PCR實驗室報批細節(jié)、注意事項、常見問題問答

精品文檔報批細節(jié)1、技術檔案：技術人員簡歷表、培訓檔案、要求有實質性文件如每人的學歷證書、上崗證、科研成果（課題技術文章、獲獎證書等的復印件2、儀器檔案：實驗室所有儀器的購買、使用、校正、放置地點、出廠編號、說明書復印件等實驗室所有儀器維護校正記錄如：加樣器、溫度計、溫濕度計需出具計量局校正報告文件（可每種只校正一套作為標準擴增儀需有儀器廠家專業(yè)技術人員維護校正報告，和校正后的參數(shù)。加樣器的出廠編號、使用時間、校正記錄。5700維護后驗證記錄—用同一公司或校準試劑或用自制質控血清并記錄數(shù)值3、其他細節(jié):垃圾處理：按生物污染性制品，交醫(yī)院統(tǒng)一處理。儀器簡單操作流程標記筆、槍頭盒等一些小物品都要標明分區(qū)。儀器的申請、采購、使用、驗證程序樣本采集（針對臨床醫(yī)護人員輸、收集程序樣品的唯一編號原則—應區(qū)分開不同天、不同種類的標本標本的保存程序—包括處理前、剛處理后、報告發(fā)放后的原始標本（原則上至少保留一周）應有專人負責。檢測結果的保存、備份記錄、質控記錄保存，除電腦記錄外應有相應的手抄記錄（類似于基因日檢測統(tǒng)計表類型的抱怨記錄—應有時間、事件（項目、接待人、處理方法、處理結果、處理人簽字確認.

精品文檔注意事項1、回答任何問題都應與自己寫的SOP文件相一致"寫你所做的,做你所寫的".2、SOP文件不能寫的太虛,法做到的東西不要寫,比如公司版的SOP件里的加樣器的校準一般實驗室就做不到.模棱兩可也不要寫比如"消毒時間一到兩小時"不能這樣寫,多少就是多少.3、處理標本要在生物安全柜內,而加樣則在柜外4區(qū)門口要貼有各區(qū)的工作制度,限入標志.還要準備兩個登記本,一個來記錄紫外消毒,一個來記錄工作人員出入.內還要有一個工作記錄本用來記錄各區(qū)每天的工作內容,便于監(jiān)測每天的工作全過程.5把槍的用途要清楚,不能弄亂.比如稀釋陽模的槍和處理標本的槍不可混用.6通離心機處理分泌物標本時應在離心后靜置分鐘才能開蓋.(許斌這樣認為)7、所有儀器、設備都要有檔案卡.8、所有的清潔消毒要在實驗結束后馬上進,尤其是儀器、設備.像擴增儀，每天都要清潔，做完的反應管決對不能留在樣品槽內。9、各區(qū)的拖把、抹布不得混用,標記清楚.10、生物防護意識要強手套要隨時更換.生物防護安全的保證要從三個方面:制度、硬件、意識。11管如何處理:立即停止實驗水浴里的水要倒掉,沖洗.所有可能污染的地方要用消毒液擦洗,紫外照射,通風排風.12、各區(qū)應有日常工作核查表,做為每天工作記錄的補充13、各區(qū)要有泡有消毒液的生物污物桶,用來處理生物垃圾.14收組帶來的標本要按平時對待臨床標本一樣處理要有接收記錄,結果登記等.15、拒絕電話或代領等非正常方式發(fā)放報告單16、存放標本的冰箱要上鎖,鑰匙及電腦資料的密碼要由本科室人員專人保管.17、報告單上要注明試劑的檢測下限,不能寫成參考范圍除了有操作者,還要有核校者,且兩者姓名除了電子打印還要用手.定量結果不能有陰陽性提示.

精品文檔只能報數(shù)值.18、SOP文件中PE5700的溫濕度要求應該為溫度－30℃、濕度為80％。19、SOP中醫(yī)院申報實驗注意事專家組觀驗室回的題你們HCV,注呢？實驗室次議的提HBV升+微升提取.

精品文檔直接上1離心機！臨床基因擴檢驗實驗室術驗收現(xiàn)場卷（口試和/筆試）一.現(xiàn)有一個患者向你提出在你們醫(yī)院檢測DNA為陽性，但在另一家醫(yī)院檢測為陰性，你們醫(yī)院是怎么做的檢測？時，你怎么辦？（該題主要是考實驗室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序）二現(xiàn)有一個臨床大夫拿著幾張HBVDNA量PCR檢驗報告單找到實驗室，說你們的PCR結果到底準不準，我這個病人剛開始檢測，HBVDNA是5×10

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拷貝數(shù)/ml，用了拉米呋啶治療后二周，再檢測結果為3×10

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拷貝數(shù)/ml，降了不少，但再過二周檢測，又變成了

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拷貝數(shù)/ml，升高不少，這到底是怎么回事？果這個大夫剛好問的是你，你怎么辦？并如何解釋其提出的問題？(該題除了考實驗室人員是否知道并遵守所制定的抱怨處理程序外，還要求其對特定PCR檢驗的批間變異有充分的認識回答思路：這兩題分別對應患者和臨床醫(yī)生提出的抱怨點為你是否按照所制定的程序來處理無論患者是醫(yī)生出抱怨，我都應該按照”程序記錄抱怨人姓、抱怨內容，然后問題解決后錄處理果等，最后錄反饋見等。注意：般問題中出現(xiàn)“此時，你怎么辦？其考核的重點均為“形式”而非“內容以題目中無論病人抱怨的是服務態(tài)度不好還是結果報告不準，.

精品文檔醫(yī)生抱怨的是檢測結果和臨床診斷不符還是報告發(fā)放不及時答的方向都應該是我們接待他們后，先在登記表上記錄抱怨的什么什么相關信息，做相應處理，解決后記錄處理結果，最后填反饋表，歸檔總結，跟著以后改進等等等等對各種具體問題的處理就按照實際情況來回答就行。如果題目中出現(xiàn)要你具“解釋某某提出的問題時這時是具體考察某一“內容細節(jié)”了。第二題中看你對PCR檢驗的批間變異有否充分的認識：一般PCR檢測試劑盒存在著一定的批間甚至批內差異而且檢測前處理也存在著一定的誤差分析軟件相關參數(shù)的選擇也會使定量結果發(fā)生變動這是方法學造成的不可避免的事實。同一操作人、同一儀器、同一批號試劑、同一份標本同時做多份平行管得到的結果都會不盡相同所以我們都會允許結果存在一定范圍的偏差，一般為一個數(shù)量級的拷貝數(shù)5×10

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、3×10

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和6×10

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均在允許的誤差范圍內排除了各種影響因素后出現(xiàn)這種情況很正常這說明了該病人用藥效果不佳。若定量結果有1～2個數(shù)量級甚至更大的變化才能反映用藥療效。三．現(xiàn)有一人打電話到科室，說我孩子在你們醫(yī)院做了一項丙肝的PCR檢測，名字叫，請你告訴我檢測結果好嗎？果是你剛好接了這個電話，你會怎樣去做？（該題考的是實驗室人員在患者要求以電子郵件、電話、傳真等方式傳遞報告時，是否能按相應的程序去做）回答思路：也是考形式對于這種非正常的報告發(fā)放形式，我們按照程序，是這樣這樣處理的為各個醫(yī)院實際情況不同，所以無論你怎樣處理，只要程序中體現(xiàn)了對患者結果的保密原則，具體細節(jié)不會太要求。在程序中按以下幾個方式寫都是可以的：1、我們均不以任何非正常形式發(fā)放報告干脆！就是有點不近人情，不過對我們來說省事）2、實在有特殊情況，可以電話查結果，其它發(fā)放形式不行。但必須確認身份，包括核對其所查詢的患者姓名別、年齡檢測項目、送檢醫(yī)生、送檢日期、病區(qū)床號等情況，并提供患者號。3、可以通過電話、圖文傳真、電子郵件等形式傳送結果，和上面一樣，需要核實身份最寬松了，不過麻煩了很多）要注意的是：這些情況均應明確告知查詢者，這幾種非正常形式發(fā)放的報告均僅為臨床提供參考，實驗的最終結果以正式檢測報告單為準。特殊情況報告發(fā)放后需詳細登記，簽署報告人姓名，實驗室負責人簽字?！皥蟾娴恼_發(fā)放”為考核重點，一般可能還會引申出“你們是如何發(fā)放檢測結果報告？之類的問題按照程序中寫的實際情況回答就行的了只要遵循保密原則就OK。最簡單的無非把事情都推給醫(yī)院：說門診患者報告單送至服務臺門診報告發(fā)放處，由那里的醫(yī)生確認身份后發(fā)放具體她們是怎么確認、確不確認這已經(jīng)不關我們的事了若寫病人到科室領報告也行，只是“我們怎么確認病人身份”要在程序中體現(xiàn)詢問相關信息根據(jù)收費單或病歷唯一條形（若醫(yī)院采用計算機網(wǎng)絡系.

精品文檔統(tǒng)）確認等等。四．現(xiàn)有你科室同事，拿了一份血清標本給你，說這是我一個熟人的標本，他要做RNA檢測，剛好他還做生化和免疫檢測，我從生化標本分了一些出來，給你做HCVRNA覺得這樣行嗎？為什么？（該題主要是考實驗室人員對有關標本的收集程序是否清楚并遵守）回答思路：問到了“為什么？”表示具體考到細節(jié)了。按照我們的收集程序，做PCR尤其是RNA項目需要獨立取血不能從其它檢測的標本中分出一些來做而且對RNA標本的采集、保存、運輸都有嚴格的要求。一般驗收組會對這類問題加以引申你每天標本在哪兒采集？采血的人員有否經(jīng)過專門培訓？采集的標本如何保存？還可以順便問你結果發(fā)放后的標本如何保存存在哪兒？保存多久？甚至要你把這多久多久前的標本拿出來給他們看。五．某一天，你在做HBVDNA熒光定量PCR測（方法的定量測定范圍為103～107貝數(shù)/ml）中，發(fā)現(xiàn)有1份標本的測定Ct值超出方法的測定上限，此時你怎么辦？對于沒有特異擴增曲線的標本你又怎么報告結果？回答思路：此為具體問題題目已經(jīng)假設了方法的定量測定范圍為

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～10

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拷貝數(shù)/ml，我們就按照這個假設來考慮先看是否為特異擴增的曲（即看曲線是否為標準的S形曲線為標準S形曲線表示的確為陽性標本Ct值超出檢測上限，表示未知標本HBVDNA濃度過大，不在檢測線性范圍內，應該進行濃度梯度稀釋（1/10、1/100…做實驗，看哪個梯度處于線性范圍內，得到原始濃度乘以相應稀釋倍數(shù)即得。若不是特異擴增的曲（也就是常見的那種前面翹與閾值線有交點的陰性曲線，計算機不會具體分析，見有交點就Ct值，而Ct值還很小，小于測定上限的Cycle數(shù)陰性報。六在PCR檢測的核酸提取離心中如發(fā)現(xiàn)有一管離心管出現(xiàn)破裂此時你怎么辦？（該題是考實驗室人員對于其制定的實驗室及儀器設備消毒清潔程序是否知道并遵守）回答思路：按照離心機的消毒清潔程序必須先停止實驗將破裂管密封放入生物垃圾桶，再用75%酒精擦拭離心室消毒，用移動紫外燈照射30～60分鐘后才能開始實驗。可以引申出：離心管破裂，可能質量有問題，為防止以后同類事情的發(fā)生，按照耗材質檢程序進行離心管質檢實驗若不合格停止使用重新購買并進行質檢，合格的耗材才能使用。.

精品文檔七．有一個PCR實驗室的熒定量PCR儀如ABI7000因某種原因搬動到了另一個實驗臺面，實驗室只是將儀器外表面擦了擦，即用于常規(guī)擴增檢測工作，你覺得該實驗室做得對嗎？為什么？（該題是考實驗室人員對于其制定的儀校準程序是否知道并遵守）回答思路：考核實驗室人員對于其制定的儀校準程序是否知道并遵守器移動應該按照程序進行校準后才能重新用于常規(guī)擴增檢測工作，以保證實驗結果。7000型核酸擴增熒光檢測儀為復雜精密儀器，其校準工作需由專業(yè)工程師進行。實驗室聯(lián)系儀器廠家派技術