ELISA及相關(guān)免疫分析技術(shù)

概述ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗(yàn)也可以做半定量分析等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。ELISA的影響因素較多，加強(qiáng)質(zhì)量管理才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn)。目前一頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINELISA1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay）技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附劑試驗(yàn)。特點(diǎn)：在聚苯乙烯固相載體表面組裝免疫活性物質(zhì)形成“免疫吸附劑”酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，化學(xué)顯色劑進(jìn)行信號放大；有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程；靈敏度、特異性相對較高。目前二頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINELISA原理雙抗體（原）夾心法

檢測抗原（體）的常見方法，應(yīng)用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測溶液中的抗原（適用于二價以上抗原,不能測小分子半抗原）。目前三頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN間接法檢測抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體（一般為抗人IgG）檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體，因有干擾須稀釋標(biāo)本。

固相包被抗原待測抗體酶標(biāo)記第二抗體底物目前四頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN競爭法檢測抗原或小分子半抗原、抗體，以測抗原為例，使待測抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)。

固相包被抗原待測抗體酶標(biāo)記特異抗體底物目前五頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINELISA原理競爭中和法以測抗體為例，包被抗體、待測抗體競爭結(jié)合加入的恒定量的中和抗原，酶標(biāo)記抗抗體（抗人IgG），待測抗體量越多包被抗體結(jié)合越少，顯色越淺。捕獲法一般用于檢測IgM抗體，包被抗人μ鏈，捕獲血清中的所有IgM抗體，加入定量特異抗原與捕獲的特異抗體結(jié)合，酶標(biāo)記特異抗體（或抗抗體）顯色。目前六頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINELISA捕獲法原理圖固相包被抗μ鏈抗體捕獲的IgM抗體酶標(biāo)記抗原底物目前七頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN試劑盒選擇衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品，試劑應(yīng)從靈敏度，特異性，精密度，穩(wěn)定性，簡便性，安全性及經(jīng)濟(jì)性作出全面的評價。靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的最低量的能力；2）為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性。特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無假陽性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性。精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍目前八頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINCLSII/LA23-A

Assessingthequalityofimmunoassaysystems:radiooimmunoassaysandenzyme,fluorescence,andluminescenceimmunoassays;approvedguideline11.2:Thelowerimmunochemicaldetectionlimitforanassayrepresentsthelowestlevelofanananlytethatcanbereproduciblydetected.thelaboratoryortestsensitivityisidenticaltothedetectionlimit;usecutoffvalueClinical(diagnostic)sensitivity:theproportionofpatientswithawell-definedclinicaldisorderwhosetestvaluesarepositiveorexceedadefineddecisionlimit(i.e.,apositiveresultandidentificationofthepatientswhohaveadisease);usepositivepredictivevalue,false-negativeresults,et.al.目前九頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前十頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN

目前十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINHBV基因型和血清學(xué)亞型以HBsAg的抗原決定族分血清學(xué)亞型共同決定族a，相互排斥的二對決定族d/y，w/r；w又分1-4；r又分q+和q-。共有9種亞型：

ayw1，ayw2，ayw3，ayw4，ayr，adw2，adw4，adrq+，adrq-

只表明包膜蛋白氨基酸差異，有流行病學(xué)意義目前十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN保存參考品的國際機(jī)構(gòu)或組織英國國立生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)及控制品研究院（NIBSC）：免疫血清學(xué)IU/ML德國鮑爾-艾立希研究院（PEI）：病毒學(xué)、免疫血清學(xué)等，傳染病標(biāo)志物最全。PEI/ML法國國家中心實(shí)驗(yàn)室（LNS）、法國輸血協(xié)會（SFTS）：病毒性肝炎、艾滋等血清盤。NG/ML荷蘭輸血中心實(shí)驗(yàn)室（CLB）：血型、病毒學(xué)、自身抗體等。丹麥國家血清研究院（SSI）：病毒學(xué)、寄生蟲、免疫蛋白等。美國BBI：HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、HTLV-1等Panel。目前十八頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN穩(wěn)定性：試劑在規(guī)定條件下能儲存的時間，一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測定其靈敏度，特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止，通常認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于4—10℃保存一個半月。簡便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好，在定性試驗(yàn)中結(jié)果判斷簡單明了，）定量試驗(yàn)結(jié)果計算也應(yīng)簡單。安全性：指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術(shù)進(jìn)步降低成本而市場價格比較合理。目前十九頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN試劑盒選擇試劑評價需要有權(quán)威的血清考核盤（Panel）進(jìn)行檢測，一般實(shí)驗(yàn)室不易從生檢所或臨檢中心取得，每進(jìn)一次試劑評價一次也很麻煩?？梢酝ㄟ^間接的信息對試劑進(jìn)行選擇。根據(jù)該試劑生檢所批批檢定報告，了解其質(zhì)量水平，按照質(zhì)量計劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源（基因工程或合成多肽），片段的組合（按比例混合或化學(xué)合成），片段的長短等判斷試劑的優(yōu)劣；參考室間質(zhì)評評價報告中對試劑的評價結(jié)果，這比較客觀公正，因?yàn)榻y(tǒng)計數(shù)字均來自各參評醫(yī)院，反映了試劑在某一地區(qū)的使用情況；根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的試劑評價結(jié)果，了解市場上試劑的質(zhì)量優(yōu)劣。目前二十頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN標(biāo)本的采集和保存可用作ELISA的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清，血漿，各種積液），分泌物（如唾液）和排瀉物（如糞便，尿液）均可作為標(biāo)本以測定其中的抗原或抗體成分，一般使用血清。標(biāo)本采集時應(yīng)盡量避免溶血，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，可造成假陽性；長菌的標(biāo)本同樣的道理易產(chǎn)生假陽性?？鼓煌耆臉?biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。標(biāo)本在冰箱中保存時間過長易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4℃冰箱5天內(nèi)完成測試。如需保存一周以上則要-20℃冰凍保存，融解時應(yīng)上下顛倒充分混勻，同時避免氣泡。ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標(biāo)本間的污染要盡量避免，尤其不應(yīng)與生化試驗(yàn)用同一管標(biāo)本.最起碼應(yīng)先做免疫后做生化.目前二十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN標(biāo)本使用真空采血管分離膠不抗凝目前二十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN內(nèi)外干擾物質(zhì)的影響分析

溶血脂濁RF自身抗體AFP補(bǔ)體肝素EDTAA0.1650.2000.2500.2640.1860.1460.1830.126S0.0230.0160.0070.0290.0100.0070.0190.013A對照0.1510.1950.1950.1950.1160.1160.1160.116S0.0380.0080.0080.0080.0180.0180.0180.018P>0.05>0.05<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01目前二十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN操作中注意事項(xiàng)ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果受操作影響很大，每個步驟包括加樣，溫育，洗滌，顯色，酶標(biāo)儀讀數(shù)均應(yīng)認(rèn)真負(fù)責(zé)才能充分發(fā)揮ELISA的高靈敏，強(qiáng)特異的優(yōu)點(diǎn)。因此,應(yīng)建立實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。目前二十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN儀器質(zhì)控為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。移液器：ELISA加樣量?。?-100ｕl），其準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準(zhǔn)確，一般應(yīng)在±10%以內(nèi)；水浴箱經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差；洗板機(jī)每個廠家設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)定一般不超過2ul，人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；酶標(biāo)儀經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正濾光片波長和線性范圍，使其保持良好的工作性能。目前二十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN加樣器合格標(biāo)準(zhǔn)水合格標(biāo)準(zhǔn)目前二十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN酶標(biāo)儀校正程序?yàn)V光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標(biāo)儀上卸下，用UV-2201型紫外-可見分光光度計（波長精度±0.3nm）于可見光區(qū)對每個濾光片進(jìn)行掃描，其檢測值與標(biāo)定值之差為濾光片波長精度。通道差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標(biāo)板小孔杯（杯底須光滑，透明，無污染以酶標(biāo)板架作載體， 將其（內(nèi)含200ul甲基橙溶液吸光度調(diào)至0.500A左右）置于8個通道的相應(yīng)位置，蒸溜水調(diào)零，1于490nm處連續(xù)測三次,觀察其不同通道的檢測器測量結(jié)果的一致性，可用極差值來表示。孔間差的測量是選擇同一廠家，同一批號酶標(biāo)2板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調(diào)至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水調(diào)零,于490nm處檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。零點(diǎn)飄移（穩(wěn)定性觀察）：取8只小孔杯分別置于8個通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸溜水并調(diào)零，于490nm處每隔30分鐘測一次，觀察各個通道4小時內(nèi)吸光度的變化。目前二十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN酶標(biāo)儀校正程序精密度評價：每個通道3只小杯分別加入200ul高中低3種不同．濃度的甲基橙溶解，蒸溜水調(diào)零，于490nm作雙份平行測定，每日測二次（上下午各一次），連續(xù)測定20天。分別計算其批內(nèi)精密度，日內(nèi)批精密度,日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制5個系列的溶液，于490nm平行測8次，取其均值。計算其回歸方程，相關(guān)系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)估計誤差s，并用±1.96s表示樣品測量的誤差范圍.雙波長測定評價：取一分甲基橙溶液，分別加入3種不同濃度的溶血液（測定波長為490nm，校正波長為585nm），先后于8個通道檢測，每個通道測3次，51比較各組之間是否具有統(tǒng)計學(xué)差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果。一般酶標(biāo)儀無585nm濾光片，可選用550nm或630nm濾光片。450nm濾光片的檢定選用普魯蘭溶液（校正波長為630nm）目前二十八頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN全自動酶標(biāo)儀定期校準(zhǔn)（年檢，維修后）主要參數(shù)：加樣精度（針間誤差），攜帶污染率（加樣和管道），洗板效果，光學(xué)系統(tǒng)。

目前二十九頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前三十頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前三十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN加樣

加樣應(yīng)用微量移液器（加樣槍)按規(guī)定的量加入微孔板的1/3處避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一人一吸頭，以免發(fā)生交叉污染;干吸頭預(yù)先在血清中抽吸三次。樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以一定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30秒鐘，同時注意防止液體溢出。如后面操作步驟中加二種以上試劑時均需振蕩混勻。如用滴瓶滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去第一滴有氣泡的試劑后加樣。目前三十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN溫育抗原抗體反應(yīng)需要在一定溫度下（37°C），經(jīng)過一定的時間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)ELISA邊緣效應(yīng)是由溫育形成的。所以溫育一般采用能使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水浴法。一種放在水浴箱的隔板上，另一種是放在溫箱的濕盒里。水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊加放置。邊緣效應(yīng)（2ng/mlHBsAg一步法三種不同溫育法的結(jié)果）

水浴法

孵箱法

微波法A中央（S）

0.307（0.023）

0.282（0.028）

0.151（0.059）

A周圍（S）

0.290（0.038）

0.357（0.047）

0.097（0.038）P<0.05<0.01<0.01目前三十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN洗滌

ELISA是靠洗滌來達(dá)到分離結(jié)合與未結(jié)合抗原抗體復(fù)合物及酶標(biāo)記物的目的，同時洗滌也可將非特異吸附的蛋白質(zhì)的干擾以及血球、細(xì)菌中的酶干擾清除掉。手工洗滌一般采用浸泡方法：1）甩去孔內(nèi)反應(yīng)液；

2）用洗滌液過洗一遍（即注滿孔后即甩去）；

3）微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動；

4）甩去孔內(nèi)液體，拍板，用紙吸干。重復(fù)以上操作至少5次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。洗板機(jī)洗板一定要預(yù)先把板架放平，使洗板機(jī)上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底，將孔內(nèi)液體全部吸干，同時要設(shè)置一定的浸泡時間。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時應(yīng)再用手工洗2次以上。關(guān)機(jī)前要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。目前三十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN顯色HRP催化底物H2O2釋放自由氧，氧化OPD或TMB顯色反應(yīng)，同樣需要一定的時間和溫度，一定要按照說明書規(guī)定的時間溫度（一般為37°C，10-15分鐘）恒定反應(yīng)后終止或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0.2左右使的時間而恒定反應(yīng)時間.目前三十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN酶標(biāo)儀判讀結(jié)果

顯色反應(yīng)終止后應(yīng)立刻比色（30分鐘內(nèi)）。常見的顯色系統(tǒng)有OPD和TMB二種，以后者最為常見，而TMB酸不易終止因此必須盡快比色以免影響結(jié)果。OPD終止后顯棕色，測定波長為490nm；

TMB終止后顯黃色，測定波長為450nm，二種底物的校正波長均用630nm。使用雙波長的優(yōu)點(diǎn)可以消除反應(yīng)板條上的劃痕手印的干擾。同時要注意反應(yīng)板應(yīng)用紙吸干后才能置酶標(biāo)儀中比色，否則吸光度易出現(xiàn)負(fù)值或損壞濾光片。目前三十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN報告方式定性試驗(yàn)國內(nèi)外為便于統(tǒng)一計算，一律按S/C.O方式報告，S為標(biāo)本A值，C.O即CutOff值（陽性判定值)夾心法和間接法以S/C.O≥1為陽性；竟?fàn)幏ㄅc中和法以S/C.O﹤1為陽性CutOff的計算公式以試劑盒說明書的為準(zhǔn)常見的有：A）

C.O=2.1×N（當(dāng)N不足0.05時按0.05計），此公式由P/N>2.1換算而來，常用于夾心法。B）

C.O=0.5×N，從抑止率公式換算而來，常用于竟?fàn)?，中和法C）

C.O=N+C（C為常數(shù)），用于間接法。D)

C.O=C×P+N（C為常數(shù)），用于間接法。此公式最客觀，但對生產(chǎn)廠家要求很高，陰陽性對照測定值要基本恒定。目前三十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN報告方式定量分析用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋，ELISA測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以絕對量或單位表示。ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線每次都要和待測標(biāo)本做在同一塊板上?，F(xiàn)有的ELISA定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線只有在較窄的濃度范圍內(nèi)成直線，要得到精確的結(jié)果實(shí)屬不易。因此嚴(yán)禁用定性試劑盒做定量分析。目前三十八頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN灰區(qū)概念把定量分析的正常值范圍引入定性分析建立灰區(qū)概念，即將CO值上下的一段區(qū)域定為陽性可疑，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或換試劑重測以確定其陰陽性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報告+（陽性）。

灰區(qū)概念對血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。灰區(qū)的設(shè)置有二種：

1）C.O×（1±CV），

CV為該試劑的批內(nèi)CV(一般在15-20%間）；

2）C.O±2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室內(nèi)質(zhì)控ROC的s。目前三十九頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前四十頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN確認(rèn)試驗(yàn)抗原檢測—中和試驗(yàn)抗體檢測—RIBA（RecombinantImmunoblotAssay）：將病毒的各種抗原單獨(dú)包被在纖維素膜、尼龍膜等載體上，檢測不同抗原的反應(yīng)性。或WesternBlot：用十二烷基硫酸鈉SDS處理的待檢血清經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠PAGE電泳，使抗原與抗體分離，將抗原轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，加入抗體，再用與酶或同位素標(biāo)記的二抗反應(yīng)，顯色或放射自顯影判定結(jié)果。目前四十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN質(zhì)量審核型式檢查（編號唯一性、項(xiàng)目完整性、書寫完整性）儀器檢查（狀態(tài)、校準(zhǔn)）試劑檢查（效期）質(zhì)控檢查（室內(nèi)、室間）異常值檢查（及時與臨床聯(lián)系）目前四十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前四十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN目前四十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINHBsAgHBeAgHBcAb-IgGHBcAg-IgMHBeAbHBsAb臨床意義++—

—

—

—

急性HBV感染早期HBV復(fù)制活躍

++++—

—

急慢性HBV感染，HBV復(fù)制活躍

+—++—

—

急慢性HBV感染，HBV復(fù)制中躍

+—+++—

急慢性HBV感染，HBV復(fù)制低躍異型慢性乙型肝炎+—+—+—HBV復(fù)制停止或極低

—

—++—

—

平靜的HBV攜帶狀態(tài)，HbsAg極低測不出，HBsAg/抗HBs空白期

—

—+—

—

—HBV既往感染，未產(chǎn)生抗-HBs

—

—+++—

抗HBs出現(xiàn)前期，HBV復(fù)制低

—

—+—++HBV感染恢復(fù)期—

—+—

—+HBV感染恢復(fù)期

++++—+不同亞型ＨＢＶ再感染+

——

———ＨＢＶ－ＤＮＡ整合—————＋病后或接種疫苗后獲得免疫目前四十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINHBsAg

A.急、慢性肝炎的診斷。

B.獻(xiàn)血員和各種血制品的篩選。C.急性肝炎最早期的預(yù)后指標(biāo)。D.流行病學(xué)調(diào)查。

注意事項(xiàng)：一、HBsAg假陽性

血清分離不佳或肝素抗凝血；二、HBsAg假陰性

①

感染早期易形成抗原抗體復(fù)合物，這種情況需要檢測抗HBc-IgM及HBVDNA；②

多數(shù)商用試劑盒檢測系統(tǒng)采用的為多克隆抗體檢測HBsAg的adr、ayw型，S區(qū)的點(diǎn)突變即可導(dǎo)致臨界測定值或陰性結(jié)果；③由于慢性病毒攜帶者（低水平HBsAg攜帶者）或HBV感染潛伏期，HBsAg濃度低于檢測水平的下限。

目前四十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBIN抗-HBs：

A.預(yù)后：抗HBs經(jīng)常在肝炎癥狀出現(xiàn)后4-6個月出現(xiàn)，一般表示病毒清除，感染開始恢復(fù)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)在抗HBs陽性患者體內(nèi)有5%HBVDNA陽性，慢性肝炎中的一些抗HBs陽性者，肝細(xì)胞中可檢出HBsAg、HBeAg、HBVDNA，因此盡管自然感染者抗HBs陽轉(zhuǎn)后，大多數(shù)預(yù)后良好，但也不能過于樂觀，應(yīng)定期復(fù)查。

B.流行病學(xué)調(diào)查。

C.疫苗接種對象的篩選和效果觀察。接種疫苗后，抗HBs濃度超過10IU/L，表明其具有保護(hù)性。加強(qiáng)免疫后4-8周，大于100IU/L，即便以后有所降低，其免疫力能維持10年以上。

注意事項(xiàng)：

A．懷疑假陽性結(jié)果時要進(jìn)行中和試驗(yàn)。B．

抗HBs經(jīng)常在HBsAg消失幾周至幾月后方呈陽性（窗期），極少數(shù)在HBsAg消失后即為陽性，同時可檢出抗HBs及HBsAg見于以下幾種情形：①前后或同時感染兩種亞型HBV，抗HBs及HBsAg同時檢出通常要持續(xù)很久，且濃度均很高；

②抗HBs假陽性；③編碼HBsAg的基因變異使得HBsAg抗原性改變，原型抗HBs不能將其清除。目前四十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十二點(diǎn)5/17/2023JSCCLXUBINHBeAg：A.評價血清傳染性：慢性HBsAg攜帶者中，HBeAg及HBV-DNA檢測可以用來評估其傳染危險性，90%HBeAg陽性HBsAg攜帶者可以傳染給她們的新生兒，而HBeAg陰性或抗HBe陽性的孕婦中只有10%會傳染給嬰兒。B.預(yù)后：急性期HBeAg的消失通常伴隨ALT的降低，預(yù)示著疾病的好轉(zhuǎn)；HBeAg持續(xù)陽性超過12周，提示HBV感染趨向慢性；HBeAg陽性的無癥狀者較少。

注意事項(xiàng)：

（1）假陰性：前C區(qū)基因變異導(dǎo)致不能生成和分泌HBeAg，血清中HBeAg陰性，但這種突變并不影響乙肝病毒的復(fù)制，仍可形成完整的病毒顆粒，該種情況下盡管檢測不到HBeAg，慢性HBV感染炎癥反應(yīng)也相當(dāng)強(qiáng)。HOOK效應(yīng)（2）假陽性：包被抗體不純