實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定專家講座

試驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血沉測(cè)定及白細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第1頁一、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)目標(biāo)

掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret)試管法計(jì)數(shù)原理及操作方法。原理

網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘余少許核蛋白體及核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)等染液活體染色后，呈藍(lán)色網(wǎng)狀或點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，可與成熟紅細(xì)胞相區(qū)分。實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第2頁器材

顯微鏡、試管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦鏡紙、擦鏡液試劑

新亞甲藍(lán)標(biāo)本新鮮全血實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第3頁操作步驟1.加染液將Ret染液2滴加至小試管中，做好標(biāo)識(shí)。2.加血在已加入染液小試管內(nèi)注入新鮮全血2滴，馬上混勻。3.染色室溫下染色10-15min。4.涂片制備取染色血1小滴推制成薄血涂片，自然干燥5.觀察低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻、著色好、背景清楚部位進(jìn)行計(jì)數(shù)。6.計(jì)數(shù)

常規(guī)法：在油鏡下計(jì)數(shù)最少1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞。7.計(jì)算

Ret百分?jǐn)?shù)=（1000個(gè)RBC中Ret數(shù)/1000）×100%8.結(jié)果匯報(bào)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：X.X%實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第4頁血涂片制備推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片厚薄取決于速度和角度。一張滿意血涂片應(yīng)厚薄均勻

頭體尾涂片干燥后用鉛筆在血涂片頭部寫上姓名和編號(hào)李四B123實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第5頁參考區(qū)間成人、兒童：0.5%-1.5%新生兒：2.0%-6.0%實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第6頁注意事項(xiàng)1.試劑準(zhǔn)備推薦使用新亞甲藍(lán)染液，試劑應(yīng)定時(shí)配制，用前過濾。2.染色染液與血液比以1:1為宜,染色時(shí)間不能過短。試劑用后及時(shí)蓋好蓋子，以免揮發(fā)。3.標(biāo)本應(yīng)及時(shí)染色，及時(shí)測(cè)定。4.計(jì)數(shù)選擇紅細(xì)胞分布均勻，網(wǎng)織紅細(xì)胞著色好、背景清楚部位計(jì)數(shù)。應(yīng)兼顧血片邊緣和尾部。實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第7頁目標(biāo)掌握魏氏法測(cè)定血沉原理及方法。原理將一定量枸櫞酸鈉抗凝全血置于魏氏血沉管中，直立于血沉架上，因?yàn)榧t細(xì)胞比重大于血漿，克服血漿阻力而下沉，1h后讀取上層血漿高度毫米數(shù)，即為紅細(xì)胞沉降率。器材魏氏管、血沉架、洗耳球。（血沉管）試劑

109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。標(biāo)本外周血。二、血液沉降率測(cè)定（魏氏法）實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第8頁1.采血采靜脈血1.6ml加入含0.4ml109mmol/L枸櫞酸鈉溶液抗凝劑采血管中（即采血量到采血管2ml刻度線處），混勻。2.吸血混勻血吸入血沉管內(nèi)至刻度“0”處，拭去管外殘余血。3.立血沉管將血沉管直立于血沉架上。4.讀數(shù)

1h末準(zhǔn)確讀取紅細(xì)胞下沉后露出血漿高度。5.匯報(bào)方式XXmm/h操作步驟實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第9頁參考值

＜50歲：男性<15mm/h女性<20mm/h

＞50歲：男性<20mm/h女性<30mm/h

＞85歲：男性<30mm/h女性<42mm/h

兒童:<10mm/h二、血液沉降率測(cè)定（魏氏法）實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第10頁注意事項(xiàng)

1.嚴(yán)格控制采血量，使抗凝劑與血液百分比為1：4。2.血沉管應(yīng)垂直放置，不得傾斜。3.測(cè)量時(shí)，血沉架應(yīng)防止直接光照、移動(dòng)和振動(dòng)。4.本試驗(yàn)最適宜溫度為18～25℃，并要求在采血后2h內(nèi)完成。5.紅細(xì)胞沉降率在1h沉降過程中，并不是均衡等速度沉降，絕不能夠只觀察30min沉降率，將結(jié)果乘以2作為1h血沉結(jié)果。實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第11頁二、血液沉降率測(cè)定（自動(dòng)血沉儀法）實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第12頁白細(xì)胞計(jì)數(shù)一、目標(biāo)

掌握顯微鏡白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法。二、原理

用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，同時(shí)破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋血液沖入計(jì)數(shù)池后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中白細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第13頁三、器材

顯微鏡、改良計(jì)數(shù)板、血蓋片、試管、微量吸管、加樣槍、乳膠吸頭、紗布四、試劑

白細(xì)胞稀釋液五、標(biāo)本EDTA鹽抗凝血實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第14頁六、操作1.加稀釋液用加樣槍吸收白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管中。2.加血用清潔干燥微量吸管吸收抗凝血20μl，擦去管外余血，輕輕加至白細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2～3次，混勻。3.充池混勻后用微量吸管將細(xì)胞懸液沖入計(jì)數(shù)池，室溫下平放3～5分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計(jì)數(shù)。4.計(jì)數(shù)用低倍鏡依次計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)。5.計(jì)算白細(xì)胞/L=N/4×10×20×106=N/20×109/L6.匯報(bào)方式X.X×109/L。實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血沉測(cè)定第15頁七、注意事項(xiàng)1.充池前應(yīng)將白細(xì)胞懸液充分混勻。2.在充池時(shí)要一次完成，不能產(chǎn)生滿溢、氣泡或充池不足及充液后玻片移動(dòng)現(xiàn)象。3.白細(xì)胞在計(jì)數(shù)池中若分布不均，各大方格間細(xì)胞計(jì)數(shù)不得相差8個(gè)以上，應(yīng)重新計(jì)數(shù)。4.白細(xì)胞數(shù)量過多時(shí)，可采取加大稀釋倍數(shù)方法。5.