2023學(xué)年完整公開課版革蘭氏染色

水處理微生物革蘭氏染色徐晨偉助教知識(shí)點(diǎn)主要內(nèi)容革蘭氏染色的原理革蘭氏染色操作步驟革蘭氏染色

細(xì)菌的染色原理細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通過染色增加其背景反差，易于觀察其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。細(xì)菌在通常培養(yǎng)情況下總是帶負(fù)電荷，故用帶正電的堿性染料染色。革蘭氏染色A簡單染色法：即用一種染液染色菌體，一般菌體被染上染料顏色。此法常用來觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列方式。B復(fù)合染色法：即用兩種染料染色，以區(qū)別細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)或抗酸性反應(yīng)，或?qū)⒕w和某一結(jié)構(gòu)染成不同顏色。常用的染色法革蘭氏染色

C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法根據(jù)此染色法，細(xì)菌可分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色革蘭氏染色

革蘭氏染色步驟1、用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進(jìn)行初染2、用碘溶液進(jìn)行媒染，其作用是提高染料和細(xì)胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。3、用乙醇或丙酮沖洗進(jìn)行脫色。在經(jīng)歷脫色后仍將結(jié)晶紫保留在細(xì)胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細(xì)菌，而革蘭氏陰性細(xì)菌的結(jié)晶紫被洗掉，細(xì)胞呈無色。4、用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對涂片進(jìn)行復(fù)染。例如蕃紅，它使原來無色的革蘭氏陰性細(xì)菌最后呈現(xiàn)紅色，而革蘭氏陽

性細(xì)菌繼續(xù)保持深紫色革蘭氏染色革蘭氏染色陽性菌陰性菌菌體顏色變化革蘭氏染色（1）與等電點(diǎn)有關(guān)：

革蘭氏陽性菌pH2～3，陰性菌pH4～5，加碘液媒染，等電點(diǎn)降低，陽性菌降低的更低，與結(jié)晶紫結(jié)合得更牢固；陰性菌結(jié)合力弱，易被乙醇脫色。革蘭氏染色機(jī)制：革蘭氏染色（2）與細(xì)胞壁有關(guān)：革蘭氏染色機(jī)制：肽聚糖磷壁酸多糖孔蛋白質(zhì)脂質(zhì)磷壁酸

外膜

肽聚糖革蘭氏陽性菌革蘭氏陰性菌革蘭氏染色特征強(qiáng)度厚度肽聚糖層數(shù)肽聚糖含量磷壁酸脂多糖脂肪蛋白質(zhì)G–疏松薄，5～10nm少，1～3層少（10～20％）－＋含量較高含量較高G+堅(jiān)韌厚，20～80nm多，多達(dá)50層高（50～90％）＋－一般無無革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌細(xì)胞壁構(gòu)造的比較革蘭氏染色（2）與細(xì)胞壁有關(guān)：一般認(rèn)為在革蘭染色的過程中，細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成了一種不溶性的深紫色的結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物，這種復(fù)合物可被乙醇從G-菌中浸出，但不易從G+菌中浸出。這是由于G+菌細(xì)胞壁較厚，肽聚糖含量較高，網(wǎng)格結(jié)構(gòu)緊密，含脂量又低，當(dāng)用乙醇脫色時(shí)，肽聚糖網(wǎng)孔由于縮水會(huì)明顯收縮，從而使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，故菌體呈深紫色。而G-細(xì)胞壁薄，肽聚糖含量低，且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)疏松，故遇乙醇后，其網(wǎng)孔不易收縮，加上G-菌的脂類含量高，當(dāng)用乙醇脫色時(shí)，脂類物質(zhì)