DB51T 3006-2023水稻對(duì)南方水稻黑條矮縮病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程

DB51 請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。水稻對(duì)南方水稻黑條矮縮病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T2631南方水稻黑條矮縮病測(cè)報(bào)技術(shù)規(guī)范感病對(duì)照品種TN1susceptiblec無(wú)毒白背飛虱non-toxicwhite-backed4試劑與設(shè)備可調(diào)控溫光的養(yǎng)蟲(chóng)室，溫度保持于26℃±1℃范圍內(nèi)，相對(duì)濕度80%～90%，光照每天15.1.1鑒定病圃的選擇與設(shè)置5.1.2.1分行初步篩選預(yù)留10株參試品種空間。水稻參試品種按同樣規(guī)格單本移栽于TN1保護(hù)行或誘發(fā)行之間，各品種移栽35.1.2.2小區(qū)重復(fù)鑒定播種時(shí)期較當(dāng)?shù)厣a(chǎn)常規(guī)播種期晚5d～10d。種子經(jīng)浸泡、催芽、育苗移栽方式種植。育秧方式為濕潤(rùn)灌溉水與常規(guī)管理一致。秧田期較常規(guī)管理增施尿素5kg/667m2。本田管理較常規(guī)肥水管理增施尿5.1.5.1蟲(chóng)量調(diào)查5.1.5.2帶毒率調(diào)查頭以上，從中隨機(jī)選取100頭，用RT-PCR檢測(cè)（參照本附錄A）小批量白背飛虱或Dot-ELISA（參照5.1.5.3有效傳毒蟲(chóng)量計(jì)算FVS=N×PVS………………（1）5.2.1.1拔節(jié)期調(diào)查5.2.1.2抽穗黃熟期調(diào)查5.2.2.1分蘗、拔節(jié)期癥狀5.2.2.2抽穗黃熟期癥狀基部可見(jiàn)縱向皺褶；在莖稈下部節(jié)間和節(jié)上可見(jiàn)蠟白色或黑褐色瘤狀突起。以黃熟期初期植株有1個(gè)以上不孕、不實(shí)（結(jié)實(shí)粒少于全穗1/3）分蘗癥狀為感病單株判Rif=(nif+nd)/(ntf+nd)×100%…………（2）式中:Rif——抽穗黃熟期感病株率，單位為百分率（%nd——分蘗期感病株且在抽穗黃熟期死亡株數(shù)，單位為株；Rr=Rif/Rsf×100%………………Rif——抽穗黃熟期感病株率，單位為百分率（%）；選取飼喂白背飛虱的水稻種子用水浸種24h后，紗布覆蓋，恒溫箱32℃±2℃催芽24h～48h，選取在重病區(qū)采集表現(xiàn)南方水稻黑條矮縮病疑似癥狀的水稻采病株葉片按照NY/T2631附錄C的規(guī)定或參考附錄A進(jìn)行檢測(cè)，確認(rèn)感染南方水稻黑條矮縮病毒則將7.2的病株種于內(nèi)徑100mm～200mm大燒杯中,土面覆蓋濾紙,將適量1齡～2齡無(wú)毒白背飛虱移入其中,并用60目防蟲(chóng)網(wǎng)封口。飼毒2d后將蟲(chóng)移入內(nèi)徑80mm～110mm，預(yù)先育有白背飛虱喜食品種如TN1參試品種，含感病對(duì)照經(jīng)5.1.3方法浸種、催芽；選取30粒左右發(fā)芽良好的種子均勻播于盛有自然選取6.3已飼毒且度過(guò)循回期的白背飛虱成蟲(chóng)接種種群，并計(jì)算有效接IVS=N×PVS （4）式中:N——接種白背飛虱數(shù)量，單位為頭。殺，將秧苗移出塑料杯，至15℃~30℃條件下培育，常規(guī)管理，定期觀察植株發(fā)病情況。若出現(xiàn)感病對(duì)照的平均感病株率小于30則重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)。按Rit=nit/ntt×100%…………（5）式中:Rit——苗期感病株率，單位為百分率（%ntt——接種病毒的總株數(shù)，單位為株。A.1.7瓊脂糖。A.1.9冰乙酸。A.1.1150×TAE配方:Tris堿242g；冰乙酸57.1ml；EDTA（0.5mol/L）100ml，定容至1000ml。A.2儀器設(shè)備A.2.3冰箱（2℃~8℃和-20℃兩種）。A.2.4微量可調(diào)移液器（2μL、10μL、100μL、1000μL）及配套帶濾芯吸頭。A.3檢測(cè)引物正向引物SRB-S10-F5’-CCACATCGCGTCATCTCAAACTAC-3’反向引物SRB-S10-R5’-CGGTCTTACGCAACGATGAACC-3’A.4試驗(yàn)操作A.4.1采樣工具），A.4.2樣品采集置于裝有液氮的保溫桶內(nèi)，盡快運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室4℃條件下保存待檢，存放不能超過(guò)7d。A.4.3樣品保存A.4.4樣品處理A.4.4.2按照0.1g樣品/1mLTRIzolreagent,加入適量TRIzolreagenA.4.4.3每1mLTRIzolreagent加入0.2mL氯仿，蓋好管蓋，充分震蕩15s，室溫靜置5min；A.4.4.512000r/min，4A.4.5檢測(cè)A.4.5.1擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備A.4.5.2A.4.5.2A.5結(jié)果判定A.5.1結(jié)果分析條件設(shè)定根據(jù)成像結(jié)果，凝膠中根據(jù)DNAMarker標(biāo)識(shí)在920bp的水平位置，如果陽(yáng)性對(duì)照和檢測(cè)樣品均具有0全株所有分蘗均能正常抽穗、結(jié)實(shí)，無(wú)明顯矮化分蘗，感全株1-2個(gè)分蘗明顯矮化，頂部有小穗結(jié)實(shí)，但結(jié)實(shí)率低南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—分蘗拔節(jié)表C.1南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記………南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—分蘗拔節(jié)表C.2南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記………