳物質(zhì)改變，失去控制，成為無(wú)限增殖的不死的癌癥細(xì)胞，形成的細(xì)胞群7、什么是原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)？為什么要進(jìn)行傳代培養(yǎng)？原代培養(yǎng)：

取材（動(dòng)物組織）→細(xì)胞分散→初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：

培養(yǎng)的細(xì)胞→細(xì)胞分散→繼續(xù)培養(yǎng)進(jìn)行傳代培養(yǎng)的原因：

接觸抑制一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程9、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否象植物組織培養(yǎng)那樣獲得克隆個(gè)體？需要誘導(dǎo)其脫分化的過程嗎？不可以，因?yàn)楦叨确只膭?dòng)物細(xì)胞的全能性受到抑制。不需要誘導(dǎo)其脫分化。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程原代培養(yǎng)定義：把第1代細(xì)胞的培養(yǎng)與10代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。過程：從動(dòng)物機(jī)體中取出組織剪碎加胰蛋白酶細(xì)胞游離加培養(yǎng)液將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)（1—2天換一次培養(yǎng)液）細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)成單層細(xì)胞取材（動(dòng)物組織）→細(xì)胞分散→初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)定義：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)停止，這時(shí)如果要使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，就要及時(shí)用胰蛋白酶等，使細(xì)胞從瓶壁上解離下來，然后加入新的培養(yǎng)液，將細(xì)胞分離稀釋，并從原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，這個(gè)過程稱傳代培養(yǎng)培養(yǎng)的細(xì)胞→細(xì)胞分散→繼續(xù)培養(yǎng)二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖思考：動(dòng)物血清的作用？主要是：提供有利于細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需的激素、生長(zhǎng)因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點(diǎn)是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動(dòng)物血清動(dòng)物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境植物組織培養(yǎng)呢？無(wú)機(jī)鹽、蔗糖、維生素、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物激素成分比較：四、植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基狀態(tài)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白1、說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程？2、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件？3、說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用？4、對(duì)比說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的你達(dá)到學(xué)習(xí)目標(biāo)了嗎？4、細(xì)胞株的特點(diǎn)是 A．遺傳物質(zhì)沒有改變，可以無(wú)限傳代

B．遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，不可無(wú)限傳代

C．遺傳物質(zhì)沒有改變，不可無(wú)限傳代

D．遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，且有癌變特點(diǎn)，可以無(wú)限傳代5、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無(wú)限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為:A．原代培養(yǎng)B．傳代培養(yǎng)C．細(xì)胞株D．細(xì)胞系CD6、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞A.容易產(chǎn)生各種變異B.具有更強(qiáng)的全能性C.取材十分方便D.分裂增殖的能力強(qiáng)D7.（09江蘇）下圖是一個(gè)新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請(qǐng)回答下列問題。（1）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細(xì)胞

。（2）氣室中充入5％C02：氣體的主要作用是

。（3）培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，但要注意選擇抗生素的

，以保證抗生素對(duì)肝臟無(wú)害。吸收氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、排出代謝廢物維持培養(yǎng)液適宜的pH種類和劑量08年寧夏卷回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：⑴在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面

時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是

，要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是

。

⑵隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成

細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性

，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量

。相互接觸單層胰蛋白酶衰老甚至死亡接觸抑制不死性降低減少⑷檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到

期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。⑸