細菌劃線分離與純培養(yǎng)

實驗4：細菌劃線分離與純培養(yǎng)2021/5/91123Fcous 1.掌握需氧菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)。2．了解細菌的分離培養(yǎng)原則及常用的方法一、實驗?zāi)康?.融化培養(yǎng)基，傾注平板。2.用普通瓊脂平板每人做一次劃線分離培養(yǎng)。（病料）3.用普通肉湯做一管大腸桿菌的移植培養(yǎng)。注：上述接種的培養(yǎng)基注明班組后進行培養(yǎng)。二、實驗內(nèi)容三、作業(yè)1.為什么要進行細菌的分離培養(yǎng)？2.進行分離培養(yǎng)應(yīng)注意哪些事項？3.細菌分離培養(yǎng)的方法有哪些？（重點敘述平板劃線法）2021/5/92“”實驗四實驗四小結(jié)在細菌學(xué)檢驗中，細菌的分離培養(yǎng)是重要的基本技術(shù)之一。從混雜微生物中獲得單一菌株純培養(yǎng)的方法稱為分離。純培養(yǎng)是指一株菌種或者一個培養(yǎng)物中所有的細菌都是由一個細胞分裂、繁殖產(chǎn)生的后代。12分離培養(yǎng)的目的在于從被檢的材料中，或者從眾多雜菌中分離出純的病原菌。細菌分離培養(yǎng)應(yīng)先從被檢材料或者病料中分離培養(yǎng)出單個菌落，然后取可疑菌落進行純培養(yǎng)，再將純培養(yǎng)物移植培養(yǎng)。2021/5/93“”實驗四實驗三小結(jié)3需氧性細菌分離培養(yǎng)法1、平板劃線分離法2、傾注平皿分離法3、芽孢需氧菌分離培養(yǎng)法4、利用化學(xué)藥品的分離培養(yǎng)法5、實驗動物分離法6、瓊脂斜面分離法7、瓊脂平板涂布分離法8、營養(yǎng)肉湯分離法2021/5/94“”實驗四實驗三小結(jié)4厭氧性細菌分離培養(yǎng)法1、生物學(xué)方法植物組織（馬鈴薯、燕麥、發(fā)芽谷物）動物組織（新鮮動物組織、加熱的肌肉）2、化學(xué)方法焦性沒食子酸法、硫乙醇酸鈉法3、物理學(xué)方法利用加熱、密封、抽氣等物理方法，驅(qū)除或者隔絕環(huán)境及培養(yǎng)基中的氧氣，造成厭氧環(huán)境。2021/5/95“”實驗四實驗三小結(jié)5兼性厭氧性細菌分離培養(yǎng)法細菌培養(yǎng)中，有少數(shù)細菌（如牛型布氏桿菌）在含有5%--10%二氧化碳的環(huán)境下才能生長。2021/5/96“”實驗四實驗三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法菌種被其他雜菌污染時或混合菌懸液常用平板劃線法進行純種分離。此方法是借助將蘸有混合菌懸液的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散的由單個微生物繁殖而成的菌落，從而達到純化目的。2021/5/97“”實驗四實驗三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法1、劃線分離的培養(yǎng)基必須事先倒好，需充分冷卻待平板稍干后才可使用。2、為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每一個平皿傾倒約20ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面應(yīng)光滑。3、劃線分離主要有連續(xù)劃線和分區(qū)劃線兩種。2021/5/98“”實驗四實驗三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本穿刺接種法:用于觀察細菌動力傾注培養(yǎng)法:用于細菌計數(shù)液體培養(yǎng)基接種法斜面接種法2021/5/99“”實驗四實驗三小結(jié)7細菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)沾取標(biāo)本接種滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細菌，以免污染標(biāo)本殺滅接種環(huán)沾染的細菌，以免污染環(huán)境2021/5/910“”實驗四實驗三小結(jié)6平板劃線分離培養(yǎng)法三段分區(qū)法四段分區(qū)法2021/5/911實驗四實驗三小結(jié)分區(qū)劃線法(3區(qū))第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)2021/5/912實驗四實驗三小結(jié)連續(xù)劃線法2021/5/9132021/5/914斜面接種法及接種后菌落生長示意圖

2021/5/915實驗四實驗三小結(jié)細菌培養(yǎng)法一般培養(yǎng)（需氧培養(yǎng)）：★培養(yǎng)溫度：37℃（采用恒溫培養(yǎng)箱）★培養(yǎng)時間：18～24h2021/5/916實驗四實驗三小結(jié)實驗結(jié)果觀察記錄細菌生長情況的觀察觀察瓊脂平板表面生長的各種菌落，注意其大小、形狀、邊緣、表面結(jié)構(gòu)、透明度、顏色等性狀。2021/5/917實驗四實驗三小結(jié)實驗結(jié)果在固體培養(yǎng)基觀察記錄菌落★定義：指單個細菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細菌集團?！锞涮卣鳎捍笮?、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性★菌落類型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物2021/5/918細菌在半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象有鞭毛細菌：在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴散生長，穿刺線邊緣模糊。無鞭毛細菌：只沿穿刺線生長，穿刺線邊緣清晰。2021/5/919實驗四實驗三小結(jié)細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象混濁沉淀：多見于鏈狀排列的細菌菌膜：多見于厭氧菌2021/5/9202021/5/921單菌落（clone)菌苔(lawn)2021/5/922液體培養(yǎng)時的群體形態(tài)