中藥含量測(cè)定技術(shù)-課件

1第四章-復(fù)習(xí)雜質(zhì)概念來源分類重金屬概念檢查原因檢查方法干擾物排除最終產(chǎn)物砷鹽檢查原因藥典收載方法檢查中酸性SnCl2作用？2中藥制劑

含量測(cè)定技術(shù)

3方法化學(xué)方法*儀器分析方法有效成分指標(biāo)性成分毒性成分分析成分中藥制劑含量測(cè)定技術(shù)5儀器分析法之紫外-可見分光光度法6A:吸光度K:吸收系數(shù)C:溶液濃度L:液層厚度

基本原理:Lamber-Beer定律紫外-可見分光光度法7吸收系數(shù)兩種表示法：摩爾吸收系數(shù)ε：λ一定，C=1mol/L，L=1cm時(shí)的吸光度百分含量吸收系數(shù)/比吸收系數(shù)λ一定，C=1g/100ml，L=1cm時(shí)的吸光度紫外-可見分光光度法*8紫外-可見分光光度法吸收光譜（吸收曲線）：定性依據(jù):

吸收峰→λmax

吸收谷→λmin

肩峰→λsh定量依據(jù):吸收峰→λmax10鎢燈或鹵鎢燈：可見光源350～1000nm氫燈或氘燈：紫外光源200～360nm吸收池：玻璃--能吸收UV光，僅適用于可見光區(qū)

石英--不能吸收紫外光，適用于紫外和可見光區(qū)要求：匹配性（對(duì)光的吸收和反射應(yīng)一致）光源紫外-可見分光光度法11測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：max吸光度讀數(shù)范圍的選擇：A=0.3～0.7UV吸光度測(cè)量的條件選擇樣參調(diào)節(jié)光路光學(xué)性質(zhì)和厚度相同樣品池樣品溶液，參比池空白溶液樣品池參比池配制樣品的溶劑空白溶液ATA?????+==?????+?????????%100013標(biāo)準(zhǔn)曲線又稱工作曲線。如吸光光度法，在繪制時(shí)，首先在一定條件下配制一系列具有不同已知濃度吸光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后在確定的波長(zhǎng)和光程等條件下，分別測(cè)量系列溶液的吸光度，繪制A-c曲線，從而得到一條通過原點(diǎn)的直線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)需要對(duì)某未知液的濃度cx進(jìn)行測(cè)定時(shí)，只需要在相同條件下測(cè)得未知液的吸光度Ax，就可由cx=Ax/εb計(jì)算得出或直接在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得cx。在實(shí)際操作中，應(yīng)注意調(diào)整cx的大小，使其對(duì)應(yīng)的Ax處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線范圍（線性范圍）之內(nèi)。UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法14UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法

標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線部分所對(duì)應(yīng)的被測(cè)物質(zhì)濃度（或含量）的范圍稱為該方法的線性范圍。15

標(biāo)準(zhǔn)曲線是依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度（或含量）和其相對(duì)應(yīng)的相應(yīng)信號(hào)測(cè)量值來繪制的。如濃度（或含量）分別為x1,x2…xn，其相應(yīng)信號(hào)(吸光度)的測(cè)量值分別為y1,y2…yn，用簡(jiǎn)單的方法很難繪制出能準(zhǔn)確反映y與x之間關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通常，用“一元線性回歸法”來給出y與x的關(guān)系式

y=a+bx

（1-1）式中其中

式(1-1)稱為一元線性回歸方程，b稱為回歸系數(shù)，即回歸直線的斜率，a為截距。UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法17例：用光度法測(cè)定合金鋼中Mn的含量，吸光度與Mn的含量間有下列關(guān)系：

Mn的質(zhì)量/μg00.020.040.060.080.100.12未知樣

吸光度/A0.0320.1350.1870.2680.3590.4350.5110.242

試求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及其相關(guān)系數(shù)r并計(jì)算未知樣品中Mn的含量解：此組數(shù)據(jù)中，組分濃度為零時(shí)，吸光度不為零，這可能是在試劑中含有少量Mn，或者含有其它在該測(cè)量波長(zhǎng)下有吸光的物質(zhì)。設(shè)Mn含量值為x，吸光度值為y，按公式計(jì)算回歸系數(shù)a，b值。n=7。所以該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為

y=0.038+3.95xUV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法-實(shí)例18未知樣品的吸光度為y=0.2420.242=0.038+3.95x所以x=0.052μg故求出樣品中含Mn為0.052μg(注：該題可用計(jì)算機(jī)方便統(tǒng)計(jì)處理)相關(guān)系數(shù)UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法-實(shí)例19-特點(diǎn)：用于可見分光光度法

批量生產(chǎn)曲線可多次使用UV-標(biāo)準(zhǔn)曲線法21吸收系數(shù)法含量（%）=A×D×V×L×100×W×100%注意：儀器波長(zhǎng)空白校正吸收度準(zhǔn)確度的檢定雜散光的檢查優(yōu)點(diǎn)：無需對(duì)照品，方法簡(jiǎn)便A×D×1%×V×L×W含量（%）=×100%22注意事項(xiàng)光源選擇波長(zhǎng)吸收池種類溶液高度吸收度讀數(shù)范圍供試品應(yīng)取2份

（對(duì)照品比較法，對(duì)照品一般也應(yīng)取2份）平行操作，平均偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)23例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑。每片含環(huán)維黃楊星D0.5mg或1mg?？捎脤?duì)照品比較法測(cè)其含量。環(huán)維黃楊星D25對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對(duì)照品25mg（實(shí)際稱取24.94mg)，置250ml量瓶中，加甲醇70ml使溶解，用0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，用0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含黃楊星D10μg的對(duì)照溶液（實(shí)際濃度C對(duì)=9.976μg/ml）試寫出計(jì)算過程例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定26供試品溶液的制備取本品20片（標(biāo)示量為0.5mg/片），精密稱定（2.050g)，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于黃楊寧0.5mg）(稱取0.1021g)，置50ml量瓶中，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至近刻度，80℃水浴恒溫1.5小時(shí)后取出，冷卻至室溫，加0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，離心6分鐘（3000轉(zhuǎn)/分），取上清液，即可若標(biāo)示量為1mg/片，其他數(shù)值不變，試求取樣范圍？例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測(cè)定29六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測(cè)定取裝量差異項(xiàng)下的本品約2g，研細(xì)，精密稱定，用水蒸汽蒸餾，收集餾出液約450ml，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法在274nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按丹皮酚（C9H10O3）的吸收系數(shù)為862計(jì)算，即得。藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每袋（裝量為5g）含牡丹皮按丹皮酚（C9H10O3

）計(jì)，不得少于6.0mg。301g供試品中含牡丹皮按丹皮酚計(jì)，含量為：含量（%）=A供×1%×500.0×1000862×m供每袋六味地黃顆粒（5g裝）含牡丹皮按丹皮酚計(jì)含量為：含量（mg/g）=A供×1%×500.0×1000×平均裝量862×m供六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測(cè)定31儀器分析法之薄層掃描法（TLCS）32概念：指用一定波長(zhǎng)的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品質(zhì)量檢測(cè)的方法色譜條件：選擇性好，組分能完全分離，斑點(diǎn)對(duì)稱、均勻、不拖尾。測(cè)量方法：多使用反射法光源氘燈：200~370nm鎢燈：370~700nm氙燈汞燈薄層掃描法33薄層掃描法有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。常用外標(biāo)法外標(biāo)法系指將一定量的供試品溶液和對(duì)照品溶液分別交叉點(diǎn)加在同一塊薄層板上，展開，顯色，定位，掃描待測(cè)組分和對(duì)照品斑點(diǎn)，測(cè)定相應(yīng)的吸光度或熒光強(qiáng)度積分值，計(jì)算被測(cè)成分的含量。外標(biāo)一點(diǎn)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線通過原點(diǎn)，馬錢子散等個(gè)別品種外標(biāo)兩點(diǎn)法：標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)，絕大多數(shù)品種采用所謂一點(diǎn)法是指在一塊薄層板上對(duì)照品的濃度為一種點(diǎn)樣濃度，兩點(diǎn)法則是指在一塊薄層板上對(duì)照品的濃度為兩種點(diǎn)樣濃度。操作方法：供試品溶液：兩份或以上點(diǎn)樣：供試品和對(duì)照品交叉點(diǎn)樣，每份原點(diǎn)不得少于2個(gè)展開：展距為15cm薄層掃描法34掃描方式：

單波長(zhǎng)

雙波長(zhǎng)測(cè)定波長(zhǎng)被測(cè)組分λmax，

參比波長(zhǎng)組分無吸收位置上若背景有均勻污染時(shí)，可選擇背景光譜中與測(cè)定波長(zhǎng)的等吸收處。薄層掃描法薄層掃描法計(jì)算外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)二點(diǎn)法35

薄層掃描法馬錢子散中馬錢子的含量測(cè)定：【含量測(cè)定】取裝量差異項(xiàng)下的本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷20ml，濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱定重量后，于室溫放置24小時(shí)，再稱定重量，用三氯甲烷量補(bǔ)足減失重量，充分振搖，濾過，濾液作為供試品溶液。另取士的寧對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液8μl和對(duì)照品溶液4μl，交叉點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（16:12:1:4）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。照薄層色譜法（附錄ⅥB薄層色譜掃描法）進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λS=257nm，λR＝300nm，測(cè)量供試品與對(duì)照品吸光度積分值，計(jì)算，即得。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：m對(duì)=24.90mg,mS=0.5324,A對(duì)=22000.73,A供=15659.12本品每袋含馬錢子以士的寧計(jì)（C21H22N2O2）應(yīng)為7.2～8.8mg。36薄層掃描法馬錢子散中馬錢子的含量測(cè)定37薄層掃描法大山楂丸中山楂的含量測(cè)定：【含量測(cè)定】取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，混勻，取約3g，精密稱定，加水30ml，60℃水浴溫?zé)崾钩浞秩苌?，加硅藻?g，攪勻，濾過，殘?jiān)盟?0ml洗滌，100℃烘干，連同濾紙一并置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收溶劑至干，殘?jiān)檬兔眩?0～60℃）浸泡2次（每次約2分鐘），每次5ml，傾去石油醚液，殘?jiān)訜o水乙醇-三氯甲烷（3:2）的混合溶液適量，微熱使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，用上述混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄VIB）試驗(yàn)，分別精密吸取供試品溶液5μl、對(duì)照品溶液4μl與8μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20:5:8:0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法（附錄ⅥB薄層色譜掃描法）進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λS=535nm；λR=650nm，測(cè)量供試品吸光度積分值與對(duì)照品吸光度積分值，計(jì)算，即得。測(cè)得數(shù)據(jù)：A供=5659.12、A對(duì)1=2057.73、A對(duì)2=7901.25。本品每丸含山楂以熊果酸（C30H4803）計(jì)，不得少于7.0mg。38薄層掃描法大山楂丸中山楂的含量測(cè)定39補(bǔ):分析天平使用和稱量感量0.1mg0.01mg0.001mg用途：較精密的檢驗(yàn)工作稱量含量測(cè)定對(duì)照品稱量滴定液標(biāo)化微量水分測(cè)定40補(bǔ):分析天平使用前準(zhǔn)備精度選擇：精密稱定大于100mg，感量為0.1mg天平100~10mg，感量為0.01mg天平小于10mg，感量為0.001mg天平檢查該天平的使用登記表檢查水準(zhǔn)器內(nèi)的氣泡：水準(zhǔn)器圓的中心位置檢查硅膠軟毛刷輕刷天平調(diào)好零點(diǎn)41高效液相色譜法在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法適用范圍溶解后能制成溶液的樣品不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子和離子型樣品均可檢測(cè)用途廣泛，占有機(jī)物的80%特點(diǎn)高柱效（n=104片/米）高靈敏度高選擇性分析速度快42高效液相色譜法儀器高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、色譜系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1.儲(chǔ)液罐；2.脫氣裝置；3.梯度洗脫；4.高壓輸液泵；5.流動(dòng)相流量顯示；6.柱前壓力表；7.輸液泵頭；8.過濾器；9.阻尼器；10.進(jìn)樣裝置；11.色譜柱；12.檢測(cè)器；13.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；14.廢液儲(chǔ)罐43高效液相色譜法儀器高壓輸液系統(tǒng)貯液罐：盛裝流動(dòng)相過濾器：過濾流動(dòng)相中的塵?；虿蝗苄缘念w粒物質(zhì)高壓輸液泵：完成流動(dòng)相的輸送任務(wù)進(jìn)樣系統(tǒng)六通進(jìn)樣閥進(jìn)樣：定量環(huán)定量和微量注射器定量自動(dòng)進(jìn)樣器色譜系統(tǒng)：色譜柱和柱溫箱檢測(cè)系統(tǒng)：紫外檢測(cè)器（UVD）、二極管陣列檢測(cè)器（DVD）、熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器和質(zhì)譜檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)44HPLC進(jìn)樣裝置隔膜進(jìn)樣（高分子有機(jī)硅膠墊→進(jìn)樣室）HPLC系統(tǒng)壓力太大，必須停泵進(jìn)樣（早期）閥進(jìn)樣：不必停泵，六通閥45透明(棕色)玻璃樣品瓶自動(dòng)進(jìn)樣器高效液相色譜法色譜柱--ODS柱非極性固定相反相色譜法流動(dòng)相：極性流動(dòng)相甲醇-水乙腈-水洗脫梯度洗脫等度洗脫極性大組分先出柱，極性小的組分后出柱46

高效液相色譜法高效液相色譜法HPLC流出曲線和色譜峰流出曲線（色譜圖）：電信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間變化曲線色譜峰：流出曲線上突起部分4748基本概念基線：當(dāng)沒有待測(cè)組分進(jìn)入檢測(cè)器時(shí)，反映檢測(cè)器噪音隨時(shí)間變化的曲線；穩(wěn)定—平直直線噪音：儀器本身所固有的，以噪音帶表示（儀器越好，噪音越?。┢疲海▋x器未穩(wěn)定造成），基線向某個(gè)方向穩(wěn)定移動(dòng)保留時(shí)間tR：從進(jìn)樣開始到組分出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所需時(shí)間，即組分通過色譜柱所需要的時(shí)間死時(shí)間tm：不被固定相溶解或吸附的組分的保留時(shí)間（即組分在流動(dòng)相中的所消耗的時(shí)間），或流動(dòng)相充滿柱內(nèi)空隙體積占據(jù)的空間所需要的時(shí)間，又稱流動(dòng)相保留時(shí)間調(diào)整保留時(shí)間tR’：組分的保留時(shí)間與死時(shí)間之差值，即組分在固定相中滯留的時(shí)高效液相色譜法色譜圖及其參數(shù)（見圖）保留時(shí)間tR

：定性峰高h(yuǎn)

：峰頂?shù)交€的距離。可用于定量半峰寬W1/2：峰高一半處的寬度峰寬W：從色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)作切線與基線相交部分峰面積A：色譜峰與基線之間所包括的面積，常用來定量49高效液相色譜法不對(duì)稱因子正常峰（對(duì)稱）非正常峰前沿峰拖尾峰色譜峰——fs在0.95~1.05之間——fs小于0.95——fs大于1.05HPLC流出曲線和色譜峰高效液相色譜法系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：理論塔板數(shù)（n）：分離度（R）：重復(fù)性對(duì)照溶液（待測(cè)物質(zhì)或其他）連續(xù)進(jìn)樣3～5次相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%拖尾因子（T）：0.95～1.05高效液相色譜法分離度計(jì)算相臨兩組分間峰頂間距離是峰底寬平均值的幾倍（衡量色譜分離條件優(yōu)劣的參數(shù)）5222112WWttRRR+-==峰寬和之半）保留值之差（峰頂間距高效液相色譜法操作方法操作前的準(zhǔn)備：儀器檢查流動(dòng)相的制備純化供試品和對(duì)照品溶液配制（各兩份）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)測(cè)定法定量依據(jù)：峰面積（或峰高）定量雜質(zhì)含量：峰面積法53高效液相色譜法含量測(cè)定面積歸一法[C%]=[Ai/A]×100%內(nèi)標(biāo)加校正因子法：少用外標(biāo)法:常用54高效液相色譜法三黃片（小片）中大黃的測(cè)定檢驗(yàn)依據(jù)（《中國(guó)藥典》2010年版一部457頁）【處方】大黃300g鹽酸小檗堿5g黃芩浸膏21g55高效液相色譜法【含量測(cè)定】大黃照高效液相色譜法（附錄ⅥD）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備取大黃素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每1ml含大黃素10μg、大黃酚25μg的混合液，即得。供試品溶液的制備取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)（過三號(hào)篩），取約0.26g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加乙醇25ml，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置燒瓶中，蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10:1）混合溶液15ml，置水浴中加熱水解1小時(shí)，立即冷卻，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取4次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每片含大黃以大黃素（C15H10O5）和大黃酚（C15H10O4）總量計(jì)，小片不得少于1.55mg；大片不得少于3.1mg。56高效液相色譜法：三黃片中大黃的測(cè)定流動(dòng)相的配制取甲醇（色譜純）425ml和0.1%磷酸溶液75ml混合均勻，用0.45μm的濾膜過濾，超聲處理30min，即得。對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取大黃素對(duì)照品25mg和大黃酚對(duì)照品63mg，置25ml量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液至刻度，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液至刻度，搖勻，用0.45μm的濾膜過濾，即得。供試品溶液的制備取本品20片，用小刀除去包衣（注意勿損失內(nèi)容物），精密稱定，置研缽中研細(xì)后，過三號(hào)篩，取約0.26g，置錐形瓶中，依法操作，即得。測(cè)定，照高效液相色譜法測(cè)定。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：20片總重量為5.3100g；m供=0.2610g、m對(duì)（大黃素）=0.02509g、m對(duì)（大黃酚）=0.06286g；A供（大黃素）=285721、A供（大黃酚）=538079、A對(duì)（大黃素）463379、A對(duì)（大黃酚）=1300561。57高效液相色譜法：三黃片中大黃的測(cè)定58高效液相色譜法：三黃片中大黃的測(cè)定

【處方】黃連165g大黃500g黃芩250g【含量測(cè)定】照高效液相色譜法(附錄ⅥＤ)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇－0.2mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7）(42∶58)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對(duì)照品12.5mg，置250ml量瓶中,加甲醇10ml使溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml中含黃芩苷50μg)。供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.75g，精密稱定，置100ml量瓶中,加甲醇10ml，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）10分鐘，放冷，加水稀釋至刻度,搖勻，離心，取上清液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定，即得。本品每袋含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì)，不得少于21mg。59高效液相色譜法：一清顆粒氣相色譜法氣相色譜法：以氣體為流動(dòng)相的柱色譜分離技術(shù)分類按固定相分氣-固色譜氣-液色譜按分離原理分吸附色譜分配色譜按柱子粗細(xì)分填充柱色譜毛細(xì)管柱色譜適用性分析氣體、易揮發(fā)的液體及固體不適合分析不易氣化或不穩(wěn)定性物質(zhì)樣品的衍生化使應(yīng)用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大

60氣相色譜法氣相色譜儀的組成載氣系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)61

載氣→減壓→凈化→穩(wěn)壓→色譜柱→檢測(cè)器→記錄儀

進(jìn)樣62氣相色譜法流出曲線（色譜圖）：電信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間變化曲線色譜峰：流出曲線上突起部分63不對(duì)稱因子正常峰（對(duì)稱）非正常峰前沿峰拖尾峰色譜峰——fs在0.95~1.05之間——fs小于0.95——fs大于1.05氣相色譜法操作前準(zhǔn)備樣品溶液和對(duì)照品溶液的制備：定量測(cè)定時(shí)，對(duì)照品溶液和供試品溶液均應(yīng)分別配制2份。儀器檢查系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：同高效液相色譜法理論板數(shù)分離度重復(fù)性：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%拖尾因子64氣相色譜法氣相色譜法氣相色譜實(shí)驗(yàn)條件的選擇柱溫的選擇載氣與流速的選擇進(jìn)樣條件的選擇氣化室溫度——一般稍高于樣品沸點(diǎn)檢測(cè)室溫度——應(yīng)高于柱溫30～500C進(jìn)樣量——不可過大，否則造成拖尾峰66氣相色譜法定性定量分析定性分析保留時(shí)間比較法定量分析：以峰高或峰面積定量峰面積的測(cè)量定量校正因子定量方法歸一化法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)對(duì)比法67氣相色譜法定量分析：以峰高或峰面積定量歸一化法前提：試樣中所有組分都產(chǎn)生信號(hào)并能檢出色譜峰依據(jù)：組分含量與峰面積成正比優(yōu)點(diǎn)簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確定量結(jié)果與進(jìn)樣量、重復(fù)性無關(guān)（前提→柱子不超載）色譜條件略有變化對(duì)結(jié)果幾乎無影響缺點(diǎn)：

所有組分必須在一定時(shí)間內(nèi)都出峰必須已知所有組分的校正因子不適合微量組分的測(cè)定68氣相色譜法定量分析外標(biāo)法：以待測(cè)組分純品為對(duì)照物，與試樣中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法工作曲線法：i純品→工作曲線，同體積樣品與之比較c前提：進(jìn)入檢測(cè)器樣品量與峰面積成正比外標(biāo)一點(diǎn)法：一種濃度對(duì)照物對(duì)比樣品中待測(cè)組分含量前提：截距為0，對(duì)照品濃度與待測(cè)組分濃度接近外標(biāo)兩點(diǎn)法：前提：選取兩點(diǎn)對(duì)照品的濃度，需涵蓋待測(cè)濃度外標(biāo)法特點(diǎn)不需要校正因子，不需要所有組分出峰結(jié)果受進(jìn)樣量、進(jìn)樣重復(fù)性和操作條件影響大每次進(jìn)樣量應(yīng)一致，否則產(chǎn)生誤差69氣相色譜法70氣相色譜法定量分析-內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法是以待測(cè)組分純品為對(duì)照物，與試樣中待測(cè)組分的響應(yīng)信號(hào)相比較進(jìn)行定量的方法優(yōu)點(diǎn)進(jìn)樣量不超量時(shí)，重復(fù)性及操作條件對(duì)結(jié)果無影響只需待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物出峰，與其他組分是否出峰無關(guān)適合測(cè)定微量組分缺點(diǎn)：制樣要求高；找合適內(nèi)標(biāo)物困難；已知校正因子對(duì)內(nèi)標(biāo)物要求：內(nèi)標(biāo)物須為原樣品中不含組分內(nèi)標(biāo)物與待測(cè)物保留時(shí)間應(yīng)接近且R>1.5內(nèi)標(biāo)物為高純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或含量已知物質(zhì)定量分析-內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法是根據(jù)待測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比與其濃度比在一定濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，對(duì)組分進(jìn)行定量分析，對(duì)照品溶液和供試品溶液中分別加入相同量的內(nèi)標(biāo)溶液，在相同條件下分別測(cè)定其中被測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)物的色譜峰峰面積計(jì)算校正因子的計(jì)算含量計(jì)算71氣相色譜法檢驗(yàn)依據(jù)（《中國(guó)藥典》2010年版一部471頁）【處方】川貝母流浸膏45ml桔梗45g枇杷葉300g薄荷腦0.34g川貝枇杷糖漿由川貝母流浸膏、桔梗、枇杷葉、薄荷腦四味中藥制備而成。薄荷腦具局麻作用，有薄荷的特殊香氣，味初灼熱后清涼，可掩蓋苦味；在乙醇、三氯甲烷、乙醚中極易溶解，在水中極微溶解。《中國(guó)藥典》采用揮發(fā)油測(cè)定法（附錄XD）試驗(yàn)，用環(huán)己烷為溶劑提取、氣相色譜法測(cè)定薄荷腦含量。72氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測(cè)定薄荷腦對(duì)照品氣相色譜圖川貝枇杷糖漿氣相色譜圖【含量測(cè)定】照氣相色譜法（附錄ⅥE）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)改性聚乙二醇毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度0.25μm）；柱溫為110℃，分流進(jìn)樣，分流比為25:1，理論板數(shù)按萘峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。校正因子測(cè)定取萘適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml含15mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取薄荷腦對(duì)照品75mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻。吸取1μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。測(cè)定法精密量取本品50ml，加水250ml，照揮發(fā)油測(cè)定法（附錄XD）試驗(yàn)，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3ml，連接回流冷凝管，加熱保持微沸4小時(shí)，放冷，將測(cè)定器中的液體移至分液漏斗中，冷凝管及揮發(fā)油測(cè)定管內(nèi)壁用少量環(huán)己烷洗滌，并入分液漏斗中，分取環(huán)己烷液，水液再用環(huán)己烷提取2次，每次3ml，用鋪有無水硫酸鈉0.5g的漏斗濾過，合并環(huán)己烷液，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。吸取1μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每1ml含薄荷腦（C10H20O）應(yīng)不少于0.20mg。73氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測(cè)定校正因子測(cè)定精密稱定環(huán)己酮75.15mg，置5ml量瓶中，加無水乙醇適量溶解并稀釋至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另精密稱取薄荷腦對(duì)照品73.26mg，置5ml量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻。吸取1μl，注入氣相色譜儀，計(jì)算校正因子。測(cè)定法精密量取本品50ml，加水250ml，照揮發(fā)油測(cè)定法（附錄XD）試驗(yàn)，自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3ml，連接回流冷凝管，加熱保持微沸4小時(shí)，放冷，將測(cè)定器中的液體移至分液漏斗中，冷凝管及揮發(fā)油測(cè)定管內(nèi)壁用少量環(huán)己烷洗滌，并入分液漏斗中，分取環(huán)己烷液，水液再用環(huán)己烷提取2次，每次3ml，用鋪有無水硫酸鈉0.5g的漏斗濾過，合并環(huán)己烷液，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。吸取1μl，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：m內(nèi)為75.15mg、m對(duì)為73.26mg；A內(nèi)=851302.0、A對(duì)=798023.5、=841603.2、A供=814180.5。74氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測(cè)定75氣相色譜法-川貝枇杷糖漿中薄荷腦的測(cè)定

檢驗(yàn)依據(jù)（《中國(guó)藥典》2010年版一部1222頁）【檢查】乙醇量應(yīng)為60%～70%（附錄ⅨM）測(cè)定:精密量取恒溫至20℃的顛茄酊8ml和正丙醇5ml，置100ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取恒溫至20℃的無水乙醇5ml和正丙醇5ml，置100ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各2μl，連續(xù)進(jìn)樣3次，測(cè)得校正因子（f）分別為0.6925、0.6921、0.6918。AX/AS分別為1.466、1.458、1.431。求出該供試品乙醇量及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。76氣相色譜法-顛茄酊中乙醇量的檢查

77氣相色譜法-顛茄酊中乙醇量的檢查

78氣相色譜法79適用性浸出物測(cè)定有效成分不清楚的無定量方法的有效成分溶解性能藥用部位制劑處方溶劑→浸出物→含量→質(zhì)量測(cè)定方法水溶性浸出物測(cè)定法醇溶性浸出物測(cè)定法揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法前處理粉碎二號(hào)篩（水、醇）四號(hào)篩（醚）80浸出物測(cè)定81水溶性浸出物測(cè)定法溶劑：水水溶性成分方法冷浸法熱浸法不含或少含淀粉、黏液質(zhì)浸出物測(cè)定水溶性浸出物測(cè)定法冷浸法:取供試品約4g，稱定重量，置250～300ml的錐形瓶中，精密加入水100ml，塞緊，冷浸，前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴蒸干后，于1