2023學(xué)年完整公開課版菌種生產(chǎn)

《園藝技術(shù)》資源庫子項目-《食用菌生產(chǎn)》菌種生產(chǎn)濰坊職業(yè)學(xué)院-張瑞華副教授菌種類型菌種培養(yǎng)基配制菌種接種菌種培養(yǎng)菌種質(zhì)量鑒定菌種保藏菌種復(fù)壯菌種類型菌種概念菌種擔(dān)孢子或子囊孢子野生擴大繁殖后的純次生菌絲體栽培來歷野生菌馴化

原菌株改良

生物技術(shù)創(chuàng)新優(yōu)良

菌株擴大

繁殖用于

生產(chǎn)實行純培養(yǎng)

不含任何雜菌基本

要求菌種類型一級菌種二級菌種

三級菌種級別按保藏用種實驗用種

生產(chǎn)用種目的狀態(tài)：固體菌種、液體菌種級別不同的菌種1.一級種（母種）用分離法首次得到的

純次生菌絲體概念概況培養(yǎng)環(huán)境試管、斜面培養(yǎng)基用途再生母種擴大原種

保藏用種菌絲弱而少、不可直接栽培特點2.二級種（原種）將母種擴大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲較多而壯、適應(yīng)性較強特點用途擴大栽培種大口瓶、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基3.三級種（栽培種）將原種擴大至粗放培養(yǎng)基上

形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲多而壯、適應(yīng)性強特點用途栽培生產(chǎn)菌種袋、較粗放的

液體或固體培養(yǎng)基不可再擴狀態(tài)不同的菌種

用固體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種1.固體

菌種概念特點設(shè)備、工藝簡單

菌齡長而不一

發(fā)酵率較低用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種2.液體

菌種概念特點設(shè)備、工藝較復(fù)雜

菌齡短而一致

發(fā)酵率高

易老化和自溶菌種生產(chǎn)程序四大步驟接種培養(yǎng)滅菌制培養(yǎng)基菌種培養(yǎng)基配制一、培養(yǎng)基的概述（一）概念及要求概念人工配制的適于菌種生長的營養(yǎng)基質(zhì)要

求營養(yǎng)種類、比例、水分、pH適宜；

保持無菌狀態(tài)。類

型天然：天然有機物

合成：已知成分的化學(xué)藥品

半合成：？原料

來源狀態(tài)液體：營養(yǎng)液固體固體：天然固體原料

固化：加1.5%~2%瓊脂表面形狀斜面培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基的類型粉狀條狀屬天然植物多糖

融點96℃以上

凝點40℃以下

冷水中不溶

透明度好、粘著力強

不被微生物分解利用特性12345二、各級菌種的培養(yǎng)基（一）母種培養(yǎng)基1.通用配方2.配制過程PDA馬鈴薯200g、葡萄糖20g

瓊脂15~20g、水1000m1煮沸20min，取定量濾液制馬鈴

薯濾液濾液沸時加入，融后加余料融化瓊脂調(diào)解pH勿污管口，控制裝量分裝試管準(zhǔn)備滅菌扎捆10%NaOH或HCL（二）原種、栽培種培養(yǎng)基主料棉籽殼87，麥麩10輔料白糖1，石灰1，過磷酸鈣1配方（%）棉殼、麥麩干混

余料溶于水后澆入主料

清水翻拌至含水量配制1.種類

(1)棉籽殼培養(yǎng)基主料麥粒、玉米粒等98.5%輔料石膏粉1%,碳酸鈣0.5%調(diào)pH

與分裝pH：一般為8.0左右

原種培養(yǎng)基裝大口瓶

栽培種培養(yǎng)基裝菌種袋外緊內(nèi)松，上緊下松配方（%）顆粒洗凈，1%石灰水泡脹

文火煮沸15~20min

晾至無明水后拌入余料配制(2)顆粒培養(yǎng)基三、培養(yǎng)基的滅菌（一）母種培養(yǎng)基的滅菌

無菌檢驗

約30℃條件下→空白培養(yǎng)2~3天滅菌與擺斜面擺斜面1kg/cm2(103kpa、121℃）20~30min（二）原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌高壓滅菌1.5kg/cm2（152kpa、128.1℃）滅菌1~2h

7常壓滅菌100℃滅菌10h左右→再悶12h要求攻頭、控中、保尾菌種接種概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過程

關(guān)鍵：無菌操作接種在嚴(yán)格消毒滅菌條件下進行的操作概念一、無菌操作接種環(huán)境消毒滅菌酒精棉球消毒雙手開啟的管口、瓶口靠近燈焰拔出的棉塞勿觸及任何地方動作快，接種時間勿太長要點必備1特點簡便，易成功保持原菌種性狀重復(fù)多易退化不適于耳類1.組織分離組織PDA次生菌絲培養(yǎng)（一）分離法步驟步驟選種菇外觀典型、大小適中、無病蟲害、

八成熟、第1~2茬的子實體取接組織縱剖（撕）菇體

尖頭鑷取柄蓋交界處綠豆粒大的組織

放入新斜面中部種菇消毒用燃燒的酒精棉球迅速擦拭組織分離其他方法膠質(zhì)菌類組織分離法菌核組織分離法生長點分離法組織分離注意問題種菇或種耳過濕，不能馬上進行組織分離，否則易染雜菌?？蓪⑵渲糜诩埓鼉?nèi)，放置于5度冰箱內(nèi)1~2天，待菇體含水量減少時，再進行分離。但此法不適于草菇。2.孢子分離(有性繁殖）孢子

特點菌齡小

生命力強

變異率高孢子

分離法難度較大單孢分離多孢分離較簡易單孢分離

的菌落多孢分離概念使許多孢子在同一培養(yǎng)基上，

萌發(fā)后自由交配成次生菌絲的方法步驟種菇消毒采收孢子接種孢子整菇插種法貼褶法

鉤懸法

孢子印法1.種菇

消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新潔爾滅浸2~3min

無菌紗布吸干表面水分

無2.采收孢子整菇

插種法種菇插在孢子收集器中

使孢子散落于培養(yǎng)皿內(nèi)的方法用

前

滅

菌25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料

培養(yǎng)皿蓋嚴(yán)78貼褶法現(xiàn)孢子印后取出菌褶片。鉤懸法25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料10孢子印法三、原種、栽培種的接種接原種用接種耙取蠶豆大母種

放于瓶中料面上菌種培養(yǎng)培養(yǎng)條件場所清潔空氣清新光線暗空氣濕度60%-70%溫度約25度技術(shù)環(huán)節(jié)1.母種

培養(yǎng)及時挑揀污染管分離的母種要純化→出菇試驗→使用控制菌齡（即將長滿斜面）培養(yǎng)時間5~20天污染菌株純化排除細(xì)菌或酵母菌污染原理：低溫下，菌絲生長速度快于細(xì)菌。排除霉菌污染原理：抑制雜菌生長，拉大兩者生長范圍差，切割食用菌菌落前端菌絲。菌絲再提純原理：生長速度一致菌落菌絲前端切割

2.原種

栽培種

的培養(yǎng)培養(yǎng)時間：約30天勿堆放過擠及時挑揀污染瓶（袋）控制菌齡（菌絲長滿后5~10天使用）菌種質(zhì)量鑒定形態(tài)特征、生理特性、

栽培性狀、經(jīng)濟效益等鑒定

項目、母種質(zhì)量的鑒定、菌絲白、整齊、粗壯、

萌發(fā)快等外觀好差絲干燥、收縮、自溶

產(chǎn)生有色液體等微觀觀察菌絲特性：菌絲粗細(xì)、鎖狀聯(lián)合等退化母種好母種鑒定耐干濕性試驗接入母種→正常生長原種

培養(yǎng)基

含水量＜50%＞70%耐高溫性試驗仍正常生長適溫培養(yǎng)7天

30~35℃鍛煉24h

再適溫培養(yǎng)出菇試驗如何鑒定母種不張冠李戴母種發(fā)菌完畢后放合適的出菇溫度下觀察是否有相應(yīng)性狀的菇蕾形成。原種、栽培種質(zhì)量的鑒定

具有菌絲白（符合該菌種的顏色）

均勻、粗壯、有菇香味

接種后萌發(fā)快沒有無雜色、無黃水、無結(jié)皮、無原基、無干縮脫壁等現(xiàn)象產(chǎn)生原基菌種種類品種名稱菌種級別代時生產(chǎn)廠家接種日期合格菌種用于生產(chǎn)菌種使用前必要的檢查手段排張冠李戴檢隱性污染檢生活力檢蟲食用菌菌種保藏保藏目的及原理目的原理創(chuàng)造不利于菌種生長的一切條件，

使其代謝處于休眠狀態(tài)。使菌種不生長不死亡不污染不降低或不喪失其優(yōu)良性以盡量延長使用時間不利

條件低溫干燥無氧缺營養(yǎng)常用保藏法特點簡便

保藏時間短

易污染及退化

不適于草菇等菌類1.斜面低溫法

斜面菌種置4~6℃冰箱中（3~6個月）2.礦油保藏法無菌檢驗注入種管淹沒斜面約1cm礦油

處理滅菌：152kpa、30min

去水：40~50℃烘至無色透明

口堵膠塞用時轉(zhuǎn)管再轉(zhuǎn)管3.自然基質(zhì)保藏法基質(zhì)的處理麥粒浸透、煮熟

麩皮拌濕裝管防衰老

保藏時間長

轉(zhuǎn)接后生長旺

易污染，滅菌要徹底特點滅菌接種培養(yǎng)干燥器去水保藏注意用保種培養(yǎng)基及時保藏最好換膠塞用時活化嚴(yán)防棉塞受潮菌種復(fù)壯菌種的復(fù)壯概念確保或恢復(fù)菌種優(yōu)良性能的措施（一）菌種的衰