熒光PCR檢測(cè)原理

關(guān)于熒光PCR檢測(cè)原理第1頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、熒光信號(hào)的檢測(cè)第2頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

熒光標(biāo)記信號(hào)的產(chǎn)生

熒光標(biāo)記基團(tuán)在某波長(zhǎng)的激發(fā)光刺激下，產(chǎn)生一個(gè)更長(zhǎng)波長(zhǎng)的發(fā)射光第3頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月FRET？

某熒光標(biāo)記基團(tuán)在激發(fā)光刺激下生成某波長(zhǎng)的發(fā)射光，當(dāng)另一屏蔽基團(tuán)與其距離合適時(shí)，原發(fā)射光將會(huì)被屏蔽基團(tuán)所吸收，并轉(zhuǎn)化為其他波長(zhǎng)的發(fā)射光或熱能，稱之為FRET。第4頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月熒光信號(hào)熒光染料SYBRgreen——特異性結(jié)合雙鏈，釋放熒光信號(hào)特異性熒光探針Taqman雙熒光標(biāo)記探針molecularBeacon熒光標(biāo)記探針熒光標(biāo)記雜交雙探針第5頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Taqman特異性熒光雙標(biāo)記探針Taqman5’→3’外切酶活性第6頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Molecular

beacon第7頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月熒光標(biāo)記雜交雙探針第8頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、典型的熒光PCR擴(kuò)增曲線陽(yáng)性標(biāo)本擴(kuò)增曲線陰性標(biāo)本擴(kuò)增曲線第9頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Bio-radiCycler擴(kuò)增曲線第10頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月PE-5700擴(kuò)增曲線第11頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月PE-7700擴(kuò)增曲線第12頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月RocheLightCycler擴(kuò)增曲線第13頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、Ct值樣本擴(kuò)增曲線與閾值線交叉點(diǎn)的循環(huán)數(shù)Ct值第14頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、熒光PCR定量的原理第15頁(yè)，課件共17頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Unknown未知樣本拷貝數(shù)的確定第16頁(yè)，課