選修三復習6221課件

專題1基因工程（DNA分子水平）1、基因工程的原理：基因重組2、基因工程的基本工具限制酶

DNA載體①分子手術刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）來源：原核生物功能：識別DNA特定序列，切割特定部位

的磷酸二酯鍵，具專一性。結(jié)果：黏性末端和。②.“分子縫合針”——DNA連接酶

E·coliDNA連接酶作用：黏性末端之間的磷酸二酯鍵T4DNA連接酶

來源：T4噬菌體作用：能縫合兩種末端③.“分子運輸車”——載體條件：A.能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存。B.具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。C.具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。質(zhì)粒：結(jié)構(gòu)簡單、自我復制、雙鏈環(huán)狀DNA載體種類：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒3、基因工程的基本操作程序①目的基因的獲取方法：基因文庫中獲取（基因組文庫，cDNA文庫）

人工合成（反轉(zhuǎn)錄法）

PCR（原理：DNA復制。條件：引物、模板DNA、四種脫氧核苷酸、DNA聚合酶）②基因表達載體的構(gòu)建（核心）組成：目的基因＋啟動子＋終止子＋標記基因4、基因工程的應用基因治療：把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因表達產(chǎn)物發(fā)揮作用轉(zhuǎn)基因生物：導入外源基因的生物

5、蛋白質(zhì)工程制造新的蛋白質(zhì)

又稱為第二代的基因工程基本途徑：預期的蛋白質(zhì)功能、設計蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、推測氨基酸序列、合成基因。依據(jù)：蛋白質(zhì)的功能本質(zhì)：改造基因結(jié)構(gòu)專題22.1植物細胞工程1.植物細胞工程

原理：細胞全能性2.植物組織培養(yǎng)：離體的植物器官、組織或細胞最終形成完整植物體3.用途：微型繁殖、作物脫毒（分生區(qū)附近的病毒極少或沒有）、制造人工種子（根、芽）、單倍體育種、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)（愈傷組織）。誘導融合的方法：物理法離心、振動、電激。

化學法聚乙二醇（PEG）融合完成的標志：雜種細胞再生出細胞壁（高爾基體）意義：克服了遠緣雜交不親和的障礙。植物體細胞雜交原理：細胞的全能性、細胞膜的流動性2.2動物細胞工程1.動物細胞培養(yǎng)（原理：細胞增殖）：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理成單個細胞→制成細胞懸液→原代培養(yǎng)（10代內(nèi)）→重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→傳代培養(yǎng)。2.細胞貼壁和接觸抑制：3.動物細胞培養(yǎng)條件：①無菌、無毒的環(huán)境②營養(yǎng)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、血清、血漿。③溫度④氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。O2是細胞代謝所必需的，CO2是維持培養(yǎng)液的pH。5.動物細胞融合原理：細胞膜的流動性誘導方法：物理、化學、生物（滅活仙臺病毒）意義：克服了遠緣雜交的不親和性應用：制備單克隆抗體動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較6.單克隆抗體雜交瘤細胞的特點：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。單克隆抗體流程圖專題3胚胎工程

1.精子與卵細胞形成的區(qū)別場所、時間（精母細胞和卵母細胞）、精子有變形、減一減二是否連續(xù)2.精細胞變精子（每部分變化）3.精卵的準備4.受精過程（2道屏障、是否受精標志和受精完成標志）5.胚胎發(fā)育過程卵裂期特點6.卵母細胞的采集方法7.精母細胞的采集方法、獲能方法8.早期胚胎培養(yǎng)液成分9.胚胎移植流程圖10.胚胎移植生理學基礎11.胚胎分割：時期、均等分割原因12.胚胎干細胞特點3.受精：受精場所：輸卵管受精準備：精子獲能

卵子（減二中期）排卵:卵子從卵泡中排出，排出的卵可能是初級卵母細胞也可能是次級卵母細胞。受精階段：頂體反應——穿越放射冠——穿越透明帶（透明帶反應——第一道屏障）——精子入卵（卵黃膜封閉作用-—第二道屏障）——雄原核、雌原核形成——雌雄原核融合（受精完成標志）是否受精標志：卵黃膜與透明帶間隙可觀察到兩個極體4.胚胎發(fā)育：受精卵——胎兒（幼體）卵裂期：有絲分裂，細胞未分化

細胞數(shù)量增加，有機物總量減少，總體積不增加或略有減小。每個細胞體積變小，DNA不變。

桑椹胚：32個細胞左右的胚胎

全能細胞囊胚：細胞開始分化

內(nèi)細胞團：將來發(fā)育成胎兒的各種組織；

滋養(yǎng)層細胞：將來發(fā)育成胎膜和胎盤

囊胚腔孵化：原腸胚：原腸腔

有三胚層的分化程度：受精卵>各種干細胞>精細胞（卵細胞）>體細胞5.體外受精：有性生殖過程卵母細胞的采集方法：

從輸卵管沖取卵子（可直接受精）

從活體動物的卵巢中吸取卵母細胞卵母細胞的培養(yǎng)：減數(shù)第二次分裂中期精子的采集：假陰道法、手握法和電刺激法精子獲能方法：培養(yǎng)法化學法（肝素或鈣離子載體）受精：獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^程胚胎的早期培養(yǎng)培養(yǎng)液成分：無機鹽、有機鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清。當胚胎發(fā)育到適宜的階段時，可將其取出向受體移植或冷凍保存7.胚胎分割：來自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，屬于無性繁殖胚胎分割時間：桑椹胚或囊胚操作過程：對囊胚階段的胚胎要將內(nèi)細胞團均等分割，

否則會影響分割后胚胎的恢復和進一步發(fā)育。8