動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體

問(wèn)題探討

“番茄—馬鈴薯”（理想圖）通過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)，科學(xué)家們采用體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得了“番茄—馬鈴薯”植株。目前一頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶嗎？動(dòng)物細(xì)胞也能融合嗎？目前二頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體目前三頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)正在融合的兩個(gè)細(xì)胞受精作用目前四頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)一、動(dòng)物細(xì)胞融合3.過(guò)程：1.概念：兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程融合含不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞有絲分裂雜交細(xì)胞2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性目前五頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)思考題①.植物體細(xì)胞雜交時(shí)首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？酶解法，如纖維素酶,果膠酶②.動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁③.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法④.動(dòng)物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)⑤.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？不能目前六頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)誘導(dǎo)方式物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒仙臺(tái)病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）誘導(dǎo)方法目前七頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒目前八頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)過(guò)程目前九頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)細(xì)胞融合與誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會(huì)感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。目前十頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程原理細(xì)胞融合的過(guò)程誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得雜種植株制備單克隆抗體細(xì)胞融合，植物組織培養(yǎng)細(xì)胞融合目前十一頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)提問(wèn)？#抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）。#一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？

每一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。３．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。目前十二頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏

所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？目前十三頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)二、單克隆抗體是B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白1.抗體2.概念：由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)克隆形成的基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高產(chǎn)量高、純度高3.特點(diǎn)：目前十四頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何篩選？融合方式？目前十五頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)HAT培養(yǎng)基（屬于選擇性培養(yǎng)基，含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)）中進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，由于氨基蝶呤可阻礙DNA正常合成途徑，所以培養(yǎng)基中含有它時(shí)，細(xì)胞只能通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA。未融合的骨髓瘤細(xì)胞合成DNA的主要途徑被培養(yǎng)基中的氨基蝶呤阻斷，又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT），不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤完成DNA的合成過(guò)程而死亡。未融合的脾細(xì)胞因不能在體外長(zhǎng)期存活而死亡；只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，因此能在HAT培養(yǎng)基中存目前十六頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)單克隆抗體大量制備過(guò)程（雜交瘤技術(shù)）過(guò)程：目前十七頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)

4.單克隆抗體制備過(guò)程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體目前十八頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)①利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能②利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性③利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞④利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞思考1、本過(guò)程利用了哪些原理？目前十九頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體目前二十頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)3、整個(gè)制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò)兩次篩選?（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），“第二次”需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。

由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò)克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。）

目前二十一頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)6.單克隆抗體的應(yīng)用①、作為診斷試劑——單克隆抗體最廣泛的用途②、用于治療疾病和運(yùn)載藥物目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢(shì)作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤目前二十二頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)小結(jié)兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)目前二十三頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A鞏固練習(xí)目前二十四頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)２、在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的

B．雜種細(xì)胞的形成過(guò)程基本相同C．操作過(guò)程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ目前二十五頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)3、單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合B.由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成C.由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D.由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D目前二十六頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)4、單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C目前二十七頁(yè)\總數(shù)二十八頁(yè)\編于四點(diǎn)

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的