微生物學(xué)試驗

微生物學(xué)試驗第一頁，共17頁。實驗一微生物實驗規(guī)則與安全、無菌概念及無菌操作技術(shù)的介紹實驗二培養(yǎng)基的制備實驗三消毒與滅菌第二頁，共17頁。一.微生物實驗規(guī)則與安全輕松的心態(tài)，認真的實驗態(tài)度微生物實驗的特殊性-------把所有的微生物都看成是具有潛在致病性充分預(yù)習(xí)

-------了解實驗?zāi)康?、原理和方法，實驗中要思路清楚實驗記?/p>

-------觀察的結(jié)果或現(xiàn)象，分析第三頁，共17頁。實驗報告1.實驗?zāi)康暮驮?.實驗材料3.實驗方法或步驟4.實驗結(jié)果或繪圖5.思考題第四頁，共17頁。實驗操作應(yīng)嚴格按操作規(guī)程進行有機溶液或溶劑不要接觸火源，如乙醚或丙酮等（酒精燈的使用）使用一些貴重儀器：顯微鏡，滅菌鍋、電泳裝置、凝膠成像儀等，要細心操作，特別愛護稱量藥品時嚴禁藥匙交叉使用，也嚴禁取出的藥品又倒回藥瓶中，造成污染嘴吸取試劑或菌液？遇有盛菌的試管或試劑瓶打破要及時報告

……第五頁，共17頁。二.無菌概念及無菌操作技術(shù)

無菌概念------實際上只是一種習(xí)慣用語，因為實驗，科研，或生產(chǎn)實踐中使用的微生物必須是單一的純種或菌株，也就是除實驗用菌外，無其他雜菌的污染。介紹器具的使用：------標記，接種環(huán)，培養(yǎng)皿，涂布棒，接種等，超凈臺的使用，培養(yǎng)皿的倒置，斜面的形成第六頁，共17頁。組號日期菌名ABCD第七頁，共17頁。第八頁，共17頁。實驗二培養(yǎng)基的制備

一、實驗?zāi)康?/p>

了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟

二、實驗原理

培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。

原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據(jù)微生物的種類和實驗?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。

------目前可培養(yǎng)微生物僅占微生物總量的1%左右第九頁，共17頁。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。高氏I號培養(yǎng)基（GauseI）：培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)和特征的合成培養(yǎng)基。馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）：培養(yǎng)基是分離真菌和細菌的常用培養(yǎng)基。用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖，用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖。第十頁，共17頁。2216E培養(yǎng)基：分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方

蛋白胨5克

酵母膏1克

磷酸高鐵0.01克

瓊脂15-----20克（固體培養(yǎng)基）

陳海水1000毫升（已過濾）

煮沸氫氧化納（5%）的溶液調(diào)PH值7.6—7.8

第十一頁，共17頁。LB:(溶菌肉湯，lysogenybroth）：

培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨存活和擴增的工程菌。通過培養(yǎng)工程菌，我們可以表達大量的外源蛋白，也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒。胰蛋白胨(Tryptone)10g/L

酵母提取物(Yeastextract)5g/L

氯化鈉(NaCl)5g/L

補水至1000ml根據(jù)經(jīng)驗值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH---7.4

(該pH適合目前使用最廣的原核表達菌種E.coli的生長)第十二頁，共17頁。三、注意事項調(diào)pH:1mol/LNaOH，1mol/LHCl避免回調(diào)----影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度定容分裝：液體----試管(管高）1/4，三角瓶（容積）1/2固體----試管（斜面）1/5，三角瓶1/2半固體----試管1/3

第十三頁，共17頁。GauseI:淀粉先用冷水調(diào)成糊狀后加入沸水中使之完全溶解，然后按配方順序依次溶解各成分（磷酸鹽和鎂鹽混合易產(chǎn)生沉淀）。PDA:用土豆應(yīng)去皮切小塊，避免帶入雜質(zhì)，產(chǎn)生泡沫，影響通氣。滅菌：含糖培養(yǎng)基用0.06MPa，112℃

，15min或?qū)⑵渌煞窒刃袦缇?.1MPa，121℃

，20min

第十四頁，共17頁。實驗三消毒與滅菌消毒----指消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體，但不一定能殺死細菌芽孢的方法滅菌----指消滅一切微生物的營養(yǎng)體，包括芽孢和孢子。第十五頁，共17頁。滅菌的類型干熱滅菌：利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌。160~170℃，1~2h