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關(guān)于人乳頭瘤病毒HPV核酸檢測(cè)對(duì)比分析第1頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月宮頸癌婦科第二大癌癥每年約有20余萬婦女死于宮頸癌新發(fā)病:全球---50萬/年我國(guó)---13.2萬/年第2頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月姓名:哈拉爾德·楚爾·豪森國(guó)籍:德國(guó)民族:日耳曼課題:發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒(HPV)引發(fā)宮頸癌成績(jī):獲得2008年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)HaraldzurHausen宮頸癌第3頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月什么是HPV?HumanPapillomavirus
人乳頭瘤病毒雙鏈DNA無包膜病毒廣泛分布于高等脊椎動(dòng)物定向感染皮膚及粘膜的復(fù)層鱗狀上皮HPV病毒電鏡照片第4頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月Circular逆轉(zhuǎn)錄區(qū)域包括控制病毒基因組復(fù)制的基因序列E6、E7為兩種致癌蛋白編碼,它們是高危型HPV導(dǎo)致細(xì)胞變性的主要原因E1、E2、E4和E5負(fù)責(zé)病毒復(fù)制L1、L2為兩種病毒外殼蛋白編碼在預(yù)防HPV的疫苗中使用了L1第5頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV的類型已經(jīng)鑒定的乳頭狀瘤病毒有200多種與人有關(guān)的約125種30-40種感染生殖道低危型:HPV6、11、42、43、44等中間型:HPV31、33、35、39、51、52、58、59、68高危型:HPV16、18、45、56等臨床最重要的型:6、11、16、18、31、33、35、38型8個(gè)亞型第6頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV感染第7頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV感染的途徑和危險(xiǎn)因素性傳播直接皮膚接觸母嬰傳播性行為混亂免疫抑制吸煙其他STD協(xié)同感染口服避孕藥第8頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV感染率與發(fā)病率HPV感染與宮頸癌發(fā)病率變化圖,IntJCancer1993,53:919第9頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV感染的不同階段第10頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月宮頸癌的癌前病變(CIN)CIN=CervicalIntraepithelialNeoplasia宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變CIN宮頸不典型增生宮頸原位癌:宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生癌變,但癌變未突破基底膜、間質(zhì)無浸潤(rùn)。輕度(CINⅠ級(jí)):病變局限在上皮層的1/3內(nèi)中度(CINⅡ級(jí)):病變局限在上皮層的下2/3重度(CINⅢ級(jí)):病變幾乎累及全部上皮層,僅剩1-2層表面的正常鱗狀上皮宮頸上皮細(xì)胞部分或大部分被不同程度異型細(xì)胞所替代定義第11頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月宮頸癌的癌前病變(CIN)第12頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月專家共識(shí)宮頸癌的“元兇”就是高危型HPV感染高危型HPV感染是宮頸癌的必要條件沒有HPV感染,就沒有宮頸癌防治HPV感染,就是防治宮頸癌1995年,國(guó)際癌癥研究協(xié)會(huì)認(rèn)為高危固定價(jià)HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌的主要病因第13頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月宮頸癌感染HPV病毒CIN早期浸潤(rùn)癌唯一知道病因的癌癥唯一可以通過早期干預(yù)阻斷的癌癥
5-15年第14頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月內(nèi)容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用第15頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月分子水平細(xì)胞水平組織水平宮頸癌檢測(cè)方法學(xué)發(fā)展過程第16頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月1982年醋酸、碘液肉眼檢測(cè)靈敏度為70.9%特異度為74.3%1996年新柏氏TCT靈敏度為80.8%特異度為
51-60%2000年HPV核酸檢測(cè)靈敏度為98.6%特異度為99%巴氏涂片靈敏度為50%以下特異度為?%1941年宮頸癌篩查發(fā)展史第17頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月組織學(xué)檢測(cè)肉眼觀察陰道鏡觀察組織檢查優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單,價(jià)格低廉,
適宜作初步篩查;缺點(diǎn):準(zhǔn)確率低,人員素質(zhì)
要求高,病人痛苦程度大。第18頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞學(xué)檢測(cè)傳統(tǒng)巴氏涂片液基細(xì)胞學(xué)
傳統(tǒng)巴氏涂片(CV)液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)自動(dòng)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)(LCT)計(jì)算機(jī)輔助細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)(CCT)第19頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的假陰性液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)假陰性結(jié)果高達(dá)20%水平差的地方更高原因分析:1、視野局限
2、人為因素
1)取標(biāo)本、片子制備
2)技術(shù)差異
3)耐心、責(zé)任心第20頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的假陽性1、凹空細(xì)胞是HPV感染的主要形態(tài)學(xué)改變,但不是特異性改變2、HPV正在清除階段第21頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的性價(jià)比低TCT陰性要求每年做同樣的檢查HPV陰性可以把篩查時(shí)間延長(zhǎng)到3-5年HPV檢測(cè)TCT檢查衛(wèi)生部《宮頸癌篩查及早診早治指南》第22頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月核酸檢測(cè)直接檢查導(dǎo)致宮頸癌的元兇---HPV病毒靈敏度高,特異性好操作簡(jiǎn)便,可作為療效評(píng)估和監(jiān)測(cè)指標(biāo)第23頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月宮頸癌篩查三方案最佳方案:HPV核酸檢測(cè)+液基細(xì)胞基本方案:醋酸白實(shí)驗(yàn)一般方案:HPV核酸檢測(cè)+傳統(tǒng)巴氏涂片中國(guó)癌癥研究協(xié)會(huì)推薦方法第24頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月第25頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月內(nèi)容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用第26頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV第一代核酸檢測(cè)產(chǎn)品產(chǎn)品:HC2、港龍13型原理:雜交捕獲技術(shù)特點(diǎn):檢測(cè)核酸、不分型、不能科學(xué)定量、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)計(jì)算機(jī)判讀15minDNA-RNA雜交60min抗體捕獲60min化學(xué)發(fā)光檢測(cè)30minDNA分解45min第27頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV核酸第二代檢測(cè)產(chǎn)品產(chǎn)品:凱普21型、亞能23型、透景26型、達(dá)安19型、港龍29型原理:膜條雜交、液相雜交特點(diǎn):可以分型,而且高低危都能做需要雜交、時(shí)間長(zhǎng)。5-10個(gè)小時(shí)不等。開放式雜交、極易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室生物污染。結(jié)果需肉眼判讀,增加人為誤差。不能定量第28頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV核酸第三代檢測(cè)方法產(chǎn)品:上海之江13型分型檢測(cè)試劑原理:分別采用HPV13種型別的特異性引物及熒光探針,應(yīng)用PCR+Taqman技術(shù),對(duì)
HPV13種型的特異性核酸片段進(jìn)行分型定量檢測(cè)。特點(diǎn):分型、定量、快捷、安全第29頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)勢(shì)一:分型HPV59IC高危13型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68第30頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)勢(shì)二:快捷
上機(jī)檢測(cè)
抽提DNA30min60min
標(biāo)本采集30min2小時(shí)!
加樣加試劑第31頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)勢(shì)三:安全之江:封閉式實(shí)時(shí)熒光PCR無需洗滌減少污染傳統(tǒng)膜條雜交:反復(fù)洗滌操作繁瑣污染幾率增加第32頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)勢(shì)四:定量(唯一)3、便于文章的發(fā)表。1、宮頸病毒載量和CIN分期呈正相關(guān)。2、用于對(duì)病程的觀察和療效的評(píng)估。第33頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月正常hpv正常HPV正常正常hpv正常HPV5萬IU1萬IU傳統(tǒng)方法為什么不能定量?正常hpv一、標(biāo)本量采集不準(zhǔn)確。二、上皮細(xì)胞過少,也會(huì)出現(xiàn)假陰性的結(jié)果第34頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月5萬IU/10個(gè)1萬IU/2個(gè)正常hpv之江的定量方法—科學(xué)1、MNBH是人單拷貝基因-----測(cè)MNBH基因的數(shù)量相當(dāng)于檢測(cè)取了多少個(gè)上皮細(xì)胞2、如果沒有檢測(cè)出MNBH基因,或MNBH量太少??梢员苊饧訇幮越Y(jié)果正常hpv正常HPV正常正常hpv正常HPVHPV第35頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月第36頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月內(nèi)容HPV與宮頸癌宮頸癌檢測(cè)方法比較HPV核酸檢測(cè)方法學(xué)比較臨床使用第37頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV檢測(cè)結(jié)果的用途篩查:與細(xì)胞學(xué)檢測(cè)配合確定篩查頻率和周期,確保早期發(fā)現(xiàn),及時(shí)干預(yù)。分流:根據(jù)篩查結(jié)果,將高危人群和患者群進(jìn)行分流,制定不同的干預(yù)、治療方案。隨診:根據(jù)HPV結(jié)果的變化情況,判斷治療效果和病情轉(zhuǎn)歸。第38頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV檢測(cè)送檢流程第39頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月宮頸刷、保存液及取樣示意圖第40頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV檢測(cè)后處理HPV基因分型檢測(cè)常規(guī)篩查液基細(xì)胞學(xué)檢查根據(jù)最后結(jié)果按ASCCP指南處理陽性正常CINⅠCINⅡ、Ⅲ陰性1年后重復(fù)HPV檢測(cè)和細(xì)胞學(xué)檢查半年后重復(fù)HPV檢測(cè)和細(xì)胞學(xué)檢查或陰道鏡檢查陰道鏡檢查、多點(diǎn)活檢第41頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV感染的治療通過治療HPV感染達(dá)到防治宮頸病變的目的是近年來研究的熱點(diǎn),但目前仍缺乏公認(rèn)有效的治療手段。30歲之前的感染者,如果沒有宮頸細(xì)胞學(xué)改變,主要通過消除易感因素、提高機(jī)體免疫能力、輔助局部藥物治療,幫助感染者自我清除。30歲以后的感染者,以及無論年齡有細(xì)胞學(xué)改變者,治療包括:
抗HPV治療+宮頸病變治療其中抗HPV治療包括:
全身抗病毒藥物、免疫增強(qiáng)劑、生物學(xué)治療、中藥治療、局部藥物(抗病毒、改善內(nèi)環(huán)境、促進(jìn)上皮修復(fù))治療;現(xiàn)有宮頸病變治療手段也能清除部分HPV病毒。HPV疫苗是最大希望第42頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月項(xiàng)目一:HPV16、18分型檢測(cè)
特點(diǎn):1、可以分型檢測(cè)2、可以覆蓋70%-80%的病毒3、收費(fèi)低,容易推廣
目標(biāo):1、常規(guī)婦科體檢HPV兩個(gè)項(xiàng)目推薦第43頁(yè),課件共45頁(yè),創(chuàng)作于2023年2月HPV兩個(gè)項(xiàng)目推薦項(xiàng)目二:HPV16、18、31、33、35、39
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