PCR實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備試劑和耗材使用管理演示文稿

PCR實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備試劑和耗材使用管理演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備試劑和耗材使用管理現(xiàn)在是2頁\一共有89頁\編輯于星期一常用儀器設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū)加樣器潔凈工作臺(tái)低溫冰箱標(biāo)本制備區(qū)生物安全柜高速(冷凍)離心機(jī)漩渦振蕩混旋器恒溫水浴箱（金屬?。┘訕悠鞅鋽U(kuò)增區(qū)（產(chǎn)物擴(kuò)增及分析區(qū)）PCR熱循環(huán)儀（DNA擴(kuò)增儀）現(xiàn)在是3頁\一共有89頁\編輯于星期一冰箱1、現(xiàn)在使用的冰箱的溫度是否標(biāo)示范圍內(nèi)？2、需要每天都記錄溫度嗎？現(xiàn)在是4頁\一共有89頁\編輯于星期一冰箱現(xiàn)在是5頁\一共有89頁\編輯于星期一冰箱現(xiàn)在是6頁\一共有89頁\編輯于星期一溫度計(jì)1、新購買的溫度計(jì)準(zhǔn)確嗎？2、需要做質(zhì)檢嗎？3、如何做質(zhì)檢？現(xiàn)在是7頁\一共有89頁\編輯于星期一溫度計(jì)現(xiàn)在是8頁\一共有89頁\編輯于星期一溫度計(jì)現(xiàn)在是9頁\一共有89頁\編輯于星期一天平一、分類1、超微量電子分析天平2-5g2、微量電子分析天平20-50g3、準(zhǔn)微量電子分析天平20-100g4、常量電子分析天平100-200g5、精密電子分析天平現(xiàn)在是10頁\一共有89頁\編輯于星期一天平現(xiàn)在是11頁\一共有89頁\編輯于星期一天平精密電子分析天平現(xiàn)在是12頁\一共有89頁\編輯于星期一天平二、影響重現(xiàn)性的因素1、潮濕2、靜電：最好用100%的玻璃容器。3、空氣浮力4、溫度5、氣流和通風(fēng)6、磁場(chǎng)和磁性樣品7、天平放置狀態(tài)現(xiàn)在是13頁\一共有89頁\編輯于星期一天平三、維護(hù)1、避免振動(dòng)。2、在密閉容器內(nèi)稱量揮發(fā)性和腐蝕性物品。3、定時(shí)清潔。4、避免移動(dòng)儀器。5、及時(shí)檢修，不可帶“病”工作。6、不可過載，損壞天平?，F(xiàn)在是14頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器放置地點(diǎn)：

試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)

標(biāo)識(shí)：

所在區(qū)域校準(zhǔn)狀態(tài)現(xiàn)在是15頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-類型單道連續(xù)可調(diào)式移液器多通道連續(xù)可調(diào)式移液器單道連續(xù)移液器單道移液管配合使用的移液器現(xiàn)在是16頁\一共有89頁\編輯于星期一現(xiàn)在是17頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用現(xiàn)在是18頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-型號(hào)和取液范圍型號(hào) 所用量程范圍（μL）

GILSONeppendorfP100.5-100.5-10P202-202-20P10020-10010-100P20020-20020-200P1000200-1000100-1000現(xiàn)在是19頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-技術(shù)指標(biāo)型號(hào) 容量準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)誤差）精度（重復(fù)性）2

(μL)絕對(duì)誤差(μL)相對(duì)誤差(%)標(biāo)準(zhǔn)誤差(μL）相對(duì)離差(%)P2 最小0.2±0.024±12≤0.012≤60.5±0.025±5≤0.012≤2.50

最大2±0.030±1.5≤0.014≤0.70P10最小1±0.025±2.5≤0.012 ≤1.255±0.075±1.5≤0.030≤0.60

最大10±0.10

±1≤0.040≤0.40P20最小2±0.1±5.0 ≤0.03≤1.505±0.1±2.0≤0.04≤0.8010±0.1±1.0≤0.05≤0.50

最大20±0.2±1.0 ≤0.06≤0.30P100最小20

±0.35±1.8≤0.10≤0.550

±0.4±0.8≤0.12≤0.24

最大100

±0.8±0.8≤0.15≤0.15

現(xiàn)在是20頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用現(xiàn)在是21頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用現(xiàn)在是22頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用吸液前進(jìn)式倒退式現(xiàn)在是23頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用把按鈕壓至第一停點(diǎn)垂直握持加樣器，使吸嘴浸入液樣中，浸入液體深度視型號(hào)而定：P2和P10≤1mmP20和P1002-3mmP200和P1000 2-4mmP50003-6mmP10ML5-7mm現(xiàn)在是24頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用放液將吸頭口貼到容器內(nèi)壁并保持10－40℃傾斜，緩慢平穩(wěn)地把按鈕壓到第1停點(diǎn)，等1s后將吸頭壓至第二點(diǎn)排出剩余液體，壓住按鈕，同時(shí)提起加樣器，使吸頭貼管壁擦過，松開按鈕，按吸頭彈射器去除吸頭。現(xiàn)在是25頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用注意事項(xiàng)根據(jù)所需取液量選擇相應(yīng)的移液器及吸頭，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)要求使用帶濾芯的吸頭，防止交叉污染。吸取液體時(shí)應(yīng)緩慢勻速吸取，避免液體濺到移液器頭上；打出液體后拇指應(yīng)緩慢松開按鈕，避免液體回吸。在調(diào)整取液量的旋鈕時(shí)，不要用力過猛，并應(yīng)注意計(jì)數(shù)器顯示的數(shù)值不要超過其可調(diào)范圍。連續(xù)可調(diào)式移液器不可在無吸頭時(shí)使用，吸頭有液體時(shí)不可平放或倒置?，F(xiàn)在是26頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用注意事項(xiàng)操作時(shí)要慢和穩(wěn)，吸嘴浸入液體深度要合適，吸液過程深度盡量保持不變改吸不同液體、樣品或試劑前更換新吸嘴發(fā)現(xiàn)吸嘴內(nèi)有殘液時(shí)必須更換；新吸嘴使用前應(yīng)先質(zhì)檢。為防止液體進(jìn)入移液器套筒內(nèi)，注意以下幾點(diǎn)：壓放按鈕時(shí)保持平穩(wěn)；移液器不得倒轉(zhuǎn)；使用了酸或有腐蝕蒸氣的溶液后，最好拆下套筒，用蒸餾水清洗活塞及密封圈?，F(xiàn)在是27頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-使用注意事項(xiàng)連續(xù)可調(diào)式移液器在取樣加樣過程中應(yīng)注意移液嘴不能觸及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、廢液瓶、所取試劑及加樣的樣品管應(yīng)擺放合理，以方便操作過程、避免污染為原則。連續(xù)可調(diào)式移液器在使用完畢后應(yīng)置于以液器架上，遠(yuǎn)離潮濕及腐蝕性物質(zhì)。在取液之前，所取液體應(yīng)在室溫（15-25C）平衡；液體溫度與室溫有異時(shí)，將吸嘴預(yù)洗多次再用；移液溫度不得超過70℃。不可把容量計(jì)數(shù)調(diào)超其適用范圍。現(xiàn)在是28頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣不準(zhǔn)確的原因用大量程的移液器移取小體積的液體裝配吸頭時(shí)氣密性不好，吸頭不匹配吸取的液體具有強(qiáng)揮發(fā)性液體的密度與水有明顯差異吸液速度和放液速度太快現(xiàn)在是29頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-維護(hù)及校準(zhǔn)維護(hù)1．一般維護(hù)可用中性洗滌劑（如洗餐具用的洗滌靈），或者用異丙醇清潔。然后用蒸餾水反復(fù)洗滌，去除洗滌劑或異丙醇，晾干。清潔后活塞處可使用一定量的潤滑劑。2．如果有液體進(jìn)入加樣器內(nèi)的嚴(yán)重污染，可以將加樣器拆開后進(jìn)行清潔，具體拆開步驟參照加樣器說明書（不同的加樣器的拆開方式有所不同）。3．高壓消毒，有的加樣器的吸管部分可高壓消毒（121℃及1巴壓力下消毒20分鐘），（如Eppendor的Research單道可調(diào)加樣器）。但消毒時(shí)不可超溫超時(shí)，也不能擠壓放置，以免造成變型。4．各區(qū)（試劑準(zhǔn)備、樣本提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)）的加樣器應(yīng)有各自的標(biāo)識(shí)，清潔和消毒時(shí)，應(yīng)分別處理?，F(xiàn)在是30頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-校準(zhǔn)校準(zhǔn)方式計(jì)量局廠家自校時(shí)間視使用頻率定(6個(gè)月-1年）現(xiàn)在是31頁\一共有89頁\編輯于星期一加樣器-校準(zhǔn)型號(hào)

P1000

出廠編號(hào)

L26069L

發(fā)證日期2002-7-4

本移液器已按照國際ISO標(biāo)準(zhǔn)，以吉爾森原廠零配件進(jìn)行維修及校準(zhǔn)，達(dá)到吉爾森產(chǎn)品說明書規(guī)定的性能指標(biāo)，并自發(fā)證日起免費(fèi)擔(dān)保六個(gè)月（易損零配件不包括在內(nèi)）。測(cè)定次數(shù)

4

次低點(diǎn)校準(zhǔn)設(shè)定值200ul平均容積198.6ul

絕對(duì)誤差-1.4Ul相對(duì)誤差-0.7%

標(biāo)準(zhǔn)離差0.101ul相對(duì)離差0.202%高點(diǎn)校準(zhǔn)設(shè)定值1000ul平均容積999.37ul

絕對(duì)誤差-0.63Ul相對(duì)誤差-0.063%

標(biāo)準(zhǔn)離差0.783ul相對(duì)離差0.078%更換部件O型密封圈測(cè)試環(huán)境:溫度25

C

濕度38%測(cè)試液體：蒸餾水測(cè)試用吸嘴：吉爾森Diamond標(biāo)準(zhǔn)盒裝吸嘴現(xiàn)在是32頁\一共有89頁\編輯于星期一離心機(jī)離心機(jī)放置：水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，以免離心時(shí)造成機(jī)器震動(dòng)打開電源開關(guān)，按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭，將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上（離心筒須與樣品同時(shí)平衡），關(guān)閉機(jī)蓋。按功能選擇鍵，設(shè)置各項(xiàng)要求：溫度、速度、時(shí)間、加速度及減速度，帶電腦控制的機(jī)器還需按儲(chǔ)存鍵，以便記憶輸入的各項(xiàng)信息。待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開機(jī)蓋，取出離心樣品，用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機(jī)腔內(nèi)壁，待離心機(jī)腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機(jī)蓋?，F(xiàn)在是33頁\一共有89頁\編輯于星期一高速（冷凍）離心機(jī)離心分類

轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm）

微速離心

～15,000

低/高速離心

2,000～20,000

超速離心

～120,000

離心分類

轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm）

微速離心

～15,000

低/高速離心

2,000～20,000

超速離心

～120,000

離心分類

轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm）

微速離心

～15,000

低/高速離心

2,000～20,000

超速離心

～120,000

現(xiàn)在是34頁\一共有89頁\編輯于星期一離心機(jī)-注意事項(xiàng)外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配，并要求有良好的接地線開機(jī)前應(yīng)檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固，機(jī)腔有無異物掉入更換轉(zhuǎn)頭或清潔轉(zhuǎn)頭時(shí)，應(yīng)注意安裝牢固。樣品應(yīng)預(yù)先平衡。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)，離心機(jī)周圍30cm范圍內(nèi)不能有人和危險(xiǎn)物品。揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故?，F(xiàn)在是35頁\一共有89頁\編輯于星期一離心機(jī)-注意事項(xiàng)易燃易爆以及易與其他物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)不能離心。在沒有相應(yīng)的防護(hù)措施時(shí)，不能離心有毒的、放射性的物質(zhì)或病原微生物。離心機(jī)運(yùn)行時(shí)不可人為地打開蓋子。如果轉(zhuǎn)頭和蓋子有可見的腐蝕或磨損的痕跡，則應(yīng)立即停止使用。使用的玻璃或塑料離心管應(yīng)能承受相應(yīng)的離心力并大小合適。非金屬轉(zhuǎn)頭不可用紫外照射。如果被離心的物品密度大于說明書的規(guī)定范圍，應(yīng)計(jì)算相對(duì)離心力?，F(xiàn)在是36頁\一共有89頁\編輯于星期一對(duì)于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過程中產(chǎn)生的氣溶膠風(fēng)險(xiǎn)。－大型離心機(jī)上應(yīng)加裝負(fù)壓罩，以及時(shí)吸出離心機(jī)排出的氣體，并排至實(shí)驗(yàn)室的過濾通風(fēng)系統(tǒng)，在BSL-3及以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室尤其要注意。－所有的離心管必須帶蓋密封，其開啟應(yīng)在安全柜內(nèi)進(jìn)行。－微型離心機(jī)則可放在安全柜內(nèi)離心，但要注意其對(duì)安全柜氣流的影響。－如果不能在安全柜內(nèi)離心也無負(fù)壓罩，則必須將密封的轉(zhuǎn)頭在安全柜內(nèi)打開?，F(xiàn)在是37頁\一共有89頁\編輯于星期一1.所有離心機(jī)應(yīng)處于正常工作狀態(tài)/合格機(jī)械性能，根據(jù)廠家說明書進(jìn)行操作。2.離心機(jī)位于適宜位置和高度，工作人員能看見離心桶，便于進(jìn)行各項(xiàng)操作。3.離心管和標(biāo)本容器根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，使用前應(yīng)檢查有無破損。必須在安全柜內(nèi)打開蓋子。4.使用轉(zhuǎn)頭時(shí)應(yīng)注意轉(zhuǎn)頭蓋與轉(zhuǎn)頭型號(hào)是否匹配。離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行?？针x心桶配平時(shí)應(yīng)該用蒸餾水或70％乙醇、異丙醇，不應(yīng)使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應(yīng)留出一定空隙，以確保離心過程中液體不會(huì)溢出，尤其是使用角轉(zhuǎn)頭時(shí)更要注意。（密封的離心桶/安全杯）5.應(yīng)該每天檢查在特定的轉(zhuǎn)速下，離心杯的內(nèi)表面有無污物。離心轉(zhuǎn)頭和離心桶應(yīng)每天檢查有無腐蝕點(diǎn)以及極細(xì)的裂縫，以確保安全。離心桶、轉(zhuǎn)頭和離心機(jī)腔每次用后都應(yīng)該消毒。每次用后，應(yīng)該把離心桶倒放，以排凈離心配平的液體?，F(xiàn)在是38頁\一共有89頁\編輯于星期一離心機(jī)-維護(hù)和清潔清潔方法：中性洗滌液清潔，然后用清水清潔。必要時(shí)使用含0.5%有效氯的消毒液擦拭污染部位，然后用清水擦洗。擦拭離心機(jī)腔時(shí)動(dòng)作要輕，以免損壞機(jī)腔內(nèi)溫度感應(yīng)器。使用消毒液處理時(shí)，溫度不可超過25℃，時(shí)間不可超過規(guī)定范圍?？梢杂酶邏合镜霓D(zhuǎn)頭，應(yīng)在清洗后，121℃消毒20分鐘，轉(zhuǎn)頭務(wù)必平放，并不受擠壓，以免變形。現(xiàn)在是39頁\一共有89頁\編輯于星期一生物安全柜防止操作過程中含有危害性或未知性生物氣溶膠散逸的空氣凈化安全裝置。保護(hù)人、環(huán)境、樣本現(xiàn)在是40頁\一共有89頁\編輯于星期一不同型號(hào)生物安全柜（BSC）特征比較柜子類型面速度（英尺/分）氣流方式應(yīng)用非揮發(fā)性化學(xué)毒物/放射性物質(zhì)揮發(fā)性化學(xué)毒物/放射性物質(zhì)Ⅰ級(jí)75前面進(jìn)，上面出，頂部通過HEPA過濾器能能1Ⅱ級(jí)A1型7570%通過HEPA在工作區(qū)內(nèi)循環(huán)，30％通過HEPA排出到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)能（微量）不能A2型100同ⅡA,箱體呈負(fù)壓和可管道排氣能能（微量）2B1型10030%通過HEPA在工作區(qū)內(nèi)循環(huán)，70％通過HEPA和嚴(yán)格的管道排出能能（微量）2B2型100無循環(huán)，全部通過HEPA和嚴(yán)格的管道排出能能（少量）Ⅲ級(jí)無排氣口處經(jīng)兩個(gè)HEPA處理能能（少量）安裝上要求有一特殊管道通到室外、有一道活性炭過濾器、防爆的發(fā)動(dòng)機(jī)及其它電路組成。Ⅰ級(jí)柜如果操作揮發(fā)性化學(xué)物，則不能將廢氣排到室內(nèi)?；瘜W(xué)濃度不能超過最低爆炸濃度。現(xiàn)在是41頁\一共有89頁\編輯于星期一生物安全柜II級(jí)生物安全柜是目前應(yīng)用最為廣泛的柜型，是有前窗操作口的安全柜，操作都可以通過前窗口在安全柜內(nèi)進(jìn)行操作，對(duì)操作過程中的人員、產(chǎn)品及環(huán)境進(jìn)行保護(hù)?，F(xiàn)在是42頁\一共有89頁\編輯于星期一二級(jí)A1型生物安全柜氣流模式70％循環(huán)，30％外排，操作口氣流速度≥75ft/min。現(xiàn)在是43頁\一共有89頁\編輯于星期一二級(jí)A2型(原B3型)生物安全柜氣流模式70％循環(huán)，30％外排，操作口氣流速度≥100ft/min

，可管道排氣?，F(xiàn)在是44頁\一共有89頁\編輯于星期一二級(jí)B1型生物安全柜氣流模式30％循環(huán)，70％外排，操作口氣流速度≥100ft/min，可管道排氣?，F(xiàn)在是45頁\一共有89頁\編輯于星期一二級(jí)B2型生物安全柜氣流模式無循環(huán)，100％外排，操作口氣流速度≥100ft/min，外接管道?，F(xiàn)在是46頁\一共有89頁\編輯于星期一安全柜的安裝1、有充分清潔與維護(hù)空間2、最佳安全柜擺設(shè)地點(diǎn)取決于安全柜所受到的外在氣流干擾減到最小3、避免高人流量通道4、遠(yuǎn)離空調(diào)排氣口，排氣扇

根據(jù)ANSI/NSF49:2002和英國標(biāo)準(zhǔn)BS5726:1992推薦安裝指南(安全柜的安裝需要由經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員進(jìn)行)現(xiàn)在是47頁\一共有89頁\編輯于星期一安

裝

地

點(diǎn)地點(diǎn)1：遠(yuǎn)離周圍的氣流擾動(dòng)因素，是推薦的最佳安裝地點(diǎn)。地點(diǎn)2：太靠近門、走道以及空調(diào)出風(fēng)口，影響安全柜的氣流。地點(diǎn)3：空調(diào)出風(fēng)口會(huì)影響安全柜的氣流。地點(diǎn)4：太靠近門，側(cè)面太靠近墻壁。地點(diǎn)5：如果相鄰的回風(fēng)口氣流不影響安全柜的氣流。那5的位置也適合安裝安全柜。現(xiàn)在是48頁\一共有89頁\編輯于星期一

實(shí)驗(yàn)室屋頂高度要求比安全柜頂部至少高出100mm現(xiàn)在是49頁\一共有89頁\編輯于星期一生物安全柜使用原則充分了解生物安全柜的性能，掌握正確的使用方法。應(yīng)遵循以下使用原則：緩慢移動(dòng)原則物品平行擺放原則避免震動(dòng)原則不同樣品柜內(nèi)移動(dòng)原則避免明火使用原則定期進(jìn)行安全柜防護(hù)效果的評(píng)估現(xiàn)在是50頁\一共有89頁\編輯于星期一生物安全柜的使用規(guī)范

每次使用前檢查不打開觀察窗列出工作所需物品的清單，以減少雙臂進(jìn)入破壞氣流打開風(fēng)機(jī)5-10min窗式報(bào)警器、氣流報(bào)警器任何造成安全柜內(nèi)氣流紊亂的不良操作都會(huì)危及操作者的安全

操作準(zhǔn)備現(xiàn)在是51頁\一共有89頁\編輯于星期一

物品擺放與防污染措施盡量少放儀器和物品不要阻塞氣口的空氣流通廢物容器/袋置安全柜內(nèi) 密封 消毒安全柜內(nèi)潔凈物品/污染物品分開放置（消毒巾的墊置）操作盡量工作臺(tái)中央，注意動(dòng)作對(duì)定向氣流的影響工作用紙不允許放在生物安全柜內(nèi)盡量減少操作者背后人員的走動(dòng)、快速開關(guān)實(shí)驗(yàn)室的門 （進(jìn)入時(shí)，敲門提醒正在操作的人員）現(xiàn)在是52頁\一共有89頁\編輯于星期一生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理當(dāng)發(fā)生少量溢灑時(shí)，應(yīng)用吸收紙巾立即處理，并立即用浸滿消毒液的毛巾或紗布對(duì)生物安全柜及其內(nèi)部的所以物品進(jìn)行擦洗。工作面消毒后應(yīng)更換手套，不論是摘下手套還是更換手套都要洗手。若發(fā)生大量溢灑，液體會(huì)通過生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關(guān)閉后，可將消毒液倒在工作臺(tái)面上，使液體通過格柵流到排水盤上。所有接觸溢出物品的材料都要進(jìn)行消毒和/或高壓滅菌處理?，F(xiàn)在是53頁\一共有89頁\編輯于星期一生物安全柜污染的清除（1）☆

在每次使用前清除生物安全柜內(nèi)表面的污染，工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭（殺滅任何微生物），但不包括送風(fēng)濾器的擴(kuò)散板；☆在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，包括儀器在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品應(yīng)清除表面污染后，才能移出安全柜；☆在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)擦拭生物安全柜的工作臺(tái)面、四周以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位以清除表面的污染?！钤趯?duì)目標(biāo)生物體有效時(shí)，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進(jìn)行擦拭?，F(xiàn)在是54頁\一共有89頁\編輯于星期一☆標(biāo)本溢漏或潑灑后，立即清除污染物及污染的表面?！钤谏锇踩窬S護(hù)、更換過濾器、以及性能測(cè)試或重新安置之前，必須消毒?！钭钇胀ǖ臍怏w消毒方法：甲醛熏蒸☆推薦將安全柜一直維持運(yùn)行狀態(tài)。如果要關(guān)閉的話，則應(yīng)在關(guān)機(jī)前運(yùn)行5min以凈化內(nèi)部的氣體。生物安全柜污染的清除（2）現(xiàn)在是55頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀普通PCR儀實(shí)時(shí)熒光PCR儀PCR-ELISA提取-擴(kuò)增檢測(cè)封閉系統(tǒng)現(xiàn)在是56頁\一共有89頁\編輯于星期一實(shí)時(shí)PCR儀的發(fā)展歷史1993年第一篇文章發(fā)表BIOTECHNOLOGY1996羅氏的LightCycler注冊(cè)1997年ABIPrism7700,第一個(gè)高通量的實(shí)時(shí)熒光PCR儀1999年Bio-RadiCycler2000年更多質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的儀器進(jìn)入市場(chǎng)，通量更高?，F(xiàn)在是57頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-檢測(cè)原理Taqman熒光探針現(xiàn)在是58頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-擴(kuò)增原理變溫金屬塊作恒溫裝置加熱方式：電熱發(fā)熱、半導(dǎo)體發(fā)熱制冷方式：半導(dǎo)體制冷和壓縮機(jī)制冷等多種方式。國外產(chǎn)品的特點(diǎn)是產(chǎn)品質(zhì)量和性能較穩(wěn)定。機(jī)型：適用，建議8*12孔的模式?？諝怛?qū)動(dòng)循環(huán)恒溫裝置本系統(tǒng)力求降低部件的成本，用空氣作為熱傳導(dǎo)媒介。裝置包括機(jī)箱（外殼）、熱源、冷空氣源、控制器和輔助電器元件等部分。優(yōu)點(diǎn)：不用金屬的精密加工，成本降低。整個(gè)系統(tǒng)沒有液體流動(dòng)，不用致冷液，因而安全程度高。恒溫精度可達(dá)1℃

。缺點(diǎn)：單純靠外部空氣制冷，受環(huán)境溫度影響?，F(xiàn)在是59頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-使用PCR儀應(yīng)放在臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的第三區(qū)。儀器應(yīng)放置水平臺(tái)上，電源電壓須與儀器要求電壓相一致，并連接可靠的地線。儀器遠(yuǎn)離水源、明火及腐蝕性物質(zhì)。工作室溫要求：15-25℃，通風(fēng)保證散熱。配備不間斷或穩(wěn)壓電源。尤其是半導(dǎo)體變溫設(shè)備。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好能將擴(kuò)增儀內(nèi)的孔位全部放置樣品管，若樣品管少時(shí)可用空管代替，以保證實(shí)驗(yàn)的一致性和重復(fù)性。現(xiàn)在是60頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-使用注意事項(xiàng)基線及閾值

基線范圍：基線是背景曲線的一段，基線范圍一般從零點(diǎn)調(diào)整取1－10或1－15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)。

閾值的設(shè)定：剛好超過正常陰性對(duì)照品擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的最高點(diǎn)，且不出現(xiàn)Ct值為準(zhǔn)。

現(xiàn)在是61頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-使用注意事項(xiàng)影響測(cè)定結(jié)果的因素閾值設(shè)定光路維護(hù)加樣的準(zhǔn)確性和反應(yīng)體系的均一性反應(yīng)管中是否有氣泡反應(yīng)管不符合熒光檢測(cè)要求或疏水性差反應(yīng)管或反應(yīng)槽被熒光物質(zhì)污染現(xiàn)在是62頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-清潔和維護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)及時(shí)擦干孔內(nèi)的水分，蓋上機(jī)蓋。應(yīng)定期校準(zhǔn)

擴(kuò)增溫度光路定期清潔熱蓋和反應(yīng)孔

95%乙醇或異丙醇LightCycler(Roche)現(xiàn)在是63頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-清潔和維護(hù)一般清潔用不掉毛的布蘸上去離子水擦拭儀器的表面（包括熱循環(huán)室和樣本架的周圍）。如果發(fā)生了試劑潑灑，用70%的異丙醇溶液或其它可接受的PCR實(shí)驗(yàn)室清潔劑來清洗。在清潔儀器前要關(guān)閉電源，拔下電源插頭。儀器的可移動(dòng)部分（如K試管盤架和K試管載盤）用不掉毛的布并蘸上異丙醇溶液或其它可接受的PCR實(shí)驗(yàn)室清潔劑來清洗。經(jīng)常檢查分析儀的周圍，以確保良好的通風(fēng)環(huán)境。檢查周圍的書本、紙張或其它物品是否擋住儀器的通風(fēng)。如果樣本或其它有生物危害的物質(zhì)潑灑到儀器或架子上，用中性消毒液擦拭，然后再用95%酒精或異丙醇擦拭。LightCycler(Roche)現(xiàn)在是64頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR儀-清潔和維護(hù)注意事項(xiàng)商品化的家用漂白粉溶液通常含有5.25%的次氯酸鈉，對(duì)它進(jìn)行1：10的稀釋，就得到0.5%次氯酸鈉溶液。！不要使用其它有機(jī)溶液（如汽油，苯或其它），因?yàn)樗鼈儠?huì)損害塑料物質(zhì)。！不能使用濃度超過10%的漂白粉溶液，因?yàn)樗芨g金屬部件。LightCycler(Roche)現(xiàn)在是65頁\一共有89頁\編輯于星期一臨床PCR試劑盒的選用現(xiàn)在是66頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR或RT-PCR試劑盒的組成核酸提取試劑核酸擴(kuò)增或逆轉(zhuǎn)錄-核酸擴(kuò)增試劑產(chǎn)物檢測(cè)試劑（有些使用全自動(dòng)分析儀的PCR方法因其核酸擴(kuò)增和檢測(cè)同時(shí)完成，故無專門的產(chǎn)物檢測(cè)試劑）現(xiàn)在是67頁\一共有89頁\編輯于星期一PCR反應(yīng)混合物

Mg2+Mn2+dCTPdGTPdUTPdATPTaqDNA多聚酶rTthDNA多聚酶AmpErase

生物素標(biāo)記的引物

和或和現(xiàn)在是68頁\一共有89頁\編輯于星期一影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素內(nèi)在因素:原材料、核酸提取方法、方法學(xué)設(shè)計(jì)外在因素：試劑盒的運(yùn)輸和貯存現(xiàn)在是69頁\一共有89頁\編輯于星期一影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素內(nèi)在因素:原材料、核酸提取方法、方法學(xué)設(shè)計(jì)現(xiàn)在是70頁\一共有89頁\編輯于星期一影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素：

擴(kuò)增所需的原材料寡核苷酸引物和探針緩沖液和dNTP聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等現(xiàn)在是71頁\一共有89頁\編輯于星期一寡核苷酸引物和探針純度。純度的判斷可根據(jù)260/280吸光度比值來判斷，如?2.0，則需重新純化。另一種方法是將其在聚丙烯酰胺凝膠上電泳，如出現(xiàn)一條以上的帶或遷移位置錯(cuò)誤，則需重新純化。污染特異性（濃度）現(xiàn)在是72頁\一共有89頁\編輯于星期一dNTP和緩沖液dNTP（包括dATP、dCTP、dGTP和

dTTP或

dUTP）的濃度緩沖液：在儲(chǔ)存和擴(kuò)增循環(huán)中穩(wěn)定、作為聚合酶活性所必須的Mg＋＋（或用于rTth的Mn＋＋）的濃度以及pH等現(xiàn)在是73頁\一共有89頁\編輯于星期一逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶酶的濃度酶的活性現(xiàn)在是74頁\一共有89頁\編輯于星期一核酸擴(kuò)增方法PCRRT－PCR轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增（TMA）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）鏈替代擴(kuò)增（SDA）等現(xiàn)在是75頁\一共有89頁\編輯于星期一影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素：

核酸提取核酸提取的有效性核酸提取的簡便性現(xiàn)在是76頁\一共有89頁\編輯于星期一影響PCR試劑盒質(zhì)量的因素：產(chǎn)物檢測(cè)雜交固相特異探針及其標(biāo)記物現(xiàn)在是77頁\一共有89頁\編輯于星期一現(xiàn)在是78頁\一共有89頁\編輯于星期一試劑盒的運(yùn)輸和貯存PCR試劑盒的有效期一般為6個(gè)月，這是指在適