大鼠取材方案

實(shí)驗(yàn)大鼠取材方案［取材內(nèi)容］取大鼠靜脈血分離血漿、血清-80C保存。取大鼠門靜脈血分離血清-80°C保存。取大鼠甲狀腺組織制備甲狀腺電鏡觀察標(biāo)本其余組織液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠胸腺組織制備胸腺組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠肺組織制備肺組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠肝臟組織制備肝臟組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆谩Ｈ〈笫笠认俳M織制備胰腺組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠腸系膜淋巴結(jié)組織制備腸系膜淋巴結(jié)免疫組化觀察標(biāo)本其余組織液氮冰凍保存。取大鼠胃部組織制備胃粘膜組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠空腸組織制備腸道粘膜組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠回腸組織制備腸道粘膜組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本其余組織分裝液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠腎組織制備左腎組織電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本右腎組織液氮冰凍保存?zhèn)溆?。取大鼠腎上腺組織左側(cè)制備腎上腺組織免疫組化觀察標(biāo)本右側(cè)腎上腺液氮冰凍保存?zhèn)溆肙取大鼠睪丸組織左側(cè)制備電鏡觀察標(biāo)本、免疫組化觀察標(biāo)本右側(cè)睪丸液氮冰凍保存?zhèn)溆小＃墼噭┘八幤罚菸彀捅韧租c或10%水合氯醛、75%酒精、生理鹽水、多聚甲醛或福爾馬林液、3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBS0.01mol/LPpH7.4)或4戊二醛、肝素鈉、器械液器械清洗消毒液［器材］備皮刀、解剖臺(tái)、彎盤、組織剪、眼科剪、手術(shù)刀柄、刀片、小號(hào)彎式血管鉗、蚊式血管鉗、眼科鐐、無(wú)損傷血管夾、聚乙烯管、三通管、絲?線、培養(yǎng)皿、天平、一次性離2ml、1.5ml、凍存管、肝素鋰真空采血管、微量移液器、高速離心機(jī)、注射器10ml、5ml、2ml、無(wú)菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐［取材動(dòng)物］Wistar大鼠［取材步驟］取材大鼠前夜禁食自由飲水。腹腔注射戊巴比妥鈉(45mg/kg)或10%水合■氯醛(300mg/kg)將動(dòng)物麻醉。用5ml的注射器配合5.57號(hào)針頭。腹腔注射時(shí)右手持注射器左手的小指和無(wú)名指抓住大鼠的尾巳另外三個(gè)手指抓住大鼠的頸部使大鼠的頭部向卜O這樣腹腔中的器官就會(huì)自然倒向胸部防止注射器刺入時(shí)損傷大腸、小腸等器官。進(jìn)針的動(dòng)作輕柔防止刺傷腹部器官。尤其是對(duì)于體重較小的大鼠腹腔注射時(shí)針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針穿過(guò)腹中線后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔注射完藥物后緩緩拔出針頭并輕微旋轉(zhuǎn)針頭防止漏液。待動(dòng)物麻醉成功后仰臥位固定于解剖臺(tái)。修剪去頸部及腹部毛發(fā)75%酒精消毒。沿腹側(cè)正中線自陰莖上緣由下而上剪開腹部皮膚直至劍突向兩側(cè)鈍性剝開皮膚與皮下組織暴露腹壁淺肌層。沿白線飩性分離腹壁肌肉剪開腹膜暴露腹腔將肝臟向上翻起顯露門并游離靜脈將剪成斜II的聚乙烯管尖端背向肝門方向插入門靜脈抽取門靜脈血2ml無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉門靜脈止血。將抽取門靜脈血加入一次性離心管低溫靜置過(guò)夜4°C離心3000-3500/min10分鐘吸出上清液分裝-80攝氏度保存?zhèn)溆?。把胃與脾之間的薄膜除去可見(jiàn)到在其下?方有如樹枝狀的肉色組織分為左、右兩葉飩銳結(jié)合整體取下胰腺組織及脾臟組織結(jié)扎止血。胰腺放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①切取胰腺體部約lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBS0.01mol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②胰腺體部相鄰部位組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余組織全部液氮冰凍保存?zhèn)溆?。生理鹽水沖洗操作器械。剔除脾周組織放置脾臟于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①?gòu)钠⑴K一端切取5X5mm脾組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定②繼續(xù)切取脾約lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定③其余組織液氮冰凍保存?zhèn)溆?。從劍突繼續(xù)向上剪開皮膚自頜下向兩側(cè)飩性剝開皮膚與皮下組織暴露胸廓及頸淺肌層。沿正中剪開胸廓、胸膜避免損傷胸腺的胸腔臟器。暴露心臟找到上下腔靜脈后確認(rèn)右心房5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心靜脈血。加4ml靜脈血入肝素鋰真空采血管搖勻室溫靜置10分鐘4°C離心3000-3500/min5分鐘吸出上清液分裝-80攝氏度保存?zhèn)溆谩?ml加入普通真空采血管低溫靜置過(guò)夜4°C離心3000-3500/min5分鐘吸出上清液分裝-80攝氏度保存?zhèn)溆?。展開腸系膜于腸系膜根部尋找淡藍(lán)色結(jié)節(jié)樣淋巴結(jié)組織剔取腸系膜淋巴結(jié)數(shù)枚放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①取部分淋巳結(jié)組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定②其余組織放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆?。心?ml、9.上端于賁門上端結(jié)扎食管下端于直腸遠(yuǎn)端結(jié)扎直腸末端鈍銳結(jié)合完整取下胃腸道。離斷胃放置于無(wú)菌培養(yǎng)皿殘端結(jié)扎。①沿胃大彎剖開生理鹽水洗滌切取約1mmX1mmX1mm胃竇和胃體黏膜組織各3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②剪取寬約0.5-1.0cm包含胃竇、胃體組織1條浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余胃組織放置于無(wú)菌凍存管液巍冰凍保存?zhèn)溆谩＂倬鄑reitz韌帶10cm處切取空腸10cm距回盲部10cm處切取回腸10cm生理鹽水洗滌切取約lmmXlmmXlmm空腸和回腸黏膜組織各3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②乾取寬約0.5-1.0cm包含全層的空腸和回腸組織各1條做標(biāo)記浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余空腸和回腸組織全部放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆?。結(jié)扎乾斷肝門管道系統(tǒng)鈍銳結(jié)合完整取出大鼠肝臟放置于無(wú)菌培養(yǎng)皿生理鹽水沖洗稱重并記錄。①切取肝左葉約lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②左葉肝組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③右葉肝組織稱重記錄分裝后全部放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆?。于腹膜外腰部脊柱兩?cè)尋找到腎臟表面光滑、背腹略扁呈蠶豆形。在腎臟的前方內(nèi)側(cè)和腰下肌的腹面相接處尋找到腎上腺。右側(cè)腎上腺呈豆?fàn)铋L(zhǎng)軸指向后內(nèi)側(cè)左側(cè)呈卵圓形長(zhǎng)軸指向腹外側(cè)。飩銳結(jié)合摘取兩側(cè)腎上腺。①左側(cè)腎上腺浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定②右葉腎上腺放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩＜糸_后腹膜結(jié)扎剪斷雙側(cè)腎門鈍銳結(jié)合取卜?雙側(cè)腎臟剔除腎周筋膜組織放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①于中間腎門部橫行切開左側(cè)腎臟切取上端腎臟lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②下端脾臟浸入名聚甲醛或福爾馬林液中固定③右側(cè)腎臟放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆?。大鼠的陰囊是由肛門腹側(cè)會(huì)陰部皮膚下垂所形成的囊袋。性成熟的大鼠睪丸和附睪下降入陰囊使表面凸出并突向后方。小心剪開雙側(cè)陰囊可見(jiàn)橢圓形睪丸鈍銳結(jié)合摘取雙側(cè)睪丸、附睪放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。頸白線鈍銳結(jié)合分離頸前肌群直至氣管向上顯露甲狀腺。任細(xì)操作切取包括甲狀軟骨在內(nèi)的甲狀腺。①切取約lmmXlmmXlmm組織各3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②其余組織全部浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定。切取左側(cè)睪丸下端lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②余左側(cè)睪丸組織浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③右側(cè)睪丸組織放置于無(wú)菌凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆谩４笫笮叵儆蓛扇~組成似等邊三角形。大部分位于胸腔前縱膈頂端近喉部基底部附著于心包腹面的前上方。鈍銳結(jié)合完整取下胸腺放置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①切取胸腺lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②切取胸腺5mmX5mmX5mm組織1塊浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定③其余組織置于無(wú)菌凍存管液巍冰凍保存?zhèn)溆?。整體取下大鼠心肺組織剪開分離雙側(cè)肺臟置于盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中涮洗去血跡。①切取左肺lmmXlmmXlmm組織3塊3戊二醛磷酸鹽緩沖液(PBSO.Olmol/LPpH7.4)或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福爾馬林液中固定凍存管液氮冰凍保存?zhèn)溆肙各取樣標(biāo)本細(xì)致編號(hào)登記。大鼠廢棄尸體處理。［注意事項(xiàng)戊巴比妥鈉配成1%生理鹽水溶液平均每只大鼠用量12.6mg1.2ml左右。大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的給藥容積一般為510ml/kgc完整取卜.胃腸道后己將腸系膜撕碎不易尋找腸系膜淋巳結(jié)所以先取淋巴結(jié)。取卜?胃腸道由專人操作取胃腸道及胃腸道取下后取材的操作器械單用一套。取材時(shí)