多克隆抗體的制備

抗血清的制備抗血清/免疫血清/PcAb

多個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對抗原多種表位的混合抗體，用免疫動物的方法獲得。概念抗血清制備示意圖多價抗原多個B細(xì)胞克?。ㄖ旅舻腂細(xì)胞）PcAb免疫家兔抗血清制備三階段：免疫原的制備→動物免疫→血清分離、純化和鑒定一、用于免疫的動物種類：家兔、豚鼠、綿羊、馬、雞、山羊等。（一）動物種系與個體（1）Ag與免疫動物種系差異越大，效果越好；（2）動物個體適齡（體重符合要求）、健壯、無感染性疾病（宜雄性）；（3）選用多只條件相同的動物同時進行免疫。（二）抗原的性質(zhì)（1）蛋白質(zhì)→家兔、山羊（余多數(shù)也適合）（2）類固醇激素→家兔（3）酶類→豚鼠適宜（1）IgE→綿羊（2）多種酶→山羊（3）胰島素→家兔不適宜（三）抗血清的要求（1）R型（兔型）→等價帶寬→診斷試劑（2）H型（馬型）→等價帶窄→治療試劑（3）抗體數(shù)量需求多→大動物二、免疫劑量、途徑和時間一定范圍內(nèi)，免疫原的劑量越大，產(chǎn)生抗體效價越高。劑量皮內(nèi)、皮下（多點注射）、肌肉、靜脈、腹腔、脾臟、淋巴結(jié)。途徑首次與第二次一般間隔7-20d（最重要），以后的加強免疫每次間隔7-10d，總免疫次數(shù)為5-8次。時間三、動物采血法動物免疫3～5次后，可取少量血清檢測抗體效價與特異性，測試合格后，應(yīng)在末次免疫后5～7d及時采血分離血清。采血前動物禁食24h。方法：頸動脈放血、心臟采血、靜脈采血等。采血多，用于家兔（50-100mL）、綿羊、山羊等，避免放血速度過快。勁動脈放血用于家兔（20-30mL）、豚鼠和大鼠等步驟：固定→定位→去毛→定位→消毒→采血此法易致動物死亡心臟采血可多次采血（家兔→耳中央靜脈；綿羊、山羊→頸靜脈）靜脈采血小鼠眼底靜脈叢取血、摘除眼球、斷頭、斷尾。其他四、抗血清的鑒定和保存鑒定內(nèi)容：效價、特異性、純度及親和力。保存：抗血清除菌，小份包裝保存。①4℃保存，存3～6個月，加防腐劑。②低溫保存，－20℃～－40℃，在3～5年。③真空冰凍干燥，水分＜0.2％，5-10年。效價鑒定方法：放射免疫法/凝集反應(yīng)/雙擴（舉例）等。Ab1:21:41:81:161:321:64Ag可出現(xiàn)沉淀線的血清最高稀釋度——抗體效價特異性鑒定方法：雙擴（舉例）。粗AgAb（1）無沉淀線：免疫失?。?）1條沉淀線：單價特異性Ab（3）左邊（多條線）+右邊（1條線）：免疫成功但有雜Ab純AgAb純度鑒定方法：區(qū)帶電泳、雙擴。五、抗血清中抗體的純化（1）單價特異性Ab提?。河H和色譜法、吸附法單價特異性：抗血清只與其特異性Ag發(fā)生反應(yīng)如免疫Ag有7種（6種雜質(zhì)Ag）：Ag1、Ag2、Ag3....Ag7免疫后產(chǎn)生7種抗體：Ab1、Ab2、Ab3....Ab7現(xiàn)需分離出Ab1，怎樣分離？親和色譜提取Ab1進樣口凝膠出樣口Ag2Ag3Ag4Ag5Ag6Ag7Ab1什么時候獲得？

待分離Ab混合物吸附法提取Ab1磁珠Ag2Ag3Ag