S鑒定細菌的種屬

利用16SrDNA鑒定細菌的種屬現(xiàn)在是1頁\一共有30頁\編輯于星期一1.什么是16SrDNA？16SrRNA為原核生物核糖體RNA的一個亞基，16SrDNA就是編碼該亞基的基因。原核生物的rRNA含有3種類型：23S、16S、5SrRNA，它們分別含有2900、1540和120個核苷酸。2.用16SrDNA進行細菌鑒定的原因16SrDNA在原核生物中普遍存在。16SrDNA的相對分子量大小適中，約1500bp，便于序列分析。在16SrRNA分子中，既含有高度保守的序列區(qū)域，又有中度保守和高度變化的序列區(qū)域，因而它適用于進化距離不同的各類生物親緣關系的研究。bp=basepair現(xiàn)在是2頁\一共有30頁\編輯于星期一圖

16SrDNA基因組成（灰色為保守區(qū)，綠色為可變區(qū)）

16SrDNA基因全長1542bp，由9個可變區(qū)和10個保守區(qū)組成。其中保守區(qū)反映了生物物種間的親緣關系，而可變區(qū)則表明物種間的差異，且變異程度與細菌的系統(tǒng)發(fā)育密切相關?，F(xiàn)在是3頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是4頁\一共有30頁\編輯于星期一DNA的提取挑取單菌落,然后置于裝有100μLPrepManUltra的離心管中,渦旋震蕩混勻30s左右，然后100℃水浴10min后，以離心機最大轉(zhuǎn)速離心3min，取10μL上清液與490μLddH2O（即稀釋50倍），混勻作為下步PCR的模板DNA。提取的DNA于-20℃保存。檢測：核酸蛋白儀/瓊脂糖凝膠電泳現(xiàn)在是5頁\一共有30頁\編輯于星期一1525R5'AAGGAGGTGWTCCARCC3'現(xiàn)在是6頁\一共有30頁\編輯于星期一PCR反應條件試劑使用量（20μL體系）模板DNA（10ng~100ng）2μLTaq酶(5U/μL)0.2μL10×TaqBuffer(Mg2+)

2μLdNTPs(2.5mM)1μL引物F(10μM)0.5μL引物R(10μM)0.5μLddH2O13.8μL1min30s現(xiàn)在是7頁\一共有30頁\編輯于星期一判斷16SrDNA序列擴增是否成功:經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳在1500bp附近出現(xiàn)條帶，說明16srDNA已經(jīng)擴增成功?，F(xiàn)在是8頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是9頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是10頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是11頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是12頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是13頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是14頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是15頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是16頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是17頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是18頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是19頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是20頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是21頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是22頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是23頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是24頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是25頁\一共有30頁\編輯于星期一現(xiàn)在是26頁\一共有30頁