細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)

病理檢驗(yàn)技術(shù)

細(xì)胞病理學(xué)基本檢驗(yàn)一、細(xì)胞病理學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)概述（一）常用細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的采集、制片標(biāo)本采集原則1.采集標(biāo)本必須保持新鮮,以免細(xì)胞自溶,影響細(xì)胞著色和正確診斷。2..采集方法應(yīng)簡便,以減輕患者痛苦,且不至于引起嚴(yán)重的“并發(fā)癥”或促使腫瘤擴(kuò)散。3.正確選擇取材部位,盡可能由病區(qū)直接采取細(xì)胞并獲取豐富有效的細(xì)胞成分。4.絕對避免錯號和污染。5.針吸穿刺操作時有兩人配合完成采集標(biāo)本較好,并了解病情和影像學(xué)資料,選擇恰當(dāng)?shù)捏w位及穿刺點(diǎn)。制片方法1.推片法

適用于稀薄的液體標(biāo)本,如血液、尿液和漿膜腔積液等。離心后取沉淀物置玻片一端,用推片作30°夾角輕輕推制而成。

2.涂抹法適用于較黏稠的標(biāo)本,如痰液標(biāo)本等。用竹簽挑取標(biāo)本在玻片上以順時針方向轉(zhuǎn)圈涂抹,涂抹要均勻,不能重復(fù)。

3.噴射法

適用于各種吸取的標(biāo)本。使用配備細(xì)針頭的注射器將標(biāo)本反復(fù)均勻地從左到右噴射在玻片上。4.印片法

是活體組織檢查的輔助方法。將切取的病變組織塊用手術(shù)刀切開,立即將切面平放在玻片上,輕輕按印即可。

5.液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)

適用于婦科標(biāo)本和非婦科標(biāo)本,是一種自動標(biāo)本處理新技術(shù),是將刷取或灌洗法采集的標(biāo)本,放在特殊的運(yùn)送液或保存液中,刮片毛刷在小瓶內(nèi)攪拌數(shù)十秒鐘,再通過高精密度過濾膜過濾后,將標(biāo)本中的雜質(zhì)分離,取濾后的上皮細(xì)胞制成直徑為20mm薄層細(xì)胞于載玻片上。機(jī)器自動完成涂片固定、染色步驟。（二）常規(guī)細(xì)胞學(xué)染色方法細(xì)胞學(xué)染色方法有多種,主要有常規(guī)染色、特殊染色(或稱細(xì)胞化學(xué)染色)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色?？筛鶕?jù)不同的檢驗(yàn)要求和研究目的加以選擇應(yīng)用;特殊染色和免疫組織化學(xué)染色方法。常規(guī)染色法有巴氏(Papanicolaou)法、HE法和邁格林華吉姆薩染色(MGG染色)法等。巴氏染色起初僅用于陰道上皮雌激素水平的測定以及檢測生殖道念珠菌、滴蟲等病原體的感染。染色方法經(jīng)過不斷改良后,胞質(zhì)染色液分別有EA36、EA50和EA65。目前主要用于婦科細(xì)胞學(xué)涂片染色,多采用EA36和EA50染色液,是用來篩查宮頸癌及癌前病變的常用細(xì)胞學(xué)染色方法。巴氏染色也適合胸、腹水、痰液等非婦科標(biāo)本的染色,常采用EA65染色液。染色操作流程(1)涂片用95%的乙醇-冰醋酸固定液固定10~15分鐘。(2)95%的乙醇、80%的乙醇、70%的乙醇、蒸餾水分別浸泡1分鐘。(3)改良Lillie-Mayer蘇木精染液染色5~10分鐘。(4)自來水中沖洗多余染液。(5)1%的鹽酸乙醇液分化約4秒。(6)1%的碳酸鋰水溶液藍(lán)化1分鐘,自來水洗5分鐘。(7)依次置入70%的乙醇、80%的乙醇、95%的乙醇(1)和95%的乙醇(Ⅱ)各1分鐘。(8)橘黃G液染色1-2分鐘(此步可省略)。(9)依次在95%的乙醇(I)、95%的乙醇(Ⅱ)漂洗去掉多余橘黃G染液。(10)EA36染液染色3~5分鐘。(11)依次用95%的乙醇(1)、95%的乙醇(Ⅱ)、無水乙醇(1)和無水乙醇(Ⅱ)脫水各1分鐘。(12)二甲苯透明,中性樹脂封片。結(jié)果

角化細(xì)胞胞質(zhì)呈粉紅色,全角化細(xì)胞胞質(zhì)呈橘黃色,角化前細(xì)胞胞質(zhì)呈淺藍(lán)色或淺綠色,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,核仁呈橘紅色,白細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞質(zhì)呈淡藍(lán)淡綠,紅細(xì)胞呈橙紅色。蘇木精-伊紅(HE)染色方法染色操作(1)涂片從95%的乙醇-冰醋酸固定液內(nèi)取出,80%的乙醇浸泡1分鐘。(2)蒸餾水洗1分鐘。(3)改良Lillie.-Mayer蘇木精染液染色5~10分鐘。(4)自來水沖洗1分鐘。(5)0.5%的鹽酸乙醇液分化3-5秒。(6)自來水沖洗促藍(lán)10分鐘中,80%的乙醇浸洗1分鐘。(7)0.5%的伊紅Y乙醇液染色1分鐘。(8)80%6的乙浸洗1分鐘。(9)依次用95%的乙醇(1)、95%的乙醇(Ⅱ)、100%的乙醇(I)和100%的乙醇(Ⅱ)脫水各1分鐘。(10)二甲苯透明,中性樹膠封片。染色結(jié)果胞質(zhì)呈淡紅色,胞核呈紫藍(lán)色,核仁呈紅色。邁格林華-吉姆薩染色(MGG染色)法染色操作(1)涂片固定后蒸餾水洗2ml。(2)邁格林華染液滴染15分鐘。(3)倒棄涂片上的染液,用自來水沖洗干凈。(4)吉姆薩染液滴染15分鐘。(5)倒棄涂片上的染液,用自來水沖洗干凈。(6)甩干水分,鏡檢。必要時干燥后用中性樹膠封片。染色結(jié)果細(xì)胞核呈紫紅色,細(xì)胞質(zhì)和核仁呈深淺不同的藍(lán)色。（三）細(xì)胞病理學(xué)檢查的質(zhì)量控制1.標(biāo)本采集

標(biāo)本采集是脫落細(xì)胞學(xué)診斷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。所采集的細(xì)胞能否代表病變組織或器官的細(xì)胞群體,是脫落細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果準(zhǔn)確和可靠的前提。滿意的標(biāo)本要具有足夠數(shù)量的有效細(xì)胞成分。如痰涂片內(nèi),須有一定數(shù)量的肺泡吞噬細(xì)胞,如塵細(xì)胞,才能說明是來自肺深部的痰。胸腹水的涂片內(nèi)應(yīng)有特征性的間皮細(xì)胞。2.涂片制作

包括涂片、固定、染色等幾個環(huán)節(jié)。滿意的涂片應(yīng)厚薄適宣,細(xì)胞分布均勻、染色后細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰。標(biāo)本制好后應(yīng)立即固定,否則易造成誤診。3.閱片診斷

根據(jù)閱片原則仔細(xì)閱片。所有患者細(xì)胞學(xué)診斷應(yīng)與手術(shù)、活檢和臨床表現(xiàn)相符合,診斷時需要加強(qiáng)與臨床的溝通聯(lián)系。對惡性腫瘤細(xì)胞分型診斷,常規(guī)染色很難判斷時,要運(yùn)用新的檢驗(yàn)技術(shù)如流式細(xì)胞儀、兔疫細(xì)胞化學(xué)、原位雜交等獲取新的信息。4.繼續(xù)教育

鼓勵技術(shù)人員經(jīng)常參加細(xì)胞學(xué)繼續(xù)教育項(xiàng)目,熟練掌握細(xì)胞學(xué)理論知識使其具有扎實(shí)的病理學(xué)基礎(chǔ),才能對千變?nèi)f化的脫落細(xì)胞形態(tài)作出正確的判斷。5.復(fù)查會診

對涂片進(jìn)行復(fù)查或會診是脫落細(xì)胞學(xué)診斷質(zhì)量控制的一個重要措施。復(fù)查會診的情況有:①涂片內(nèi)僅有少量異常細(xì)胞,很難作出結(jié)論性判斷的病例。②標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞變性或壞死嚴(yán)重,難以肯定診斷或分型的病例。③細(xì)胞學(xué)診斷與臨床診斷明顯不符的病例。④涂片取材不適當(dāng)或制片技術(shù)不佳。6.定期隨訪

對細(xì)胞學(xué)診斷陽性或出現(xiàn)異常細(xì)胞的病例,均要進(jìn)行定期隨訪觀察。7.診斷原則

在沒有充分的證據(jù)時,不要輕易下陽性的肯定診斷,可報告為可疑、高度可疑或建議重新取材檢查等。二、脫落細(xì)胞學(xué)檢查基本知識（一）基本概念脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)是采集人體各部位管腔器官表面的細(xì)胞,經(jīng)染色后在顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài),并作出細(xì)胞學(xué)診斷的一門臨床檢驗(yàn)學(xué)科又稱診斷細(xì)胞學(xué)或臨床細(xì)胞學(xué)。脫落細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)是基于光學(xué)顯微鏡的診斷,在作出正確的診斷前,不僅應(yīng)掌握脫落細(xì)胞學(xué)的正常形態(tài)、良性病變以及惡性病變時細(xì)胞學(xué)的基本知識,而且應(yīng)掌握標(biāo)本的涂片制作、固定及染色等基本技術(shù),這是脫落細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果準(zhǔn)確與否的關(guān)鍵。（二）正常脫落上皮細(xì)胞形態(tài)根據(jù)功能主要分為4種：鱗狀上皮細(xì)胞(

squamous

epithelium

cell)柱狀上皮細(xì)胞(

columnar

epithelia

cell)移行上皮細(xì)胞(

transitional

epithelia

cel)間皮細(xì)胞(

mesothelial

cel)復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞：由底層到表層分為：基底層、中層、表層1基底層細(xì)胞：（1）內(nèi)底層細(xì)胞：單層立方或柱狀，很少脫落。（2）外底層細(xì)胞：2～3層2中層細(xì)胞3表層細(xì)胞（1）角化前細(xì)胞（2）不全角化細(xì)胞（3）完全角化細(xì)胞柱狀上皮細(xì)胞：類型：單層柱狀上皮、假復(fù)層纖毛柱狀上皮、復(fù)層柱狀上皮主要分布于鼻腔、鼻咽、氣管,肺、胃、腸道、子宮頸管、子宮內(nèi)膜及卵巢等部位。涂片中常見：

1纖毛柱狀上皮細(xì)胞

2黏液柱狀上皮細(xì)胞

3儲備細(xì)胞移行上皮細(xì)胞主要分布在腎盂、輸尿管、膀胱等處,是介于復(fù)層鱗狀上皮和假復(fù)層柱狀之間的一種特殊類型細(xì)胞,其細(xì)胞形態(tài)可隨器官的充盈狀態(tài)而發(fā)生變化,所以也稱變形細(xì)胞。當(dāng)器官充盈時,細(xì)胞膜展開拉平,細(xì)胞變薄,體積增大。當(dāng)呈收縮狀態(tài)時,細(xì)胞層次多,可達(dá)6~7層,細(xì)胞變厚,體積變小?？煞譃榛讓?、中間層和表層。間皮細(xì)胞是附著于胸腔、心包腔和腹腔表面的單層上皮細(xì)胞,是一種起源于中胚層的特殊上皮。根據(jù)成熟程度及脫落時間長短分為幼稚型(嗜堿性)間皮細(xì)胞、成熟型(嗜酸性)間皮細(xì)胞以及退化變性型間皮細(xì)胞。（三）良性病變的上皮細(xì)胞形態(tài)1.細(xì)胞變性：是指細(xì)胞內(nèi)或間質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)某些異常物質(zhì)或原有物質(zhì)沉積過多,如細(xì)胞水腫、空泡變性、脂肪變性等,是可逆性病變,一旦病因去除,即可恢復(fù)。2.細(xì)胞死亡：是一種不可避免的結(jié)果，程序性死亡稱為凋亡，發(fā)生于某種特定疾病的死亡稱為壞死。3.增生一般指慢性炎癥或理化因素刺激所引起基底層細(xì)胞分裂增殖能力加強(qiáng),數(shù)量增加,常伴有體積增大。＊共同特點(diǎn)：胞漿嗜堿性、胞漿相對減少，核漿比略大、核增大可見核仁，核染色質(zhì)細(xì)顆粒狀。核分裂活躍，可見雙核或多核4.再生上皮細(xì)胞在慢性炎癥或其他理化因素刺激所致局部細(xì)胞損傷和死亡,最終由鄰近組織的同類細(xì)胞增殖補(bǔ)充的過程稱為再生。再生細(xì)胞核大染色深，染色質(zhì)結(jié)塊及有絲分裂，核仁大、多，漿略嗜堿性，見雙核多核，常見炎細(xì)胞。5.化生：是指一種成熟的上皮組織在某些因素的作用下,被另一類型的成熟上皮組織所取代的過程。通常是柱狀上皮被鱗狀上皮取代,這種過程叫鱗狀上皮化生簡稱鱗化。常見于炎癥、機(jī)械創(chuàng)傷等損傷或慢性刺激的過程。6.異常角化又稱角化不良、不成熟角化、細(xì)胞內(nèi)角化。是指鱗狀上皮細(xì)胞的核與胞質(zhì)發(fā)育失去平衡，胞質(zhì)分化超過核的分化程度，呈現(xiàn)核分化正常而胞質(zhì)顯示過度成熟的現(xiàn)象。若表層角化前細(xì)胞的胞質(zhì)紅染稱為假角化；若中、底層細(xì)胞的胞質(zhì)紅染則稱為早熟角化。7.上皮細(xì)胞不典型增生又稱核異質(zhì)細(xì)胞,是指上皮細(xì)胞的核異常。該細(xì)胞為處于癌細(xì)胞與正常細(xì)胞間的異常細(xì)胞,屬于癌前病變。表現(xiàn)為:核增大、形態(tài)異常、染色質(zhì)增多、分布不均、核膜增厚、核染色較深,細(xì)胞質(zhì)尚正常。根據(jù)核異質(zhì)細(xì)胞形態(tài)改變程度,可分為輕度核異質(zhì)、中度核異質(zhì)和重度核異質(zhì)。8.各種炎癥時的細(xì)胞形態(tài)炎癥是組織對損傷的一種常見反應(yīng)，根據(jù)時間不同分為急性、亞急性和慢性。在胞學(xué)涂片上,上皮細(xì)胞以變性、壞死為主,可見中性粒細(xì)細(xì)胞增多,出現(xiàn)細(xì)胞碎片、無結(jié)構(gòu)的呈網(wǎng)狀或團(tuán)塊狀的纖維蛋白、紅細(xì)胞和白細(xì)胞等壞死物質(zhì),伴少量淋巴細(xì)胞。炎癥按照病程可分為急性、亞急性、慢性三種類型。（四）腫瘤細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)惡性腫瘤細(xì)胞的一般形態(tài)特點(diǎn)在細(xì)胞學(xué)涂片上,根據(jù)細(xì)胞的大小、形態(tài)、細(xì)胞群的分布、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核等特征來識別腫瘤細(xì)胞的起源和類型。一般來說,確定惡性腫瘤細(xì)胞主要是根據(jù)細(xì)胞核的改變:要區(qū)分腫瘤類型則要考慮細(xì)胞質(zhì)的改變和細(xì)胞群的變化。

1．細(xì)胞大小癌細(xì)胞與相同起源的正常細(xì)胞大小不同。癌細(xì)胞大小變化多超出生理性范圍，體積大者超過多核巨細(xì)胞，小者極小。在一個癌細(xì)胞群體中，大小不一很常見。在空氣干燥固定涂片中，癌細(xì)胞大小不一更明顯。但是，在缺乏細(xì)胞核異常的情況下，不能僅憑細(xì)胞大小就診斷為癌。

癌細(xì)胞大小不一（大細(xì)胞肺腺癌，細(xì)針吸取涂片）

2．細(xì)胞形態(tài)惡性細(xì)胞形態(tài)異常不常見，特別是進(jìn)展期腫瘤，多數(shù)與正常細(xì)胞形態(tài)類似。有時，惡性細(xì)胞形態(tài)呈各種畸形怪狀。但是，良性腫瘤也可見畸形細(xì)胞，特別是增生的結(jié)締組織或上皮組織。在診斷前，必須考慮細(xì)胞核特征。

3．細(xì)胞黏附性黏附性差是癌細(xì)胞主要形態(tài)學(xué)特征之一。在細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)涂片上，癌細(xì)胞多單個散在或疏松聚集，而良性腫瘤細(xì)胞多緊密排列，呈有序的聚集，且細(xì)胞邊界清晰。分化差的惡性細(xì)胞比分化好的惡性細(xì)胞的黏附性差。故惡性淋巴瘤和肉瘤細(xì)胞傾向于單個散在，罕見成堆。

癌細(xì)胞排列疏松（疏松聚集的肺腺癌細(xì)胞）

4．細(xì)胞核核異常是癌細(xì)胞主要形態(tài)學(xué)特征之一。主要變化有：①細(xì)胞核增大，特別是核質(zhì)比增大。②細(xì)胞核的形態(tài)和輪廓不規(guī)則。③染色過深、染色質(zhì)呈粗顆粒狀。④女性出現(xiàn)異常的性染色質(zhì)小體。⑤核膜異常。⑥核仁異常。⑦有絲分裂異常。⑧其他變化。

有2個性染色體的乳腺癌細(xì)胞

惡性腫瘤細(xì)胞與核異質(zhì)細(xì)胞的鑒別細(xì)胞結(jié)構(gòu)惡性核異質(zhì)核大小不一畸形明顯輕～中度核膜明顯增厚不均輕度增厚染色質(zhì)結(jié)塊或粗顆粒，其間有透明間隙有時呈墨水滴狀多呈細(xì)顆粒狀，少數(shù)結(jié)塊，無墨水滴狀核仁大而多1～2個，輕度