艾滋病實驗室質量管理與控制

艾滋病實驗室質量管理與控制第1頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二檢測流程一覽病人填寫檢測申請單并抽取血樣樣本接收區(qū)接收檢測申請單及血樣檢查樣本質量檢查檢測申請單樣本編號、登記檢測實驗室樣本編排、登記樣本制備、檢測檢查并核對檢測結果填寫檢測結果表格檢查檢測結果表格檢測結果留檔醫(yī)護人員病人檢測結果的管理轉送清單接收檢測結果將檢測結果放入病人的病歷轉送樣本及檢測申請單檢測結果發(fā)送門診實驗室門診轉送到實驗室轉送清單第2頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二一、質量保證（QA)1、行政支持將艾滋病檢測實驗室的建設、發(fā)展和質量管理納入地方衛(wèi)生行政規(guī)劃，保證實驗室負責人和主要技術人員隊伍的穩(wěn)定，保證實驗室建筑和設備需要，給予充足的經(jīng)費支持，并進行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。第3頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二2、人員培訓及其評價檢測技術人員需經(jīng)過上崗培訓和在崗持續(xù)培訓。上崗培訓內容至少應包括：艾滋病檢測相關基礎知識，艾滋病相關檢測技術及管理要求，實驗操作，質量保證與質量控制，生物安全。要求掌握相關專業(yè)知識和技能，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。在崗持續(xù)培訓指在工作中要根據(jù)需要接受復培訓，確證實驗室技術人員每年至少1次，篩查實驗室技術人員至少每2年1次，除接受檢測基本培訓內容外，要求了解相關技術、質控及安全要求的新進展。實驗室在使用新方法前，須對技術人員進行培訓，獲得資格后方可開展相應工作。檢測人員應分為檢驗人、復核人、簽發(fā)人。復核人、簽發(fā)人應具備對檢測過程進行分析和解決問題的能力。第4頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二3、環(huán)境條件艾滋病篩查中心實驗室及艾滋病篩查實驗室（1）、建筑條件實驗室或檢測區(qū)域應分為清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)，應符合二級生物安全實驗室（BSL-2）要求。（2）、儀器設備條件配備艾滋病病毒抗體篩查試驗所需設備，至少包括酶標讀數(shù)儀、洗板機、普通冰箱、水浴箱（或溫箱）、離心機、加樣器（儀）、消毒與污物處理設備、實驗室恒溫設備、安全防護用品和生物安全柜。第5頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二艾滋病檢測點（1）、建筑條件需有艾滋病檢測區(qū)域或專用實驗臺，能開展簡便、快速檢測。（2）、設備條件需配備快速試驗所必須的物品，包括普通冰箱、消毒與污物處理設備、一次性消耗品、安全防護用品。注：HCV，HBV及梅毒等血清學檢測在滿足實驗室管理要求和保證生物安全的條件下，可以與HIV檢測共享空間和設備，應避免交叉污染。

第6頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二4.標本采集、運送和處理第7頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二5、檢測方法和試劑的選擇所用試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、批批檢合格、在有效期內的試劑。應使用可靠的檢測方法，參比實驗室和確證中心實驗室應對新方法進行評估。應選擇敏感性高、特異性好的試劑，參比實驗室定期組織國家級艾滋病診斷試劑臨床質量評價。確證中心實驗室定期組織對本省內使用的試劑進行評價，或在招標前對擬投標試劑進行質量評價，根據(jù)評價結果選擇質量好的試劑，并對中標試劑進行質量監(jiān)督。各實驗室更換試劑批號時，應進行平行試驗，即新批號試劑在測定質控品（已知結果）時能夠獲得與原試劑相同的結果。所有試劑盒須嚴格按要求條件保存。試劑盒拆封時，要記錄拆封時間。第8頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二6、設備維護與校準

實驗室應設立常用儀器的維護及校準制度，以保證檢測工作正常運轉。必須經(jīng)國家法定部門定期（每年至少1次）校準的儀器至少包括：酶標儀/洗板機，加樣器，溫度計，高壓滅菌器。加樣器、溫濕度計須經(jīng)計量部門校準。必要時可根據(jù)需求每1～2個季度進行期間核查。其他精密儀器及出具實驗結果的儀器，如生物安全柜，全自動蛋白印跡儀，CD4細胞測定儀、病毒載量測定儀、耐藥檢測儀、離心機等也必須定期（每年1次）校準，可請生產(chǎn)廠家校準。第9頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二設備維護及使用記錄（1）、酶標讀數(shù)儀、洗板機每個工作日核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。定期清潔儀器表面，保護光學零件不沾灰塵。定期（每月至少1次）檢查洗板機洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好；負壓是否符合規(guī)定要求。定期（每年至少1次）檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點須更換；根據(jù)儀器內具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。第10頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（2）、移液器定期（每年至少1次）校準，發(fā)現(xiàn)異常情況應隨時進行校準。標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。校準多道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準確地加樣。移液器的精密度應在廠家說明書規(guī)定的范圍內。第11頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（3）、冰箱和孵育箱每天檢查和記錄冰箱溫度，每個工作日檢查記錄孵育箱溫度，并做好記錄。使用經(jīng)過計量部門校準合格的溫度計測量冰箱和孵育箱的實際溫度，根據(jù)不同規(guī)格冰箱和凍存樣品性質對溫度要求不同，用于冷凍核酸和抗原檢測的血漿、淋巴細胞和病毒上清適宜在-70℃冰箱，要求冰箱溫度低于-65℃；保存抗體檢測樣品及考核盤適宜在-20℃冰箱，要求冰箱溫度低于-15℃；放置要求4℃保存的試劑盒的冰箱溫度應在2～8℃；用于培養(yǎng)的孵育箱溫度誤差應小于1℃。第12頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（4）其他儀器

CD4＋T淋巴細胞測定儀，病毒載量測定儀，離心機，全自動蛋白印跡儀，生物安全柜，高壓滅菌器等，每次使用前檢查儀器是否處于正常運轉狀態(tài)，并做好記錄。使用過程中或使用后檢查發(fā)現(xiàn)問題，應及時報告，并請專業(yè)公司進行維修，直至運轉正常。第13頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二實驗耗材實驗室需選購質量優(yōu)良的耗材，以保證檢測工作安全和結果的可靠性，并定期（每批次）或在更換產(chǎn)品時對耗材進行質量評價。第14頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二7、文件和文件管理（1）、標準操作程序(SOP)艾滋病實驗室要建立覆蓋主要工作內容的SOP文件，應至少建立以下SOP（10個）：（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運輸；（2）檢測方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀器的使用維護和校準；（5）質量控制要求及程序；（6）結果解釋與報告；（7）保密程序；（8）實驗室數(shù)據(jù)、相關文件記錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理；（10）實驗室安全防護及實驗室的清理和消毒。

確證中心實驗室SOP文件至少應包括：滿足確證和篩查實驗室SOP文件，并包括：陽性樣品庫管理；省級實驗室網(wǎng)絡質量保證及質量控制實施程序；省級試劑質量評價方案；實驗室現(xiàn)場督導、檢查和考核方法；供應品采購程序。第15頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二SOP的應包括的內容（1）標題和編號；（2）編寫和修訂日期；（3）編寫和修訂人員姓名；（4）方法、目的和應用范圍；（5）檢測設備；（6）試劑及有效期；（7）安全防護相關步驟；（8）結果的解釋和報告；（9）附錄，包括相關的附加文件如標準表格、設備和試劑盒說明書等。

第16頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二由各崗位工作人員起草，實驗室主任審定，每年修訂一次。修訂應該在實驗室主管人員（技術負責人）的領導下進行。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關內容。實驗過程中應嚴格執(zhí)行標準操作程序（SOP），不得擅自修改。第17頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（2）實驗原始記錄應按實驗要求，設計試驗操作原始記錄表，標明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導實驗人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復核人員姓名及檢測日期。第18頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（3）、結果報告分析結果及發(fā)出檢測報告前，應注意須在試劑盒及外部質控品結果滿足要求的前提下，對樣品進行分析。試劑盒及外部質控品不合格，樣品需要重新檢測；復核人對檢測結果進行仔細復核并對結果提出結論、簽發(fā)人對試驗結論進行審核、分析、總結、簽字。第19頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（4）、HIV標本的保存記錄包括HIV標本的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時間以及標本保管人、復核人姓名。第20頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（5）樣品登記和保存收到樣品后，建立唯一編碼，及時登記有關信息，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結果、送檢日期、報告日期、備注（必要時記錄通信地址）等。HIV陽性樣品的保存記錄應包括HIV陽性樣品的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時間以及樣品保管人姓名。第21頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（5）、文件存檔實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、免疫印跡試驗的膜反應條帶或其照片、檢測記錄表、樣品登記、樣品保存記錄以及儀器設備維修和校準記錄、人員培訓記錄等都應該妥善存檔保存10年以上。最好同時使用計算機保存各種文件和記錄。第22頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二二、質量控制（QC)實驗室內為達到質量要求的操作技術和活動，適用于得出檢驗結果所有的步驟和活動。有些實驗室工作人員僅注重畫質控圖，這是一種“狹義的”質控;檢驗的全過程質控(簡稱：全程質控)

是一種“廣義的”質控。（室內質量控制和室間質量評價）第23頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二

1、統(tǒng)計質量控制方法

Levey-Jennings控制圖方法Westgard多規(guī)則控制方法累計和方法平均數(shù)和極差方法趨勢分析方法利用病人數(shù)據(jù)分析方法“即刻法”質控方法（Grubbs）第24頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二2、開展質量控制（1）在試驗質量要求的基礎上進行質量控制的計劃（2）選擇適當?shù)馁|控規(guī)則和質控物個數(shù)（3）選擇適當?shù)馁|控物（4）應用統(tǒng)計質量控制（5）失控情況的處理第25頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二3、質量控制方法的確定

應考慮使用何種質控物，分析多少個質控物，質控物放在何位置，應用何種質控規(guī)則，何時評價質控規(guī)則，以達到盡可能地降低假失控、假警告概率。第26頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二如果不只一種質控設計都能滿足對質控目的的要求，則可根據(jù)成本或是否容易執(zhí)行等因素來選擇最佳方案。質量控制方法的性能可用概率計算或計算機模擬研究進行預測(功效函數(shù)圖)。第27頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二控制規(guī)則的使用(用功效函數(shù)圖評價)1.單個規(guī)則:例如12S或1３S２.聯(lián)合控制規(guī)則：例如12S與1３S聯(lián)合；

12S與２２S與R4S聯(lián)合；３.Westgard多規(guī)則質控：1３S與２２S與R4S與４１S與１０X４．平均數(shù)和極差控制方法５．1３S與累積和聯(lián)合規(guī)則第28頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二質控規(guī)則與誤差檢出率＼假失控概率１．單個控制規(guī)則不能提供對隨機誤差和系統(tǒng)誤差都好的靈敏度．聯(lián)合規(guī)則中一些規(guī)則對隨機誤差敏感，一些規(guī)則對系統(tǒng)誤差敏感．２．發(fā)展聯(lián)合規(guī)則的方法如下：．從考慮的控制規(guī)則中排除那些具有較高假失控概率的規(guī)則．．從余下的規(guī)則中選擇至少一個規(guī)則對隨機誤差敏感，至少一個規(guī)則對系統(tǒng)誤差敏感．．使用功效函數(shù)圖評價這種聯(lián)合規(guī)則的性能．．選擇控制測定值個數(shù)(N)，其將給出檢出感興趣誤差的適當概率．（可耐受的假失控概率：工業(yè)選擇低至0.002的概率；臨床檢驗中一般0.01-0.05的假失控概率是合理的．）第29頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二

HIV抗體ELISA檢驗

質量控制的實踐（一）質控物的制備和保存

質控物的成分應與檢測樣本的基質相似或相同，為減少基質效應，應盡可能的模擬。

1、內對照和外對照

2、制備

3、保存

第30頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二4、外部對照質控物的使用每一次實驗必須使用外部對照質控血清，以便監(jiān)控實驗的精密度和穩(wěn)定性，同時可以了解試劑盒的批間或板間差異，并可用于統(tǒng)計質量控制。第31頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二5、外部對照質控物的質量要求質控物的管間或瓶間變異必須小，并且質控物的成分應在穩(wěn)定狀態(tài)中。質控物應無菌，并不含有影響ELISA反應的防腐劑。第32頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（二）、質控圖的建立及應用

最常用的質控圖是Levey-Jennings質控圖，Westgard質控圖。1、質控圖參數(shù)平均值、標準差、控制限第33頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二質控物的平均值和標準差應建立在實驗室常規(guī)使用方法對質控物重復測定的基礎上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質控物測定結果，以建立一個臨時性的平均值和標準差，當達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的平均值和標準差。(NCCLS)

第34頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二

2、質控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗結果之前必須評價質控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結果來決定。目前許多質控規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。第35頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二質控規(guī)則12S

13S隨機誤差22S系統(tǒng)誤差31S系統(tǒng)誤差41S系統(tǒng)誤差R4S隨機誤差7x系統(tǒng)誤差7T向上或向下的趨勢8x系統(tǒng)誤差9x系統(tǒng)誤差10x系統(tǒng)誤差第36頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（1）告警（12S）：當質控物的測定值超出+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。（2）失控（13S）：當質控物的測定值超出+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差或外部對照滴度下降造成。(隨機誤差引起的可能性小于０.３％)第37頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二（3）位移：連續(xù)幾次（7-10次）外部對照S/CO值都落在均值的一側則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。（4）趨勢：連續(xù)幾次（5-7次）外部對照S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。第38頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二質控規(guī)則的使用應檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應具有較低的假失控概率?？疾煸囼炏到y(tǒng)的可靠性應采用多標準質控方案，多規(guī)則質控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。

第39頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二

3、質控圖的分析及失控處理實驗室應建立質控圖分析及失控情況處理程序。第40頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二當質控已計劃并恰當?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的平均值和標準差用于計算質控限，將假失控概率降到最低。當出現(xiàn)失控時進行如重復質控測定或重新分析新的質控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解決故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。第41頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二檢驗誤差類型1）隨機誤差：嚴密監(jiān)測和控制，使其限制在臨床允許的范圍之內，并逐步使之縮小。2）系統(tǒng)誤差：要求盡快發(fā)現(xiàn)，及時校正。3）過失誤差：盡量消滅。質量控制的核心問題：在于努力分清誤差類型。第42頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二圖形分析及發(fā)現(xiàn)問題1）曲線漂移：2）趨勢性變化：3）周期性變化：第43頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二失控后處理失控原因的查找過程并無固定模式，一般原理是由易到難，由近到遠地查找．1）分析原始數(shù)據(jù)及初步估計失控原因：2）對檢測過程進行回顧分析：3）選擇性復查分析判斷失控原因：4）決定處理方法：第44頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二

失控后處理

失控原因初步查找

示例第45頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二初步分析防止檢測失敗的最有效的手段是開始實驗前仔細核對程序，預先估計程序各步驟。如試劑使用前要平衡至室溫，保證合適的孵育溫度和時間，嚴格按試劑說明書操作等。如果以上都注意到了，但實驗仍失敗，以下建議可幫助發(fā)現(xiàn)問題。

a.與技術人員一起復習操作指導書，仔細檢查操作步驟中是否有遺漏或改變；

b.核查試劑及各組分的失效期；

c.核對孵育的溫度和時間；

d.加樣器、洗扳機、酶標儀等是否正常，酶標儀的波長是否準確，加樣器和酶標儀是否校準；

e.檢查蒸餾水的質量；

f.檢查試劑是否被污染，貯存是否合適。第46頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二

原始數(shù)據(jù)分析空白對照＼陰性對照＼陽性對照＼標準１．一致：無明顯系統(tǒng)誤差，失控原因在質控血清或該管操作造成的可能性較大．分析同一瓶質控血清的其他項目測定是否也有結果異常．有異常：質控血清本身問題．無異常：該管操作有問題．

第47頁，共51頁，2023年，2月20日，星期二