自身抗體的檢測課件

自身抗體的檢測

及應用

2012.9.19抗核抗體（ANA）的檢測與臨床應用

抗核抗體的定義傳統(tǒng)定義：針對細胞核成分抗原總稱。廣義定義：針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成份，而是指核質和核蛋白的總稱。ANA測定原理和方法：間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以Hep-2細胞（人喉癌上皮細胞）為底物（Ag)，其以核質豐富而極大地提高了ANA檢測的陽性率和滴度。是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的標準篩選試驗。我們實驗室采用歐蒙熒光檢測系統(tǒng)，將1:100作為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的1:100陽性，只能視為一個臨界可疑值，臨床意義不大。ANA作為自身免疫性結締組織病的篩選試驗必須強調高滴度。ANA檢測的臨床意義

ANA可見于多種自身免疫性疾病，特別是結締組織疾病，常作為結締組織疾病的診斷，病情判斷和療效觀察的指標已證實ANA對很多自身免疫性疾病有診斷價值。ANA的靶抗原為細胞核內(nèi)的不同生化成份，包括核酸、細胞核蛋白和核糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風濕性疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥性風濕病中ANA陽性率在20%-100%之間，其中類風濕性關節(jié)炎中ANA陽性率最低，為20%-40%。所以，檢測ANA對于不同類型風濕病意義重大。⑴SLE活動性：占95%-100%，非活動性：占80%-100%。（2）藥物誘導的SLE：占100%。（3）混合性結締組織疾?。赫?00%。（4）其它風濕性疾?。赫?0%-50%

（5）進行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。（6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。（7）干燥綜合征：占70%-80%。（8）慢性活動性肝炎：占30%-40%。（9）潰瘍性結腸炎：占26%。常見疾病ANA（＋）的原因風濕性疾病SLE多發(fā)性肌炎干燥綜合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性＞男性，出現(xiàn)率隨年齡而增加風濕性疾病患者親屬？孕婦藥物誘導慢性肝臟疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系統(tǒng)異常惡性腫瘤SLE患者使用IIF法測定ANA陰性的一些解釋

技術方面臨床方面經(jīng)皮質激素或免疫抑制劑治療。終末期腎病。隱蔽ANA：與循環(huán)中免疫復合物結合，沉積于組織。由于大量蛋白尿而從腎臟丟失。ANA的熒光染色型別細胞核：核均質型（DNA、組蛋白和核小體等）核顆粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白）核膜型（板層素、gp120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等）核漿點型（著絲點、核多點及核少點型）細胞漿：胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動蛋白等分裂期細胞陽性：紡垂體、中間體、中心體等根據(jù)產(chǎn)生的熒光模型、靶抗原的分布部位分類如下：核顆粒型：核粗顆粒型抗核抗體染色類型核仁型（nucleolar）均質性（homogeneous）抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）

的檢測與臨床應用

檢測：測定抗ds-DNA以血鞭毛蟲屬的綠螢短膜蟲為靶抗原基質，可聯(lián)合使用HEp-2細胞及靈長類肝組織檢測。

自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上?？筪sDNA抗體熒光模式：綠蠅短膜蟲：動基體均質的或邊緣亮度增強的熒光。Hep-2細胞：細胞核的均質型熒光?？贵w水平與疾病活動度相關，隨著疾病活動的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以下降或消失。

ANA譜3檢測及臨床應用抗RNP/Sm抗體熒光模式：Hep-2片：細胞核粗顆粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體Sm?？筍SA／SSB抗體熒光模式Hep-2片：細胞核呈細顆粒熒光，核仁不發(fā)光。肝組織片：細顆粒熒光。抗SSA／SSB抗體自身抗原：SSA抗原是一個小核糖核蛋白，由一個RNA分子和兩種不同的蛋白質組成。蛋白質的分子量為52KD和60KD?？贵w直接針對蛋白質的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。臨床意義；最常見于干燥綜合征（SS）,也見于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見于慢活肝?？筍SA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。抗Scl-70抗體自身抗原：為DNA拓撲異構酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復制和轉錄中起作用。臨床意義：25~70%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽性，局限型硬皮病患者陰性。細胞漿陽性胞漿均質型---抗核糖體抗體細顆粒---抗Jo-1抗體

胞漿顆粒型粗顆粒---AMA抗體滴狀點狀---溶酶體抗體核周顆粒--高爾基體抗體胞漿纖維型細纖維---波形蛋白抗體環(huán)狀纖維---原肌球蛋白抗體針狀纖維---肌動蛋白抗體抗核糖體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿細顆粒到均質狀、非常致密的熒光。肝組織片：島狀熒光。臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關。抗Jo-1抗體熒光模式：Hep-2：胞漿顆粒到細塊狀熒光。肝組織片：胞漿中弱熒光。自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。臨床意義：見于PM，發(fā)生率25~35%?？咕€粒體抗體熒光模式：Hep-2：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱?？咕€粒體抗體自身抗原：位于真核細胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關的包括：（1）丙酮酸脫氫酶復合體（PDC）（2）支鏈2-氧酸脫氫酶復合體（BCOADC）（3）a-酮戊二酸脫氫酶復合體（OGDC）抗線粒體抗體臨床意義：AMA-M2對PBC具有診斷意義。AMA亞型與疾病的相關性：AMA-1：梅毒、干燥綜合征AMA-2：PBCAMA-3：藥物性紅斑狼瘡AMA-4：PBC與AIH重疊AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎AMA-9：藥物性肝炎AMA-10：SLE分裂期細胞陽性染色體陽性---染色體相關抗體，相關疾?。考忓N體纖維陽性---紡錘體纖維抗體，如燕麥細胞型支氣管肺癌中間體陽性---中間體抗體，相關疾??？細胞兩極陽性---中心?？贵w，相關疾病？著絲點陽性---抗著絲點抗體抗著絲點抗體(ACA)熒光模式：Hep-2：細胞核細的、相同大小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細胞中間。肝組織片：分布于細胞核的10~20個顆粒，熒光弱，易被忽略?？怪z點抗體自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質：著絲點蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點蛋白B。臨床意義：對進行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽性率80~95%。還可見于PBC、SS等。器官/組織特異性自身抗體抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）抗平滑肌抗體抗角蛋白抗體抗肝腎微粒體抗體抗肝細胞膜抗原抗體抗可溶性肝抗原抗體抗肝特異性蛋白抗體抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA熒光模式：猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。甲醛固定的中性粒細胞：胞漿內(nèi)粗大到細的熒光顆粒?？怪行粤＜毎麧{抗體（胞漿型）自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細胞的嗜苯胺藍顆粒中。臨床意義：cANCA可見于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見于Wengener’s肉芽腫，約占ANCA陽性率的80~95%。cANCA被認為是活動性Wengener’s肉芽腫和微多動脈炎的特異和敏感的標志性抗體。還見于Churg-Strauss綜合征。抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）pANCA熒光模式：乙醇固定的中性粒細胞：細胞核周圍平滑的帶狀熒光，細胞核陰性。猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）自身抗原：主要抗原為髓過氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。臨床意義：見于多種系統(tǒng)性血管炎?？梢娪赪engener’s肉芽腫、微多動脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風濕病（RA、SLE、SS、PM/DM）?？蛊交】贵w（SMA）熒光模式：大鼠胃組織，呈現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯細胞漿熒光。大鼠腎組織，腎小管細胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細胞及血管肌層的熒光。抗平滑肌抗體（SMA）自身抗原：主要的靶抗原為肌動蛋白，肌動蛋白可以單體（G-肌動蛋白）或聚合體（F-肌動蛋白）形式存在于微絲中，F(xiàn)-肌動蛋白自身抗原與自免肝關系密切，而G-肌動蛋白自身抗原則與酒精性肝硬化有關。臨床意義：見于自身免疫性肝炎、PBC、酒精性肝硬化?？菇堑鞍卓贵w（AKA）熒光模式：大鼠食管，僅限于上皮角質層的較強的線性分層的均質熒光?？菇堑鞍卓贵w（AKA）自身抗原：絲聚蛋白（filaggrin）為AKA的靶抗原。臨床意義：見于RA，陽性率36~59%，特異性95~99%。還是一個潛在的預后標志，高抗體滴度可能預示著較嚴重的RA類型?？垢文I微粒體抗體（LKM）有三種熒光模式：LKM-1：肝細胞胞漿明顯熒光，呈細顆粒到均質狀，腎臟近近端腎小管有熒光。LKM-2：門靜脈周圍的肝組織熒光比其他部位強，腎臟近近端腎小管有熒光。LKM-3：肝和腎均為陰性，靈長類睪丸間質細胞熒光明顯?？垢文I微粒體抗體（LKM）自身抗原：LKM-1：細胞色素P450ⅡD6，為50KD蛋白。LKM-2：細胞色素P450同工酶，藥物替尼酸的結合部位LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基轉移酶，為55KD蛋白。臨床意義：自免肝按血清學分型可分為三型Ⅰ型：出