實驗九法鑒定人類性別

實驗九法鑒定人類性別第1頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗原理PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種選擇性體外擴(kuò)增DNA或RNA的方法。1985年，美國PE公司KaryMullis（1993年諾貝爾化學(xué)獎）PCR的過程及參數(shù)設(shè)置：①變性②退火③延伸PCR的主要成分：①模板：雙鏈或單鏈DNA分子②引物③四種dNTP④TaqDNA聚合酶⑤反應(yīng)緩沖液：Tris.Cl、KCl、Mg2+DYZ基因位于Y染色體長臂，參與精子的生成。第2頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗?zāi)康?、了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技術(shù)2、應(yīng)用PCR方法進(jìn)行人類性別的鑒定第3頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗材料人體毛囊細(xì)胞。第4頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗設(shè)備與藥品1、設(shè)備：PCR儀、高速離心機(jī)、電泳儀及電泳槽、移液器各型槍頭及離心管、凝聚成像系統(tǒng)等。2、藥品：PCR各成分、1.5％瓊脂糖、1×TAE、溴酚藍(lán)、DNA染料、DNAmark等。第5頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六實驗步驟一、DNA模板準(zhǔn)備

取一支1.5ml的EP管，加入50ulddH2O；取兩根帶毛囊的頭發(fā)，將毛囊端浸在ddH2O中，蓋上EP管蓋；100℃煮沸10min后，立即轉(zhuǎn)入0℃冷藏10min；12000離心5min，得上清液放置。第6頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六二、PCR擴(kuò)增體系（50ul體系）

5ul模板DNA32.6ulddH2O 5ul10×PCRBuffer2ul25mmol/LMgCl2 2ul引物Y3 2ul引物Y4 1uldNTPs0.4ulTaqDNA聚合酶（5U/ul）45×9

293.4ul45ul18ul18ul18ul9ul50ul第7頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六三、擴(kuò)增

放入PCR儀，設(shè)定擴(kuò)增參數(shù)：（1）94℃預(yù)變性3min；（2）94℃變性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min；35個循環(huán)（3）72℃延伸8min；（4）4℃保存。第8頁，共11頁，2023年，2月20日，星期六四、電泳檢測取10ul擴(kuò)增產(chǎn)物，加入溴酚藍(lán)3ul，在1×TAE電泳緩沖液中，用1.5％瓊脂糖電泳分析（100V，45min），電泳后在成像系統(tǒng)下觀察照相，檢查反應(yīng)產(chǎn)物及長度。第9頁，共11頁，2023年，2月20日，