天然藥物化學(xué)成分的提取與分離優(yōu)選ppt資料

第二章天然藥物(yàowù)化學(xué)成分的提取與分離第一頁(yè)，共108頁(yè)。藥材(yàocái)粗粉提取(tíqǔ)混合物分離(fēnlí)有效成分第二頁(yè)，共108頁(yè)。提取(tíqǔ)分離方法●提取(tíqǔ)●分離溶劑(róngjì)提取法水蒸汽蒸餾法兩相溶劑萃取法沉淀法透析法分餾法鹽析法結(jié)晶法與重結(jié)晶法超臨界流體萃取法色譜法第三頁(yè)，共108頁(yè)。一、溶劑(róngjì)提取法第一節(jié)天然(tiānrán)藥物化學(xué)成分的提取1、溶劑(róngjì)的極性極性：指一根共價(jià)鍵或一個(gè)共價(jià)分子中電荷分布的不均勻性。如果電荷分布得不均勻，則稱該鍵或分子為極性；如果均勻，則稱為非極性。與介電常數(shù)成正相關(guān)。第四頁(yè)，共108頁(yè)。H2O(水)78.5HCOOH(甲酸)58.5HCON(CH3)2(N,N-二甲基甲酰胺)36.7CH3OH(甲醇)32.7C2H5OH(乙醇)24.5CH3COCH3(丙酮(bǐnɡtónɡ))20.7n-C6H13OH（正己醇）13.3CH3COOH(乙酸)6.15

C6H6(苯)2.28CCl4(四氯化碳)2.24n-C6H14（正己烷）1.88介電常數(shù)(jièdiànchánɡshù)第五頁(yè)，共108頁(yè)。由弱到強(qiáng)的順序(shùnxù)如下：石油醚(低沸點(diǎn)高沸點(diǎn))<二硫化碳<四氯化碳<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚(yǐmí)<醋酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水選擇溶劑的要點(diǎn)：能有效的提取成分；相似相溶，沸點(diǎn)適中易回收(huíshōu)；低毒安全。第六頁(yè)，共108頁(yè)。2、溶劑(róngjì)的類型水親水性有機(jī)溶劑(róngjì)（極性溶劑(róngjì)）親脂性有機(jī)溶劑(róngjì)（非極性溶劑(róngjì)）第七頁(yè)，共108頁(yè)。（1）水優(yōu)點(diǎn)：溶解范圍廣、穿透能力強(qiáng)、易得、安全缺點(diǎn)：a.有些苷類成分(chéngfèn)的酶解b.有些脂溶性成分(chéngfèn)溶解不完全c.水提液易發(fā)霉、變質(zhì)d.水溶性雜質(zhì)多，過(guò)濾困難e.沸點(diǎn)高，濃縮困難第八頁(yè)，共108頁(yè)。(2)親水性有機(jī)溶劑優(yōu)點(diǎn)：溶解范圍廣、水溶性雜質(zhì)溶出少、提取液不易發(fā)霉、變質(zhì)、大部分可回收利用(lìyòng)。缺點(diǎn)：但有揮發(fā)性、易燃燒。第九頁(yè)，共108頁(yè)。（3）親脂性有機(jī)溶劑優(yōu)點(diǎn)：對(duì)化合物溶解選擇性較強(qiáng)、水溶性雜質(zhì)少、易純化。缺點(diǎn)：揮發(fā)性大、易燃燒(ránshāo)，有毒、價(jià)格昂貴，對(duì)提取設(shè)備要求高穿透力較弱，提取時(shí)間長(zhǎng)。第十頁(yè)，共108頁(yè)。3、被提取成分(chéngfèn)的性質(zhì)極性（親水性）非極性（親脂性）中等極性（既有親水性又有親脂性）常見(jiàn)取代基的極性大小順序：酸＞酚＞醇＞胺＞醛＞酮＞酯＞醚＞烯＞烷第十一頁(yè)，共108頁(yè)。4、溶劑選擇的原則（1）“相似相溶”，對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)雜志溶解度小。（2）溶劑與所溶成分不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，即使發(fā)生也是可逆的。（3）廉價(jià)、易得、使用安全、易于(yìyú)回收和濃縮。第十二頁(yè)，共108頁(yè)。（三）提取技術(shù)(jìshù)1、浸漬法適用(shìyòng)于：有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、粘液質(zhì)、樹(shù)膠等多糖物質(zhì)較多的中藥。第十三頁(yè)，共108頁(yè)。2、煎煮法適用(shìyòng)于：能溶于水且遇熱穩(wěn)定成分的提取。第十四頁(yè)，共108頁(yè)。3、滲漉法適用于：遇熱易被破壞(pòhuài)的成分。第十五頁(yè)，共108頁(yè)。4、回流(huíliú)提取法適用于：對(duì)熱穩(wěn)定(wěndìng)的成分提取。第十六頁(yè)，共108頁(yè)。5、連續(xù)(liánxù)回流提取法索氏提取(tíqǔ)器第十七頁(yè)，共108頁(yè)。溶劑提取(tíqǔ)法分類提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水有機(jī)溶劑不加熱，在常溫下浸泡提取效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機(jī)溶劑不加熱滲漉筒—脂溶性成分消耗溶劑量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)煎煮法水直火加熱—水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機(jī)溶劑在回流裝置中水浴加熱提取—脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機(jī)溶劑以索氏提取器水浴加熱回流提取節(jié)省溶劑效率最高親脂性較強(qiáng)成分時(shí)間長(zhǎng)第十八頁(yè)，共108頁(yè)。（四）影響提取效率(xiàolǜ)的主要因素溶劑的選擇（關(guān)鍵）提取技術(shù)濃度差藥物的粉碎度溫度、時(shí)間第十九頁(yè)，共108頁(yè)。（五）提取液的濃縮1、蒸餾指將提取液加熱濃縮，特點(diǎn)是不僅對(duì)回收的溶劑可再利用，降低成本，減少有機(jī)溶劑對(duì)環(huán)境(huánjìng)的污染和對(duì)操作人員的危害。第二十頁(yè)，共108頁(yè)。2、蒸發(fā)通過(guò)加熱使提取液中的溶劑(róngjì)氣化并除去，從而提高提取液濃度。第二十一頁(yè)，共108頁(yè)。原理：被提取成分(chéngfèn)和水一起加熱時(shí)，其蒸汽壓與水蒸氣壓總和為一個(gè)大氣壓，液體沸騰，水蒸氣將揮發(fā)性成分(chéngfèn)一并帶出。范圍：難溶于水或不溶于水的揮發(fā)性成分(chéngfèn)，加熱不被破壞。如：揮發(fā)油、小分子的香豆素類、小分子的醌類成分(chéngfèn)。二、水蒸氣蒸餾(zhēngliú)法：共水蒸餾(zhēngliú)法（即直接加熱法）通水蒸氣蒸餾法第二十二頁(yè)，共108頁(yè)。適用于：具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞(pòhuài)、與水不發(fā)生反應(yīng)且不溶或難溶于水的成分的提取。第二十三頁(yè)，共108頁(yè)。三、超臨界流體(liútǐ)萃取物質(zhì)處于臨界溫度(línjièwēndù)和臨界壓力以上狀態(tài)時(shí)，成為單一相態(tài)，稱超臨界狀態(tài)。兼具有氣液兩相性質(zhì)（常用萃取劑CO2）：①液體相近的密度，強(qiáng)穿透力；②氣體相近的擴(kuò)散力，提取速率高。第二十四頁(yè)，共108頁(yè)。第二十五頁(yè)，共108頁(yè)。第二節(jié)天然藥物(yàowù)化學(xué)成分的分離一、兩相溶劑萃取法（一）基本原理液液萃取是以分配定律(dìnglǜ)為基礎(chǔ)分配定律(dìnglǜ)：一定T、P下，溶質(zhì)在兩個(gè)互不相溶的溶劑中分配，平衡時(shí)，溶質(zhì)在兩相中濃度之比為常數(shù)。K-分配系數(shù)第二十六頁(yè)，共108頁(yè)。雜質(zhì)(zázhì)溶質(zhì)(róngzhì)原溶劑(róngjì)萃取劑第二十七頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室液液(yèyè)萃取過(guò)程第二十八頁(yè)，共108頁(yè)。（二）萃取劑的選擇原則1、互不相溶2、分配系數(shù)相差越大越好3、水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般(yībān)多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行兩相萃??；有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，需用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。第二十九頁(yè)，共108頁(yè)。溶劑萃取步驟(bùzhòu)溶劑體積為樣品溶液的30％-35％。振蕩幾次打開(kāi)活塞Gas蒸氣逸出（也叫放氣）第三十頁(yè)，共108頁(yè)。絮狀物（乳化）有機(jī)相水相水相和絮狀物靜置分層激烈振搖1-2min第三十一頁(yè)，共108頁(yè)。有機(jī)相3～5次少量多次原則(yuánzé)第三十二頁(yè)，共108頁(yè)。二、沉淀法（一）酸堿沉淀法利用天然藥物中游離酸性（或堿性）成分可與堿性（或酸性）試劑反應(yīng)生成鹽而溶于水，再加酸（或堿性）試劑，重新生成原來(lái)的游離酸性（或堿性）成分而從溶液中沉淀析出的性質(zhì)，濾過(guò)（或加有機(jī)溶劑萃?。┒c其他成分或雜質(zhì)分離的一種方法。（二）乙醇沉淀法在濃縮(nónɡsuō)后的水提液中，加入一定量的乙醇（使含醇量達(dá)80%以上），則難溶于高濃度乙醇的成分如蛋白質(zhì)、淀粉、樹(shù)膠等從溶液中析出，經(jīng)過(guò)濾即可除去。第三十三頁(yè)，共108頁(yè)。三、結(jié)晶法與重結(jié)晶法（一）基本概念第三十四頁(yè)，共108頁(yè)。結(jié)晶：由非晶形經(jīng)過(guò)結(jié)晶操作形成有晶形的過(guò)程。原理：根據(jù)混合物中各成分(chéngfèn)在某種溶劑中溶解度的差異。先加熱溶液，蒸發(fā)溶劑成飽和溶液，此時(shí)降低熱飽和溶液的溫度，溶解度隨溫度變化較大的溶質(zhì)就會(huì)呈晶體析出。關(guān)鍵---溶劑:被溶解成分(chéngfèn)的溶解度隨溫度不同有顯著差別；與成分(chéngfèn)不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)；沸點(diǎn)適中；常用溶劑：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯第三十五頁(yè)，共108頁(yè)。（二）操作過(guò)程1、選擇適宜的溶劑根據(jù)欲結(jié)晶成分的性質(zhì)及在溶劑中溶解度大小來(lái)選擇。2、制備飽和的結(jié)晶溶液（1）過(guò)飽和溶液的形成(xíngchéng)（2）晶核生成（3）晶體的生長(zhǎng)(1)冷卻(lěngquè)(2)溶劑(róngjì)蒸發(fā)第三十六頁(yè)，共108頁(yè)。①有大的表面積和足夠的吸附能力；第六十頁(yè)，共108頁(yè)。如：揮發(fā)油、小分子的香豆素類、小分子的醌類成分(chéngfèn)。4、回流(huíliú)提取法組分極性越大，Rf越小,反之越大。3、趁熱(chènrè)過(guò)濾當(dāng)兩相作相對(duì)移動(dòng)時(shí)，被測(cè)物質(zhì)(wùzhì)在兩相之間做反復(fù)多次的分配，這樣使原來(lái)微小的差異產(chǎn)生了很大的分離效果，達(dá)到分離、分析和測(cè)定一些理化常數(shù)的目的。水溶性雜質(zhì)多，過(guò)濾困難固定(gùdìng)相第五十一頁(yè)，共108頁(yè)。毛細(xì)管或點(diǎn)樣器不能混用，在層析紙上均勻噴灑顯色劑第四十九頁(yè)，共108頁(yè)。第五十六頁(yè)，共108頁(yè)。①非極性化合物，吸附弱。第四十七頁(yè)，共108頁(yè)。3、趁熱(chènrè)過(guò)濾第三十七頁(yè)，共108頁(yè)。第三十八頁(yè)，共108頁(yè)。（三）結(jié)晶溶劑的選擇（1）與被提純的有機(jī)化合物不起化學(xué)反應(yīng)。（2）對(duì)被提純的有機(jī)物應(yīng)具有熱溶，冷不溶（3）雜質(zhì)化合物的溶解性對(duì)溫度變化(biànhuà)不敏感（4）對(duì)要提純的有機(jī)物能在溶劑中形成較整齊的晶體。（5）溶劑的沸點(diǎn)，不宜太低（易損），也不宜太高（難除）。（6）價(jià)廉易得無(wú)毒。第三十九頁(yè)，共108頁(yè)。第四十頁(yè)，共108頁(yè)。四、鹽析(yánxī)法鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無(wú)機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分(chéngfèn)在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。鹽析用的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黃藤中提取掌葉防己堿，自三顆針中提取小檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸銨鹽析制備。有些成分(chéngfèn)如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在提取時(shí)，亦往往先在水提取液中加入一定量的食鹽，再用有機(jī)溶劑萃取。第四十一頁(yè)，共108頁(yè)。五、透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過(guò)半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過(guò)半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。例如分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時(shí)，可用透析法以除去無(wú)機(jī)鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì)。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過(guò)半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制。透析是否成功與透析膜的規(guī)格關(guān)系(guānxì)極大。第四十二頁(yè)，共108頁(yè)。第四十三頁(yè)，共108頁(yè)。六、升華法固體物質(zhì)受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì)，故可利用升華法直接自中草藥中提取出來(lái)。例如樟木中升華的樟腦（camphor），在《本草綱目》中已有詳細(xì)的記載，為世界上最早應(yīng)用升華法制取藥材有效成分的記述。又如茶葉中的咖啡因具有升華性，可將茶葉放在大小適宜的燒杯中，上面用圓底燒瓶盛水冷卻，然后加熱(jiārè)，到一定溫度（178℃），咖啡因可凝結(jié)于燒瓶底部，成白色針狀結(jié)晶。第四十四頁(yè)，共108頁(yè)。第四十五頁(yè)，共108頁(yè)。七、分餾法對(duì)沸點(diǎn)相近的混合物，在分餾柱內(nèi)反復(fù)進(jìn)行氣化、冷凝(lěngníng)、回流等程序而分離的一種方法。第四十六頁(yè)，共108頁(yè)。第三節(jié)色譜(sèpǔ)分離法第四十七頁(yè)，共108頁(yè)。

1906年，俄國(guó)植物學(xué)家Tswett目的：分離植物色素過(guò)程：將植物綠葉的石油醚提取液倒入玻璃管中，并用石油醚不斷淋洗，逐漸形成色帶，各色素成分被分離命名：分離方法為“色譜(sèpǔ)法”稱：玻璃管“色譜(sèpǔ)柱”稱：碳酸鈣“固定相”稱：石油醚“流動(dòng)相”石油醚第四十八頁(yè)，共108頁(yè)。植物色素(sèsù)分離圖示第四十九頁(yè)，共108頁(yè)。色譜分離法又稱層析分離法：即是利用混合物中各組分的物理化學(xué)性質(zhì)（分子的形狀和大小，分子的極性，吸附力，分子的親和力，分子的分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中(qízhōng)一相是固定的，稱固定相；另一相是流動(dòng)的，稱流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，而達(dá)到分離。第五十頁(yè)，共108頁(yè)。分類(fēnlèi)按流動(dòng)相分氣相色譜液相色譜超臨界流體色譜按機(jī)理分吸附色譜分配色譜離子交換色譜凝膠色譜第五十一頁(yè)，共108頁(yè)。分類吸附色譜——利用固定相中(xiānɡzhōnɡ)吸附劑表面對(duì)各組分不同的物理吸附能力(氣—固色譜）分配色譜——不同組分在兩相中(xiānɡzhōnɡ)有不同的分配系數(shù)(氣—液色譜)離子交換色譜——利用離子交換原理(離子色譜)凝膠色譜——利用多空性物質(zhì)對(duì)不同大小分子的排阻作用(液相色譜)第五十二頁(yè)，共108頁(yè)。一、吸附(xīfù)色譜法當(dāng)溶液中某組分的分子在運(yùn)動(dòng)中碰到一個(gè)固體表面時(shí)，分子會(huì)貼在固定(gùdìng)表面上，這就發(fā)生了吸附作用。第五十三頁(yè)，共108頁(yè)。1.分離原理各組分與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心,利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)(shíxiàn)分離.經(jīng)過(guò)吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分離.

第五十四頁(yè)，共108頁(yè)。2.固定(gùdìng)相及其選擇固定相是表面具有許多吸附中心的吸附劑，常用吸附劑硅膠表面的硅醇基為吸附中心。經(jīng)典液相柱色譜和薄層(báocénɡ)色譜使用一般硅膠。（1）對(duì)吸附劑的要求①有大的表面積和足夠的吸附能力；②對(duì)不同的化學(xué)成分有不同的吸附力，能較好地把混合物分開(kāi)；③與流動(dòng)相、溶劑及樣品(yàngpǐn)中各成分不起化學(xué)反應(yīng)；④在所用的溶劑及流動(dòng)相中不溶解；⑤顆粒均勻，操作過(guò)程中不會(huì)碎裂。第五十五頁(yè)，共108頁(yè)。（2）吸附劑的類別(lèibié)①有機(jī)類淀粉、葡萄糖、聚酰胺、纖維素等②無(wú)機(jī)(wújī)類氧化鋁、硅膠、活性炭、碳酸鈣、硅藻土等（3）吸附劑的活度因含水(hánshuǐ)使吸附劑活度，含水(hánshuǐ)量，活性(活度)級(jí)別，活性第五十六頁(yè)，共108頁(yè)。（4）吸附劑的選擇(xuǎnzé)a硅膠：為首選吸附劑。本身(běnshēn)具微酸性，適用于分離酸性及中性物質(zhì)，如有機(jī)酸、氨基酸、甾體等。b氧化鋁：氧化鋁具有分離能力強(qiáng)、活性可以控制等優(yōu)點(diǎn)。堿性氧化鋁pH9～10適于分析堿性、中性物質(zhì)中性氧化鋁pH7.5適于分析酸性堿性和中性物質(zhì)酸性氧化鋁pH4～5適于分析酸性、中性物質(zhì)C聚酰胺:氫鍵作用,氫鍵能力↑強(qiáng)，組分越后出柱分離極性小的物質(zhì)，一般(yībān)選用活性大些的吸附劑；反之，分離極性大的物質(zhì)，選用活性小的吸附劑。第五十七頁(yè)，共108頁(yè)。3.流動(dòng)(liúdòng)相及其選擇（1）要求①應(yīng)使用(shǐyòng)較純?cè)噭?，含雜質(zhì)會(huì)影響洗脫能力②與樣品或吸附劑不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)③能溶解樣品中各成分，且各被分離組分有不同的K值④粘度小，易流動(dòng)（2）流動(dòng)相流動(dòng)相的洗脫能力主要由其極性決定(juédìng)，極性強(qiáng)的流動(dòng)相分子占據(jù)極性中心的能力強(qiáng)，洗脫能力就強(qiáng)。流動(dòng)相的選擇要依據(jù)樣品的極性、吸附劑的活性而定。第五十八頁(yè)，共108頁(yè)。（3）常用(chánɡyònɡ)溶劑的極性石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮(bǐnɡtónɡ)<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水（4）流動(dòng)相的選擇用硅膠或氧化鋁作色譜分離時(shí)，如被測(cè)成分極性較大(jiàodà)，用活性較低的吸附劑，極性較大(jiàodà)的沖洗劑；被測(cè)成分極性較小，選用活性較強(qiáng)的吸附劑，極性較小的沖洗劑第五十九頁(yè)，共108頁(yè)。4.洗脫(xǐtuō)順序吸附弱的組分先被洗脫，吸附強(qiáng)的組分后被洗脫。吸附的強(qiáng)弱與組分的性質(zhì)(極性、取代基的類型和數(shù)目(shùmù)、構(gòu)型）有關(guān)。一般規(guī)律是：①非極性化合物，吸附弱。②基本母核相同，分子中取代基的極性越強(qiáng)，或極性基團(tuán)越多，分子極性越強(qiáng)(但要考慮其他因素的影響)，吸附能力越強(qiáng)。③分子中雙鍵數(shù)越多，則吸附力越強(qiáng)。④能形成分子內(nèi)氫鍵的化合物，其吸附能力降低。第六十頁(yè)，共108頁(yè)。常見(jiàn)化合物的吸附(xīfù)能力的順序如下：烷烴(-CH3、-CH2-)<烯烴(xītīng)(-CH=CH-)<醚類(-OCH3)<硝基化合物(-NO2)<二甲胺(-N(CH3)2)<酯類(-COOR)<酮類(>C=O)<醛類(-CHO)<硫醇(-SH)<胺類(-NH2)<酰胺(-NHCOCH3)<醇類(-OH)<酚類(Ar-OH)<羧酸類(-COOH)第六十一頁(yè)，共108頁(yè)。薄層(báocénɡ)色譜法

薄層色譜是在平面上進(jìn)行分離的一種方法，又叫平面色譜法。通常將固定相(吸附劑)均勻地涂鋪在表面潔凈的玻璃、塑料或金屬板形成(xíngchéng)薄層，制成薄板，進(jìn)行樣品分離。第六十二頁(yè)，共108頁(yè)。(一)吸附色譜分離原理利用吸附劑對(duì)不同(bùtónɡ)成分吸附力的大小及展開(kāi)劑解吸附作用的差異進(jìn)行分離。吸附牢的組分隨展開(kāi)劑移動(dòng)慢，吸附弱的組分隨展開(kāi)劑移動(dòng)快，一段時(shí)后，組分被分離。固定相:固體吸附劑流動(dòng)相:液體展開(kāi)劑一、基本原理第六十三頁(yè)，共108頁(yè)。溶劑

前沿起始線ABabc（1）比移值Rf：Rf是薄層色譜法基本定性參數(shù)(cānshù)，一定條件時(shí)Rf為定值，在0～1之間，可用范圍Rf值在0.2～0.8之間。組分極性越大，Rf越小,反之越大。（二）比移值與相對(duì)(xiāngduì)比移值第六十四頁(yè)，共108頁(yè)。硅膠、氧化鋁薄層：被分離物質(zhì)極性越大，越易被吸附。一般(yībān)規(guī)律：（1）官能團(tuán)極性越大，整個(gè)分子極性越大，越易被吸附；（2）形成分子內(nèi)H鍵時(shí)，被吸附力減弱；（3）同系物中，分子量越大，極性越小，被吸附力越弱。被分離物質(zhì)(wùzhì)極性與吸附能力的關(guān)系第六十五頁(yè)，共108頁(yè)。硅膠薄層(báocénɡ)色譜規(guī)律總結(jié)被分離組分展開(kāi)劑Rf被分離物洗脫順序極性大極性大小后洗脫極性小極性小大先洗脫第六十六頁(yè)，共108頁(yè)。（1）軟板的制備(zhìbèi)軟板：直接(zhíjiē)將吸附劑鋪在玻璃板上制成，不加粘合劑要求：厚度→隨分離要求而定，一般0.25～0.5mm玻璃棒推動(dòng)(tuīdòng)速度不宜過(guò)快、也不應(yīng)停頓→影響厚度均一性操作步驟第六十七頁(yè)，共108頁(yè)。2、點(diǎn)樣（1）樣品溶液(róngyè)的制備：

第六十八頁(yè)，共108頁(yè)。2、點(diǎn)樣（2）點(diǎn)樣量：與薄層板的關(guān)系(guānxì)太多太少的影響點(diǎn)樣基線：距底邊(dǐbiān)2.0cm樣點(diǎn)直徑：2-4mm點(diǎn)間距離：1.5-2.0cm第六十九頁(yè)，共108頁(yè)。2、點(diǎn)樣（3）點(diǎn)樣方法(fāngfǎ)：劃線、樣品記號(hào)點(diǎn)、點(diǎn)樣注：動(dòng)作要輕，毛細(xì)管或點(diǎn)樣器不能混用，斑點(diǎn)大小適當(dāng)，可多次點(diǎn)樣。平頭(píngtóu)50ul微量點(diǎn)樣器全自動(dòng)點(diǎn)樣儀第七十頁(yè)，共108頁(yè)。3、展開(kāi)(zhǎnkāi)展開(kāi)(zhǎnkāi)缸（色譜缸）第七十一頁(yè)，共108頁(yè)。3、展開(kāi)(zhǎnkāi)（1）展開(kāi)(zhǎnkāi)方式：a、近水平(shuǐpíng)展開(kāi)特點(diǎn)：速度快、適用于軟板的展開(kāi)。第七十二頁(yè)，共108頁(yè)。3、展開(kāi)(zhǎnkāi)（1）展開(kāi)(zhǎnkāi)方式：b、上行(shàngxíng)展開(kāi)過(guò)程：預(yù)飽和（濾紙貼于展開(kāi)槽內(nèi)側(cè)）、展開(kāi)、標(biāo)記溶劑前沿第七十三頁(yè)，共108頁(yè)。4、顯色(xiǎnsè)和定位一般規(guī)律：日光下觀察、紫外燈下觀察、加顯色劑加顯色劑：多噴霧，軟板使用(shǐyòng)浸漬顯色法紫外燈觀察(guānchá)噴顯色劑觀察第七十四頁(yè)，共108頁(yè)。判斷(pànduàn)依據(jù)：Rf值四、結(jié)果(jiēguǒ)計(jì)算和判斷第七十五頁(yè)，共108頁(yè)。二、分配(fēnpèi)色譜法1.分離原理：將液體均勻地涂漬在惰性物質(zhì)(載體)表面上作為固定相，利用(lìyòng)被分離組分在固定相與流動(dòng)相中的溶解度差別所造成的分配系數(shù)差別而被分離。第七十六頁(yè)，共108頁(yè)。2.固定(gùdìng)相和流動(dòng)相要求：固定相→機(jī)械(jīxiè)吸附在惰性載體上的液體,常用的固定液有水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等強(qiáng)極性溶劑載體→惰性物質(zhì)，無(wú)吸附性性質(zhì)穩(wěn)定，不與固定相和流動(dòng)相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)常用的有吸水硅膠、纖維素、多孔硅藻土等。流動(dòng)相→必須與固定(gùdìng)相不為互溶石油醚、醇類、酮類、酯類、鹵代烷及苯等。第七十七頁(yè)，共108頁(yè)。3.洗脫(xǐtuō)順序正相色譜固定相極性大于流動(dòng)相極性,主要分離極性樣品.極性弱的組分(zǔfèn)先被洗脫，極性強(qiáng)的組分(zǔfèn)后被洗脫。反相色譜固定相極性小于流動(dòng)相極性,主要(zhǔyào)分離非極性樣品和中等極性樣品.極性強(qiáng)的組分先出柱，極性弱的組分后出柱。第七十八頁(yè)，共108頁(yè)。定義：紙色譜分離法又稱紙層析法，是根據(jù)不同(bùtónɡ)物質(zhì)在兩相中的分配比不同(bùtónɡ)而進(jìn)行分離的一種微量分離方法。紙色譜法載體——層析(cénɡxī)紙（濾紙）；固定相——濾紙上的吸濕水分；流動(dòng)相——有機(jī)溶劑（展開(kāi)劑）。第七十九頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)步驟點(diǎn)樣展開(kāi)(zhǎnkāi)分離顯色(xiǎnsè)計(jì)算比移值第八十頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理分離(fēnlí)示意圖AB上行(shàngxíng)法第八十一頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理原點(diǎn)展開(kāi)后斑點(diǎn)溶劑前沿a1a2bAB第八十二頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理RF:通常用比移值RF衡量各組分的分離(fēnlí)程度：RF:0～1。RF值相差越大，分離(fēnlí)效果越好。第八十三頁(yè)，共108頁(yè)。RF：物質(zhì)定性分析的依據(jù)。在進(jìn)行分析工作時(shí)，可使用各組分相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品(yàngpǐn)同時(shí)作對(duì)照實(shí)驗(yàn)。影響因素：主要是展開(kāi)劑、濾紙質(zhì)量、溫度等實(shí)驗(yàn)條件。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)原理第八十四頁(yè)，共108頁(yè)。本實(shí)驗(yàn)分離和鑒定的氨基酸混合液：異亮氨酸、賴氨酸和谷氨酸。氨基酸是無(wú)色的，在層析后需在紙上噴灑(pēnsǎ)顯色劑茚三酮，斑點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)紫色。第八十五頁(yè)，共108頁(yè)。主要(zhǔyào)儀器：（1）玻璃層析筒150mm×300mm(φ×h)。（2）層析紙條100mm×240mm。（3）毛細(xì)管直徑1mm左右。（4）噴霧器儀器(yíqì)試劑第八十六頁(yè)，共108頁(yè)。主要試劑：（1）展開(kāi)劑正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。（2）氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液2g·L-1水溶液。（3）茚三酮1g·L-1乙醇溶液。（4）氨基酸混合試液將（2）配制(pèizhì)的三種氨基酸等量混合。儀器(yíqì)試劑第八十七頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)步驟點(diǎn)樣展開(kāi)(zhǎnkāi)分離顯色(xiǎnsè)計(jì)算比移值第八十八頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)步驟

——點(diǎn)樣2.0cm2.0cm1234異亮氨酸賴氨酸谷氨酸混合液各點(diǎn)φ≈2mm第八十九頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)步驟(bùzhòu)

——展開(kāi)分離展開(kāi)劑濾紙(lǜzhǐ)下端浸入展開(kāi)劑約0.5cm，計(jì)時(shí)。一段時(shí)間后，前沿上升15cm左右記下展開(kāi)停止時(shí)間第九十頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)步驟

——展開(kāi)分離取出層析紙，畫出溶劑前沿晾干(liànɡɡàn)或烘干展開(kāi)劑第九十一頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)(shíyàn)步驟

——顯色在層析紙上均勻噴灑顯色劑l00℃烘箱(hōngxiāng)中，烘3～5min第九十二頁(yè)，共108頁(yè)。實(shí)驗(yàn)步驟(bùzhòu)

——計(jì)算RF用鉛筆描出各斑點(diǎn)(bāndiǎn)的輪廓ba1a2a3第九十三頁(yè)，共108頁(yè)。（1）計(jì)算(jìsuàn)RF。（2）定性分析。數(shù)據(jù)處理第九十四頁(yè)，共108頁(yè)。三、聚酰胺吸附(xīfù)色譜法聚酰胺：固定(gùdìng)相流動(dòng)相第九十五頁(yè)，共108頁(yè)。（3）吸附(xīfù)規(guī)律：

[1]形成(xíngchéng)氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)[2]形成(xíngchéng)氫鍵基團(tuán)位置不同，被吸附的強(qiáng)度也不同[3]分子芳香核、共軛雙鍵越多，吸附越牢[4]化合物形成(xíngchéng)分子內(nèi)氫鍵，則被吸附的強(qiáng)度減小[5]與溶劑介質(zhì)有關(guān).形成(xíngchéng)氫鍵能力:水中最強(qiáng),堿中最弱第九十