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文檔簡介

病理檢驗技術(shù)

免疫組化技術(shù)免疫熒光組織化學技術(shù)熒光顯微鏡免疫熒光組織化學技術(shù)

熒光顯微鏡

免疫熒光染色后,染色結(jié)果需要通過熒光顯微鏡觀察來進行病理診斷。熒光顯微鏡是免疫熒光技術(shù)中重要的工具,光源給出特定波長的激發(fā)光激發(fā)標本發(fā)出熒光,通過物鏡和目鏡觀察組織細胞中的熒光圖像。激發(fā)濾片是熒光顯微鏡的重要部件,不同的激發(fā)濾片可讓不同范圍波長的激發(fā)光通過,所以選擇不同的激發(fā)濾片可獲得一定波長范圍的激發(fā)光。

免疫熒光組織化學技術(shù)

熒光顯微鏡

因此,需要根據(jù)抗體所標記的熒光素來選擇合適的激發(fā)濾片,以獲得合適的激發(fā)光。顯微鏡的分辨率與光源波長的長短成反比,熒光顯微鏡光源為紫外光的波長比可見光短,所以比普通光學顯微鏡分辨率高。

一、激發(fā)濾片的選擇熒光顯微鏡

一般的熒光顯微鏡配有紫外、藍色、綠色和紫色激發(fā)熒光濾光片組。激發(fā)濾片也有厚、薄兩種,厚激發(fā)濾片可使熒光顯微鏡觀察視場為暗視場,薄激發(fā)濾片為較明亮視場。激發(fā)濾片的選擇要使熒光明亮而背景適中,背景太亮,會影響熒光的觀察；背景太暗,則看不到組織細胞結(jié)構(gòu)。一、激發(fā)濾片的選擇熒光顯微鏡

1.UV激發(fā)濾片通過的激發(fā)光波波長為330~400nm。2.V激發(fā)濾片通過的激發(fā)光波波長為395~415nm。3.B激發(fā)濾片通過的激發(fā)光波波長為420~485nm,主要用于FICT熒光素標本的觀察。一、激發(fā)濾片的選擇熒光顯微鏡

4.G激發(fā)濾片通過的激發(fā)光波波長為460~550nm,主要用于TRICT熒光素標本的觀察。由于FITC和TRITC為最常用的抗體標記熒光素,所以,一些牌子的顯微鏡專門生產(chǎn)配套有FITC專用激發(fā)濾板如KP490濾板和TRITO專用激發(fā)濾板如S546濾板。二、熒光顯微鏡的使用1.要提前打開熒光顯微鏡電源,超壓汞燈開啟15分鐘后光源穩(wěn)定,適合觀察。開啟光源后每次使用不超過2小時,超過2小時光亮強度逐漸下降,觀察到的熒光也會變?nèi)酢ｊP(guān)閉光源后需要等燈泡冷卻后才能再次開啟,否則影響燈泡壽命。熒光顯微鏡二、熒光顯微鏡的使用2.熒光顯微鏡應安裝紫外光擋板或在觀察時戴上防護眼鏡,防止紫外光損害眼睛。3.用高倍油鏡觀察時,應選用無熒光鏡

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