獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)：第六章 人工授精

第六章人工授精（Artificiallnsemination，AI）本章主要內(nèi)容第一節(jié)概述第二節(jié)采精第三節(jié)精液檢查第四節(jié)精液稀釋第五節(jié)精液的保存第六節(jié)輸精重點(diǎn)：采精方法、精液稀釋液、精液冷凍保存、輸精。難點(diǎn)：采精；精液稀釋；牛的輸精。參考書目楊利國主編，《動(dòng)物繁殖學(xué)》，第二版，中國農(nóng)業(yè)出版社，2002年。王元興、郎介金主編，《動(dòng)物繁殖學(xué)》，江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，1997年。本章重點(diǎn)難點(diǎn)第一節(jié)概述自然交配（NaturalMating，NM）一、交配方式人工授精（ArtificialInsemination，AI）二、人工授精的定義人工授精就是利用合適的器械采精，經(jīng)檢查、稀釋或保存等適當(dāng)?shù)奶幚?，再用器械將精液適時(shí)地輸入到發(fā)情母畜的生殖道內(nèi)，以代替公母畜直接交配的一種方法。第一節(jié)概述采精精液檢查、稀釋、保存輸精三、人工授精過程及優(yōu)點(diǎn)

充分利用了優(yōu)良公畜；

防止了生殖道傳染病的傳播；

提高了母畜的受胎率；

加速品種改良，降低成本，促進(jìn)國際交流。

過程優(yōu)點(diǎn)第一節(jié)概述畜種NM時(shí)每頭每年配母畜數(shù)每年采精次數(shù)每次可配母畜頭數(shù)每年每頭可配母畜頭數(shù)豬40-5050-1004-5200-400牛20-4070-10020-50500-1000冷凍精液冷凍精液100-2006,000-12,000馬30-5080-1405-12200-400羊30-5060-12020-40700-1000公畜NM與AI效率比較第一節(jié)概述第二節(jié)采精（SemenCollection）一、采精前的準(zhǔn)備(一)采精器材的清洗與消毒要求：采精器械簡單，操作方便，不影響公畜，不污染精液。原則：采精器械清潔，無菌、無毒。

第二節(jié)采精⒈玻璃器皿⒉橡膠制品⒊金屬器械⒋溶液第二節(jié)采精(二)采精場的準(zhǔn)備

寬敞、平坦、安靜、清潔、固定第二節(jié)采精(三)臺(tái)畜的選擇和利用臺(tái)畜是指在采精時(shí)，誘導(dǎo)并支撐采精公畜的支架或同種家畜。第二節(jié)采精要求：健康無病、體格健壯大小適中、性情溫順無腿疾真臺(tái)畜：母畜、公畜、閹畜第二節(jié)采精

假臺(tái)畜：模仿母畜體型高低大小，用鋼管或木材做的一個(gè)支架。第二節(jié)采精假臺(tái)畜優(yōu)點(diǎn)：方便、清潔、安全第二節(jié)采精(四)種公畜的準(zhǔn)備1、消毒

2、調(diào)教：爬跨假臺(tái)畜的調(diào)教方法第二節(jié)采精⑴在假臺(tái)畜后軀涂抹發(fā)情母畜陰道粘液或尿液。⑵在假臺(tái)畜旁放一發(fā)情母畜，讓公畜反復(fù)爬跨而不讓其交配當(dāng)公畜性沖動(dòng)至高峰時(shí)，迅速牽走母畜，誘其爬跨假臺(tái)畜采精。⑶將待調(diào)教公畜拴在假臺(tái)畜附近，目睹另一頭已調(diào)教好的公畜爬跨假公畜，然后誘其爬跨。⑷訓(xùn)練公豬時(shí)還可利用另一頭公豬爬跨過的假臺(tái)畜。第二節(jié)采精二、采精方法(一)假陰道法第二節(jié)采精假陰道采精時(shí)，溫度比壓力重要。㈠假陰道法

條件：適宜的溫度、壓力和潤滑度第二節(jié)采精假陰道的構(gòu)造第二節(jié)采精集精杯外殼氣嘴內(nèi)胎固定膠圈理想的充氣狀態(tài)充氣不飽滿，但可以用第二節(jié)采精牛的假陰道法采精第二節(jié)采精采精車羊的假陰道法采精第二節(jié)采精(二)手握法手掌握成空拳公豬陰莖導(dǎo)入握緊陰莖作一緊一松調(diào)節(jié)射精本方法主要適用于豬1、原則2、方法第二節(jié)采精

壓力更重要

手握法采精.mpg第二節(jié)采精

豬手握法采精第二節(jié)采精電極直腸進(jìn)入調(diào)節(jié)剌激器，選擇好頻率接通電源公畜伸出陰莖排出精液(三)電剌激法由低到高調(diào)節(jié)電壓1、原理2、方法本方法適合多種動(dòng)物第二節(jié)采精(四)按摩法公牛：直腸精囊腺公犬：陰莖的球體第二節(jié)采精犬按摩法采精第二節(jié)采精犬按摩法采精三、采精頻率牛：每周2天，每天2次；豬：隔天一次，最好3天一次；羊：每周3天，每天2次；犬：隔天一次。第二節(jié)采精第三節(jié)精液檢查

（SemenEvaluation）

一、檢查的目的1.確定種公畜的配種能力；2.確定精液的稀釋倍數(shù)；3.檢查精液的處理方法是否正確；4.檢查精液產(chǎn)品的質(zhì)量。第三節(jié)精液檢查二、檢查的項(xiàng)目（一）直觀項(xiàng)目

（二）微觀項(xiàng)目第三節(jié)精液檢查（一）直觀項(xiàng)目檢查第三節(jié)精液檢查1、射精量及精子密度畜種奶牛水牛馬豬雞山羊射精量ml5-103-650-100150-3500.4-1.00.5-1.5密度(億/ml)10-1512-182-32-325-4020-30射精量原因過少采精過頻、性機(jī)能衰退、睪丸炎、發(fā)育不良過多副性腺發(fā)炎、假陰道漏水、尿潴留第三節(jié)精液檢查2.色澤豬：淺灰白至白色；牛羊：乳白色或乳黃色。精液色澤依從濃到?。喝辄S-乳白-白色-灰白鮮紅生殖道下段出血或龜頭出血暗紅副性腺或生殖道出血綠色副性腺或尿生殖道化膿褐色混有尿液第三節(jié)精液檢查3.云霧狀是指新鮮精液在33-35℃下，精子成群運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的上下翻卷的現(xiàn)象。+++翻卷明顯而且較快++翻卷明顯但較慢+仔細(xì)看才能看到精液的移動(dòng)-無精液移動(dòng)

云霧狀的明顯程度代表精子活率的高低。第三節(jié)精液檢查4.氣味

5.pH值

第三節(jié)精液檢查（二）微觀項(xiàng)目檢查第三節(jié)精液檢查1.精子的活率定義：37℃下,精液中直線運(yùn)動(dòng)的精子占總精子數(shù)的百分率。測定方法：估測法。第三節(jié)精液檢查我國牛冷凍精液每劑量解凍后的活力的國家標(biāo)準(zhǔn)為：奶牛、肉?！?5%（即≥0.35），水?！?0%（即≥0.30）；牛冷凍精液每劑量解凍后的前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)的國家標(biāo)準(zhǔn)為：奶牛、肉?！?00萬個(gè)，水?！?000萬個(gè)。

例：牛精子活率檢查的程序載玻片預(yù)熱精液稀釋取樣檢查鏡檢活率估測活率記錄生理鹽水與精液等溫，按1:10稀釋取10ul放在載玻片中間，蓋上蓋玻片用100倍和400倍觀察

視野中直線運(yùn)動(dòng)精子占的百分率按10級(jí)制評(píng)分第三節(jié)精液檢查2.精子的密度檢查第三節(jié)精液檢查

目測法

比色法

血細(xì)胞板計(jì)數(shù)法各種家畜精液建議稀釋比例畜種牛羊豬馬雞稀釋倍數(shù)10020040404003%氯化鈉ul原精液ul5005100052005200520005第三節(jié)精液檢查注意：讓稀釋后的精液通過毛細(xì)作用自行吸入！用吸管

注入精液用移液器注入精液第三節(jié)精液檢查精子計(jì)數(shù)或從左上角到右下角五個(gè)中方格四角一中心共5個(gè)中方格以圖示次序計(jì)數(shù)，以精子的頭部為準(zhǔn)，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。第三節(jié)精液檢查精子密度計(jì)算公式精子密度=

5個(gè)中方格總精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)第三節(jié)精液檢查例：牛精子密度測定程序計(jì)數(shù)板放于載物臺(tái)上取稀釋精液精液注入計(jì)數(shù)室鏡檢精子計(jì)數(shù)密度計(jì)算3%氯化鈉將精液100倍稀釋取25ul從計(jì)數(shù)板與蓋玻片的接縫中加入,自行吸入計(jì)數(shù)室中第三節(jié)精液檢查3、精子畸形率的檢查第三節(jié)精液檢查0.5克龍膽紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，過濾至試劑瓶中備用。美藍(lán)或紅墨水。第三節(jié)精液檢查染色劑涂片方法正常精子第三節(jié)精液檢查雙頭精子畸形精子脫尾精子頂體脫離尾部卷曲雙尾精子第三節(jié)精液檢查第四節(jié)精液稀釋(SemenDilution)

精液稀釋：在采得的精液里，添加一定量的按特定配方配制的、適合精子存活并保持受精能力的溶液，這一過程我們稱為精液稀釋。一、定義二、目的⒈擴(kuò)大精液容量。⒉降低能量消耗，補(bǔ)充營養(yǎng)；4.便于精子的保存和運(yùn)輸。3.抑制有害微生物活動(dòng)；第四節(jié)精液稀釋三、精液稀釋液的主要成分

(一)稀釋劑

擴(kuò)大精液容量。

(二)營養(yǎng)劑

提供營養(yǎng)，補(bǔ)充精子所消耗的能量。

第四節(jié)精液稀釋(三)保護(hù)劑

1、緩沖物質(zhì)：保持pH值；三羥甲基氨基甲烷Tris2、非電解質(zhì)：降低精清中電解質(zhì)濃度；

3、防冷剌激物質(zhì)：防止精子冷休克；

4、抗菌；

5、抗凍物質(zhì)。乙二醇，DMSO，甘油緩沖、抑菌、防止精子受低溫打擊第四節(jié)精液稀釋(四)其它添加劑1、酶類：過氧化氫酶→分解H2O2

；β-淀粉酶→促進(jìn)精子獲能；2、激素類：催產(chǎn)素、PGs；3、維生素類：VitB1

、VitB2

、VitC、VitE；4、其它添加成分：二氧化碳、EDTA、己酸.第四節(jié)精液稀釋牛冷凍精液稀釋劑配方第四節(jié)精液稀釋第四節(jié)精液稀釋第四節(jié)精液稀釋四、稀釋液的配制注意事項(xiàng)1.容器洗滌、消毒；2.稀釋用水為蒸餾水，pH值為中性；3.藥品純凈、稱量準(zhǔn)確；4.高溫消毒或過濾除菌；5.注意保持酶類等物質(zhì)的活性。第四節(jié)精液稀釋五、精液的稀釋倍數(shù)畜種牛羊豬馬稀釋倍數(shù)10-402-42-42-3計(jì)算公式稀釋倍數(shù)=原精液密度×解凍預(yù)測活率×稀釋后每份精液體積稀釋后每份精液中所含的有效精子數(shù)第四節(jié)精液稀釋1.操作溫度應(yīng)在30℃左右；2.稀釋液與精液溫度一致；3.將稀釋液緩慢倒入精液中；4.高倍稀釋應(yīng)分次進(jìn)行；5.稀釋后立即鏡檢。

六、精液的稀釋方法第四節(jié)精液稀釋第四節(jié)精液稀釋恒溫低速搖床第五節(jié)精液的保存(SemenStorage)

㈠精液的保存常溫保存（15－25℃）低溫保存（0－5℃）冷凍保存（-79℃或-196℃）一、概述㈡各種精液保存方法的理論

1、暫時(shí)抑制或停止精子的運(yùn)動(dòng)；

2、降低其代謝速度，減緩其能量消耗。第五節(jié)精液的保存㈢降低代謝水平的幾種途徑⒈降低溫度；⒉控制稀釋液的pH值（弱酸）；⒊與空氣隔絕；⒋加適量的抗生素；⒌加適量的營養(yǎng)物質(zhì)，補(bǔ)充能量消耗。第五節(jié)精液的保存二、常溫保存

常溫保存主要適用于公豬的精液。

⒈向稀釋液中充CO2；⒉利用精子代謝所產(chǎn)生的CO2調(diào)節(jié)pH值；⒊在稀釋液中加酸類物質(zhì)和充以氮?dú)?，如己酸稀釋液。第五?jié)精液的保存三、低溫保存㈠原理

在抗冷劑保護(hù)下，防止精子冷休克；緩慢降溫至0-5℃，利用低溫抑制精子的活動(dòng)，降低精子能量消耗，抑制微生物生長；加入必要的營養(yǎng)成分，并隔絕空氣。第五節(jié)精液的保存㈡方法

防止冷休克：卵黃、奶類；嚴(yán)格遵守逐步降溫的操作規(guī)程。第五節(jié)精液的保存四、冷凍保存（SemenFreezing）精液冷凍保存是利用液氮、干冰或其他冷源，將精液經(jīng)過適當(dāng)處理后，保存在超低溫中，以達(dá)到長期保存精液的目的。第五節(jié)精液的保存(一)保存原理

1.冷凍保存的溫度為-70℃以下的超低溫；2.超低溫條件下精子代謝處于靜止?fàn)顟B(tài)；3.精子內(nèi)外水分子在低溫下的變化：

a.晶體化（0-60℃）

b.玻璃化（-60

-250℃）

第五節(jié)精液的保存(二)精液冷凍保存稀釋液含有低溫保護(hù)劑（卵黃、牛奶）防凍保護(hù)劑（甘油）維持滲透壓物質(zhì)（糖類、檸檬酸鈉）抗菌素以及其它添加劑第五節(jié)精液的保存

1.精液的稀釋

2.逐步降溫和平衡

3.分裝、冷凍和保存

(三)冷凍精液的制作過程第五節(jié)精液的保存精液分裝第五節(jié)精液的保存(四)冷凍保存精液劑型1.塑料細(xì)管型0.25ml,2.顆粒型0.1ml第五節(jié)精液的保存(五)精液冷凍保存冷源及容器干冰－79℃液氮－196℃保存的容器：液氮罐第五節(jié)精液的保存第六節(jié)輸精(Insemination)

1.母畜的發(fā)情鑒定和保定；2.輸精器具的消毒；3.技術(shù)人員的準(zhǔn)備；4.精液解凍；5.精液品質(zhì)的要求。一、輸精前的準(zhǔn)備精液解凍

在冷凍精液解凍研究方面,目前英、法、日、墨西哥、印度等國家采用低溫(5℃)緩慢解凍,新西蘭、芬蘭、瑞典、澳大利亞等國采用室溫(15℃)中速解凍,匈牙利、比利進(jìn)等20多個(gè)國家多采用37-40℃體溫快速解凍,挪威等國家采用75℃高溫快速解凍,均取得了良好的效果。

二、輸精的基本技術(shù)要求牛