新方法新技術(shù)

新方法新技術(shù)第1頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六手性分離色譜第2頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六一、手性藥物的現(xiàn)狀手性藥物（579）藥物（1992）天然和半合成藥物（556）合成藥物（1436）非手性藥物（857）單一異構(gòu)體（73）外消旋體（506）手性藥物（547）非手性藥物（9）單一異構(gòu)體（537）外消旋體（10）第3頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六二、手性藥物對(duì)映體的藥效學(xué)差異1.治療作用完全依賴一種異構(gòu)體如：S(-)-α-甲基多巴2.藥理作用差別不大如：異丙嗪3.藥理作用類似，但反應(yīng)強(qiáng)度有差別4.藥理與毒理作用存在“質(zhì)”的區(qū)別第4頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六二、手性藥物對(duì)映體的藥動(dòng)學(xué)差異1.吸收2.蛋白結(jié)合3.代謝第5頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六1.間接法拆分對(duì)映異構(gòu)體即衍生化試劑法（CDR）2.直接法拆分對(duì)映異構(gòu)體手性固定相法（CSP）手性流動(dòng)相添加劑法（CMP）三、手性藥物拆分的高效液相色譜法分類采用非手性固定相第6頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六四、拆分原理：1.CDR(R)–SE+(R)–SA→(R)–SE–(R)–SA(S)–SA→(R)–SE–(S)–SA第7頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六第8頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六手性衍生化特點(diǎn)：需要高光學(xué)純度的手性衍生化試劑；反應(yīng)繁瑣費(fèi)時(shí)；衍生化反應(yīng)速率重現(xiàn)性較差只需使用價(jià)格便宜、柱效較高的非手性柱衍生化過程可同時(shí)純化樣品第9頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六柱前衍生化-反相高效液相色譜法拆分酮洛芬對(duì)映異構(gòu)體S-()-酮洛芬R-(-)-酮洛芬第10頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六酮洛芬對(duì)映體的柱前衍生化示意圖＊＊第11頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六酮洛芬對(duì)映體的柱前衍生化方法酮洛芬對(duì)照品溶液(1mg/mL)0.1mL加入正己烷0.6mL二氯亞砜溶液0.2mL75℃1h冷卻至室溫吹干后加入S-NEA溶液0.2mL5min振搖加入2.0mol/LH2SO40.5mL混勻吹干后溶解進(jìn)樣二氯甲烷:乙醚2:1第12頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六色譜條件色譜柱：HypersilC18,5m,1505.0mmID，流動(dòng)相：乙腈水-乙酸-三乙胺(55:45:0.1:0.02，v/v)，流速：1ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm第13頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六酮洛芬對(duì)映體衍生化物色譜圖RS酮洛芬對(duì)映體衍生化物的保留時(shí)間為tR=7.3min，tR=8.5min，分離度為1.9第14頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六2.CSP利用手性固定相與對(duì)映體消旋物相互作用，其中一個(gè)與手性固定相生成不穩(wěn)定的短暫的對(duì)映體復(fù)合物，使兩種異構(gòu)體在色譜柱上的保留時(shí)間不同，從而得到分離。第15頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六常用的手性固定相：1.Pirkle型相2.合成多聚相3.環(huán)糊精鍵合相第16頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六特點(diǎn)適用范圍廣制備分離方便定量分析的可靠性高價(jià)格昂貴第17頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六奈基乙脲鍵合硅膠柱拆分蘇氨酸（A）和苯丙氨酸（B）的p-溴代苯甲酰胺衍生物對(duì)映體色譜圖第18頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六3.CMP將手性試劑添加到流動(dòng)相中，利用手性試劑與藥物消旋物中各對(duì)映體結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)不同，以及藥物與結(jié)合物在固定相上分配的差異，實(shí)現(xiàn)對(duì)映體的分離。第19頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六常用的手性添加劑：1.配基交換型手性添加劑2.手性離子對(duì)絡(luò)合劑3.環(huán)糊精添加劑第20頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六特點(diǎn)可采用普通的非手性固定相不需對(duì)樣品進(jìn)行衍生化手性添加物的可變范圍較寬第21頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六高效毛細(xì)管電泳（HPCE）第22頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六HPCE是經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的一種快速、高效的液相分離技術(shù)。具有以下特點(diǎn)：1.高效2.高速3.微量4.低消耗第23頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六高壓電源毛細(xì)管恒溫系統(tǒng)檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)毛細(xì)管緩沖液/樣品緩沖液（+）(－)毛細(xì)管電泳裝置示意圖第24頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六（一）基本原理：

v=veo+vep=(μeo+μep)E

veo：電滲流速度μeo：電滲流淌度

vep：電泳流速度μep：電泳流淌度E：電場(chǎng)強(qiáng)度第25頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六－－－－－－－－－－－－－－－－－－++++++++++++++++++++++++++(－)(+)電滲的產(chǎn)生第26頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六－－－－－－－－－－－－－－－－－－(－)(+)++++++++++++++++----------------毛細(xì)電泳中不同組分的遷移示意圖第27頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六（二）主要分離模式1.毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）2.膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜（MECC）3.毛細(xì)管凝膠電泳（CGE）4.毛細(xì)管等電聚焦（CIEF）

第28頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六模式緩沖液體系分離機(jī)理CZE自由緩沖液離子淌度MECC膠束－緩沖溶液疏水性/離子性相互作用CGE凝膠－緩沖溶液分子大小和荷電數(shù)目CIEF兩性電解質(zhì)等電點(diǎn)第29頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六1.毛細(xì)管區(qū)帶電泳最基本、最廣泛的分離模式。適用于所有具有不同淌度的荷電粒子的分離，但不能中性物質(zhì)及質(zhì)荷比相同的組分。

第30頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六2.膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜用離子膠束溶液代替簡(jiǎn)單的緩沖溶液，使中性組分可按其疏水性的不同及在兩相間的分配系數(shù)的不同而分離。采用手性分配相，可用于手性化合物的分離。第31頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六3.毛細(xì)管凝膠電泳凝膠的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)對(duì)溶質(zhì)具有分子篩的作用，可分離質(zhì)荷比相同但分子大小不同的組分。在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)化學(xué)上有著十分廣泛的應(yīng)用。第32頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六4.毛細(xì)管等電聚焦根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同而進(jìn)行分離。AAAAAABBBBBBCCCCDDDDDEEEEEFFAAAABBBBCCCCDDDDEEEEFFFFpH梯度高低第33頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六應(yīng)用：1.監(jiān)測(cè)藥物生產(chǎn)過程如：監(jiān)測(cè)青霉素發(fā)酵液中有關(guān)物質(zhì)的量第34頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六青霉素發(fā)酵液的高效毛細(xì)管電泳圖1.青霉素G鈉；2.6-APA；3.對(duì)羥基苯乙酸；4.鄰羥基苯乙酸；5.苯乙酸第35頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六2.中藥成分分析如：黃酮及其甙類分析第36頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六黃芩中6種黃酮類成分的膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜分離圖1.漢黃芩甙；2.黃芩素；3.黃芩甙；4.千層子素；5.漢黃芩素；6.內(nèi)標(biāo)水楊酸；7.白楊素第37頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六3.手性拆分4.體內(nèi)分析第38頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六質(zhì)譜法及其應(yīng)用進(jìn)樣系統(tǒng)離子源質(zhì)量分析器檢測(cè)器控制和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)真空系統(tǒng)第39頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六一、離子源及離子化技術(shù)

1、EI（電子轟擊離子化）V加速電壓試樣蒸汽陰極陽極電子束離子xyz電子轟擊質(zhì)譜示意圖第40頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，有豐富的碎片離子信息和成熟的離子開裂理論，是結(jié)構(gòu)分析、鑒定的有力手段；重現(xiàn)性好，有標(biāo)準(zhǔn)圖譜，可以通過譜庫檢索對(duì)未知物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。缺點(diǎn)：樣品須汽化后才可離子化適用化合物：易揮發(fā)、熱穩(wěn)定化合物。第41頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六2、CI（化學(xué)離子化）軟電離技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：可以得到較強(qiáng)的準(zhǔn)分子離子峰，有利于分子量的測(cè)定缺點(diǎn)：樣品須汽化后才可離子化適用化合物：易揮發(fā)、熱穩(wěn)定化合物第42頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六3、FAB（快原子轟擊離子化）軟電離技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：樣品不須汽化；既給出化合物的分子量信息，又給出結(jié)構(gòu)信息。適用范圍廣，儀器商品化較早，普及率高。缺點(diǎn)：重現(xiàn)性差，靈敏度較EI低。適用化合物：極性、高分子量、非揮發(fā)性及熱不穩(wěn)定化合物。第43頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六+++++快原子槍樣品靶原子束質(zhì)量分析器二次離子束快原子轟擊質(zhì)譜示意圖第44頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六4、MALDI（基質(zhì)輔助激光解吸離子化）軟電離技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：通常只給出分子離子峰（或準(zhǔn)分子離子峰）。適用化合物：蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸等生物大分子第45頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六5、API（大氣壓離子化）軟電離技術(shù)（1）ESI（電噴霧離子化）特點(diǎn)：能夠產(chǎn)生多電荷離子。適用化合物：對(duì)生物大分子及其他分子量大的化合物的分析較有利。第46頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六+++++－－－－－－+++++－－－－－－+++－－－－＋－－＋毛細(xì)管+4kV含離子的液滴隨液滴蒸發(fā)，電場(chǎng)加強(qiáng)，離子向表面移動(dòng)離子從表面蒸發(fā)離子蒸發(fā)機(jī)理第47頁，共50頁，2023年，2月20日，星期六（2）APCI（大氣壓化學(xué)離子化）最軟的電離方式之一特點(diǎn)：一般只給出化合物的分子量信息，通過源內(nèi)CID（