雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究

雙黃連注射劑工藝

與質(zhì)量標準研究

張清波黑龍江省藥品檢驗所

二九年八月十二日

雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第1頁主要內(nèi)容一、雙黃連注射劑系列品種概況二、雙黃連注射劑系列研究概況三、雙黃連注射劑系列指紋圖譜研究四、雙黃連注射劑系列質(zhì)量研究五、存在主要問題雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第2頁FLOSLONICERAE

RADIXSCUTELLARIAEFRUCTUSFORSYTHIAE

黃芩金銀花連翹一、雙黃連注射劑系列品種概況

功效與主治:

清熱解毒，清宣風熱。用于外感風熱引發(fā)發(fā)燒、咳嗽、咽痛。適合用于病毒及細菌感染上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等。

收載標準：

成方制劑十一冊、中國藥典一部雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第3頁一、雙黃連注射劑系列品種概況1、生產(chǎn)企業(yè)：黑龍江省生產(chǎn)雙黃連注射劑企業(yè)共有11家（股份制企業(yè)5家、民營企業(yè)5家、私營企業(yè)1家），從業(yè)員工1.1萬人。這些企業(yè)分別建廠于1950年至。有20余年生產(chǎn)雙黃連注射劑歷史，企業(yè)固定資產(chǎn)凈值25億元，年生產(chǎn)能力11.83億支。2、劑型及規(guī)格：現(xiàn)有注射液、粉針劑、凍干粉針劑、滴注劑四個劑型；有20ml、300ml、500ml、0.6g、1.2g。3、生產(chǎn)量：現(xiàn)11家從到底共生產(chǎn)雙黃連注射劑2萬余批次、27億支；至生產(chǎn)1.49萬批次、20.53億支。近三年來實現(xiàn)產(chǎn)值13.4億元、利稅2.1億元，單品種產(chǎn)值占全行業(yè)總產(chǎn)值12.96%。4、銷售范圍：當前這些企業(yè)品種銷往全國各地，分布最廣企業(yè)除臺灣、香港、西藏外，各省市、自治區(qū)、直轄市都有銷售和使用。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第4頁二、雙黃連注射劑系列研究概況

第一階段:（～）1、對8家生產(chǎn)企業(yè)近100批產(chǎn)品進行了初步質(zhì)量分析；2、進行企業(yè)工藝調(diào)研與試驗室模擬工藝研究；3、與生產(chǎn)企業(yè)溝通，明確生產(chǎn)工藝應嚴格按照部頒標準執(zhí)行4、藥材樣本采集：共實地采集了不一樣產(chǎn)地70多批藥材；5、考查不一樣采收季節(jié)、不一樣起源，不一樣產(chǎn)地藥材對指紋圖譜影響；6、采取色譜指紋圖譜技術(shù)，對雙黃連注射劑指紋圖譜整個獲取過程進行了方法學驗證并測定了統(tǒng)一工藝路線后樣品7、考查了藥材、中間體與成品指紋圖譜相關(guān)性；8、增加了成品中綠原酸、連翹苷含量測定標準。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第5頁二、雙黃連注射劑系列研究概況第二階段（～）：1、依據(jù)樣品實測情況對雙黃連注射液、注射用雙黃連指紋圖譜評價標準進行了改進；2、增加了異常毒性、降壓物質(zhì)、過敏試驗安全性檢測標準。3、注射用雙黃連指紋圖譜已收載于中國藥典一部增補本。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第6頁藥廠實地調(diào)研，考查藥材樣品采集成品樣品搜集試驗室模擬工藝小樣統(tǒng)一生產(chǎn)工藝（中期會召開）方法學驗證雙黃連注射劑系列指紋圖譜建立中間體指紋譜研究相關(guān)性考查前期準備工作文件檢索研究計劃制訂會議召開三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究市場上近100批成品摸底藥材指紋圖譜研究雙黃連注射劑系列質(zhì)量標準提升指紋圖譜條件確實立技術(shù)匯報形成征求反饋意見生產(chǎn)工藝追蹤工藝參數(shù)變動影響雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第7頁

統(tǒng)一工藝前八個不一樣廠家雙黃連注射液指紋圖譜比較

從這八個廠家樣品色譜圖能夠看出，不論從色譜峰個數(shù)上，還是各峰面積大小和相對百分比，不一樣廠家產(chǎn)品質(zhì)量不盡相同，尤其是保留時間在1020分鐘色譜峰個數(shù)、510分鐘色譜峰面積，廠家之間差異很大。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第8頁金銀花與連翹分別煎煮提取與混合煎煮提取對指紋圖譜影響

金銀花、連翹混提與單提，特征色譜峰之間差異較大，表現(xiàn)在5、6、7號色譜峰在單提液中缺失或減弱。除1、3號色譜峰相對穩(wěn)定外，大多特征峰相對峰面積比值發(fā)生改變，混提比單提有增高趨勢，表明混提增加了一些成份溶出量。試驗室模擬小樣金銀花與連翹分別煎煮提取金銀花與連翹混合煎煮提取雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第9頁金銀花、連翹提取不一樣煎煮時間對指紋圖譜影響

峰號保留時間相對峰面積RSD（%）煎煮2小時/次煎煮1小時/次15.9790.2110.2804.85929.2621.0001.0000.000310.2790.2760.3535.484411.2870.0340.0380.275515.0960.0500.0480.127615.5250.0400.0420.152715.8960.0830.0770.446820.1500.2560.1994.019921.2160.4430.4963.7331022.1710.0600.0580.1481126.0660.5040.5513.317

對金銀花、連翹提取煎煮時間分別進行每次煎煮1小時和每次煎煮2小時考查，結(jié)果特征峰峰數(shù)與峰位沒有改變，相對峰面積比值改變不大。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第10頁

金銀花、連翹提取各步驟對指紋圖譜影響

峰號保留時間醇沉純化稀配RSD(%)15.9830.2800.1500.05511.295

29.2361.0001.0001.0000.000310.2670.3530.1960.11412.184411.3300.0380.0210.0200.989515.1140.0480.0370.0350.689615.5440.0420.0320.0310.624715.9250.0770.0410.0352.286820.1640.1990.1030.1364.846921.1830.4960.3240.3349.6491022.1970.0580.0420.0361.1401126.0610.5510.3320.28214.292

重點考查醇沉、純化、稀配這三步留樣。HPLC分析結(jié)果顯示，特征色譜峰峰數(shù)與峰位無大區(qū)分，即成份未有改變，但來自金銀花藥材2號特征峰（綠原酸）及1、3、9、11號特征峰峰面積伴隨一步步生產(chǎn)而降低，其它特征峰相比受影響較小。醇沉純化稀配雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第11頁金銀花、連翹提取不一樣醇沉溫度對指紋圖譜影響

峰號保留時間相對峰面積RSD（%）20OC醇沉40OC醇沉60OC醇沉15.9860.1360.0820.0813.13229.2001.0001.0001.0000.000310.2670.1640.1670.1630.190411.2800.0250.0260.0260.019515.0830.0490.0660.0471.056615.5170.0420.0440.0420.070715.8920.0610.0630.0600.126820.1300.2560.2650.2530.607921.1640.4500.4680.4461.1381022.1660.0550.0560.0540.0811126.0550.3970.4070.3930.74240CO20CO60CO

對金銀花、連翹提取進行20C、40C、60C不一樣醇沉溫度考查，結(jié)果特征峰峰數(shù)與峰位沒有改變，相對峰面積比值改變較?。≧SD小于3%）雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第12頁金銀花、連翹提取中冷藏放置與冷凍放置對指紋圖譜影響

峰號保留時間相對峰面積RSD（%）冷藏冷凍15.9830.2720.2800.57629.2711.0001.0000.000310.2750.3340.3531.352411.2960.1590.0388.575515.1000.0470.0480.080615.5290.0430.0420.053715.9040.0810.0770.274820.1540.2170.1991.293921.2080.4880.4960.5721022.1710.0720.0580.9831126.0660.5630.5510.848

對金銀花、連翹藥材水煎、濃縮后進行冷藏放置與冷凍放置對比考查，結(jié)果除4號特征峰差異較大外（冷藏峰面積增值較大），其它均相差無幾。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第13頁以上研究結(jié)果表明：1、金銀花、連翹藥材合煎與分煎對一些成份溶出有較大影響；2、生產(chǎn)工藝各步驟一致性也是取得穩(wěn)定雙黃連注射液指紋圖譜關(guān)鍵原因；3、在一定范圍內(nèi)，不一樣煎煮時間、不一樣醇沉溫度對雙黃連注射液指紋圖譜影響不大。三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第14頁雙黃連注射劑藥材指紋圖譜研究連翹藥材【中國藥典】連翹為木犀科（Oleaceae）連翹屬植物連翹Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl.干燥果實。秋季果實初熟尚帶綠色時采收，除去雜質(zhì)，蒸熟，曬干，習稱“青翹”；果實熟透時采收，曬干，除去雜質(zhì)，習稱“老翹”。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第15頁22批連翹藥材質(zhì)量情況起源水分（%）連翹苷含量（%）三精6.90.134晨星6.00.295烏蘇里江7.30.252福和華星6.10.183齊齊哈爾7.00.088哈中藥二廠6.40.115浙江藥檢所提供（山東產(chǎn)）6.10.126河南淅川5.30.152三精河北安國（10月上旬）6.40.200三精山西降縣（10~11月）7.10.068山西（青翹）12.10.612山西6.90.111山西陵川（老翹）6.60.098欒川縣（伏牛山北）（11月）7.10.083欒川縣（伏牛山北）（青翹9~10月）6.60.079輝縣南塞鎮(zhèn)（太行山老翹）7.70.047輝縣南塞鎮(zhèn)（青翹水煮后曬干）5.30.206輝縣南塞鎮(zhèn)（太行山老翹）7.60.312陜西商洛市山陽縣玉竹鄉(xiāng)7.20.091陜西臨汾（青翹）6.50.122商洛市商州縣（）7.00.043雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第16頁編號保留時間山西陜西欒川輝南陵川812.74144.809254.42321.266115.767136.2261013.663160.6315.233395.051110.449214.5821214.5621385.105170.253135.429248.32470.0872021.346888.85232.18599.311824.281273.4932424.43514758.922557.8072055.913498.953993.9252625.76385.36559.82653.66944.99553.7362726.814616.897199.472263.935241.897317.0283637.035379.5276.96655.552230.448261.9013737.924962.039158.784100.574394.731207.0874440.924125.83273.951172.306104.606236.1944842.587264.63489.187159.407268.868474.2765244.23123.37159.18163.377218.658196.2245646.695414.1669.53982.698134.358177.1015949.95262.156150.72761.458145.694568.693不一樣產(chǎn)地青翹指紋圖譜雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第17頁編號保留時間山西欒川輝南02輝南03陵川112.746244.096105.838148.517402.338292.936213.673333.769131.911174.775478.842359.515314.56969.824110.50642.545173.50191.267421.359173.135449.678398.463953.514421.195524.4821218.2141574.895741.3191671.2941519.973626.848161.595136.62656.855181.487168.898727.351102.1432.99759.298164.022150.951837.037216.25876.14348.68193.45103.987937.927228.20291.31248.804317.689201.4771040.903118.25768.01588.394197.192131.6021142.573274.572237.432164.058221.832458.2151249.951223.584106.84145.13684.168114.063不一樣產(chǎn)地老翹指紋圖譜雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第18頁

有3對相同產(chǎn)地青老翹，分別是山西、欒川、陵川，把它們圖譜進行比較發(fā)覺：1、山西青老翹在色譜峰保留時間和峰數(shù)上較為一致，只是峰面積有所增減，如老翹中10.919、12.737、13.662峰面積稍有增加，而14.562、18.850、21.323、46.666和37.902（連翹苷）峰面積顯著降低；2、欒川青老翹在色譜峰保留時間和峰數(shù)上也較為一致，老翹色譜峰除了12.737、13.662峰面積降低外，其它色譜峰無顯著改變；3、陵川老翹則在10.919、49.944峰面積顯著降低，其它峰面積無顯著改變。

總之，相同產(chǎn)地老翹大部分色譜峰峰面積均比青翹降低。相同產(chǎn)地青、老翹指紋圖譜雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第19頁雙黃連注射劑藥材指紋圖譜研究黃芩藥材【中國藥典】黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi干燥根，春秋二季采挖，除去須根和泥沙，曬后撞去粗皮，曬干。

藥材樣品搜集雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第20頁黃芩藥材匹配結(jié)果雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第21頁雙黃連注射劑藥材指紋圖譜研究金銀花藥材【中國藥典】本品為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.、紅腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.、山銀花LoniceraconfusaDC或毛花柱忍冬LoniceradasystylaRehd.干燥花蕾或帶初開花。夏初花開放前采收，干燥。金銀花質(zhì)量情況雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第22頁金銀花同山銀花比較雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第23頁7批金銀花藥材圖譜比較

忍冬與紅腺忍冬區(qū)分雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第24頁1、不一樣品種藥材得到指紋圖譜不一樣；2、不一樣產(chǎn)地藥材得到指紋圖譜不一樣；3、不一樣采收季節(jié)藥材得到指紋圖譜不一樣4、要取得到穩(wěn)定、均一成品指紋圖譜，固定藥材品種、產(chǎn)地、采收季節(jié)是不可忽略原因之一。雙黃連注射劑藥材指紋圖譜研究雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第25頁金銀花中間體在金銀花藥材中追蹤三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究金銀花中間體金銀花藥材雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第26頁連翹提取物三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究連翹中間體在連翹藥材中追蹤連翹藥材雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第27頁5批黃芩提取物匹配結(jié)果

三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究黃芩中間體在黃芩藥材中追蹤雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第28頁三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究1、中間體各特征峰均可在藥材指紋圖譜中得到追蹤；2、藥材經(jīng)過適當方法提取純化后HPLC譜圖中色譜峰比中間體多；3、中間體色譜圖與相對應藥材色譜圖在對應峰量上有所改變。4、建立指紋圖譜能夠很好地控制藥材、中間體乃至成品質(zhì)量。雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第29頁樣品測定10個廠家21批樣品6個廠家18批樣品雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第30頁從整個色譜峰面積看：1、各廠家黃芩苷投料比較穩(wěn)定（10號峰峰面積RSD值最?。?；2、屬于連翹5、6號色譜峰和屬于金銀花及連翹7號峰，屬于黃芩及連翹8號峰峰面積即使不大，也相對比較穩(wěn)定；3、屬于金銀花1-4號和9號峰改變較大；結(jié)果表明，確保不一樣廠家生產(chǎn)出相同質(zhì)量產(chǎn)品關(guān)鍵是1-4號和9號這5個色譜峰峰面積相對穩(wěn)定，即金銀花質(zhì)量和生產(chǎn)工藝同一性。三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第31頁三、雙黃連注射劑指紋圖譜研究21批雙黃連注射液指紋圖譜相同度輸出黃芩苷信號未輸出黃芩苷信號雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第32頁11批雙黃連注射液指紋圖譜相同度（未輸出黃芩苷信號）

雙黃連注射液對照指紋圖譜（未輸出黃芩苷信號）雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第33頁雙黃連注射液藥材與成品、中間體相關(guān)性

雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第34頁色譜峰描述

共有10個特征峰，分為兩部分，保留時間在15分鐘以前是1—4號峰，不應有多峰現(xiàn)象，其中2號峰為綠原酸，其分離度高，峰面積積分值適中，作為參考峰（S）；1—3號峰來自金銀花藥材；4號峰為連翹藥材中含有成份，同時也是工藝過程中轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。保留時間在15分鐘以后是5—10號峰，其中5、6號峰為連翹藥材特征峰，7號峰為連翹和金銀花藥材所共有，8號峰為連翹和黃芩藥材所共有，9號峰為金銀花藥材特征峰，10號峰為黃芩苷，10號峰之后有一組黃芩藥材特征峰。

雙黃連注射液對照指紋圖譜金銀花連翹黃芩雙黃連注射劑的工藝與質(zhì)量標準研究第35頁注射用雙黃連對照圖譜色譜峰