誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡

凋亡與疾病一、凋亡與惡性腫瘤腫瘤的發(fā)生不僅與細(xì)胞過(guò)度增殖有關(guān)，還與凋亡障礙有關(guān)。Oncogenes“anti-apoptic”genesCelldivisioncelldeath腫瘤治療新思路：誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡二、凋亡與免疫系統(tǒng)功能障礙（一）凋亡對(duì)免疫系統(tǒng)功能有重要調(diào)節(jié)作用1、淋巴細(xì)胞：在發(fā)育過(guò)程中有凋亡發(fā)生；在晚期，當(dāng)與抗原相互作用時(shí)亦發(fā)生凋亡。2、胸腺發(fā)育過(guò)程中的自然凋亡過(guò)程（二）凋亡與免疫缺陷性疾病典型例子是AIDS1、HIV-1感染后可引起CD4+T淋巴細(xì)胞的凋亡，且可能由病毒被膜蛋白復(fù)合體gp120介導(dǎo)。2、AIDS患者外周血淋巴細(xì)胞Fas/Apo水平明顯提高，可迅速誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

由此，通過(guò)控制凋亡過(guò)程是否可以預(yù)防或延緩AIDS的進(jìn)展。三、凋亡與神經(jīng)退行性病變神經(jīng)元是non-proliferating,long-lived,terminallydifferentiatedcell。神經(jīng)元等非增殖細(xì)胞發(fā)生凋亡的意義：1、避免細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期，特別是遇到致轉(zhuǎn)化刺激信號(hào)時(shí)。如向終末分化的細(xì)胞中轉(zhuǎn)染oncogene可引起細(xì)胞凋亡，而非增殖。2、為了器官生存的需要

Adeletedcellismoreadvantageousthanadamagedcell,evenwhenthecellisirreplaceable.Thisisanalogoustowhatisfrequentlyreferredtoas“betterdeadthanwrong”fordividingcell四、凋亡與心臟病（一）心臟傳導(dǎo)障礙和心律失常心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)在胚胎早期就已形成。新生兒竇房結(jié)主要有大量起搏細(xì)胞（P細(xì)胞）和少量膠原組成，而成人則為少量P細(xì)胞和大量膠原構(gòu)成，可能是P細(xì)胞凋亡的結(jié)果。因此P細(xì)胞凋亡不足或過(guò)度均可引起心律失常。（二）心肌缺血和再灌注損傷心肌缺血再灌注后可引起心肌細(xì)胞的凋亡，由于心肌組織中吞噬細(xì)胞數(shù)量有限，故而凋亡細(xì)胞可以激發(fā)性引起炎性反應(yīng)，招引中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)而導(dǎo)致心肌組織壞死（心肌梗塞）。五、凋亡與衰老等細(xì)胞凋亡的檢測(cè)隨著研究技術(shù)的提高和對(duì)凋亡的認(rèn)識(shí)不斷深入，檢測(cè)凋亡的方法已從細(xì)胞、染色質(zhì)到分子水平日趨完善和成熟。1.形態(tài)學(xué)檢測(cè)2.DNA降解分析3.凋亡酶學(xué)分析4.凋亡相關(guān)蛋白分析5.流式細(xì)胞分析一．細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)分析細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化主要表現(xiàn)為：細(xì)胞皺縮(cellshrinkage)，失去細(xì)胞連接(celljunction)，微絨毛(microvilli)消失，發(fā)泡(blebbing)，染色質(zhì)濃集并靠近核膜，形成沿核膜收縮的新月狀體(crescents)，形成凋亡小體(apoptoticbody)等。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)方法可鑒定凋亡細(xì)胞特征光學(xué)顯微鏡相差顯微鏡透射電鏡聚焦激光掃描電鏡掃描電鏡流式細(xì)胞儀縮時(shí)攝影術(shù)細(xì)胞體積縮小、核濃縮、細(xì)胞周圍透明圈細(xì)胞發(fā)泡、凋亡小體微絨毛消失、染色質(zhì)沿核膜分布、新月體狀核、凋亡小體凋亡細(xì)胞內(nèi)固縮染色質(zhì)及核碎片定位細(xì)胞膜表面泡狀鼓起低前向散射光(FSC)、高側(cè)向散射光(SSC)凋亡細(xì)胞的形成過(guò)程二.DNA降解分析DNA降解過(guò)程的特點(diǎn)：1.發(fā)生于凋亡早期，由內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶激活引起2.DNA在核小體連接部位斷裂，產(chǎn)生180－200bp為最小單位的單體或寡聚體片斷3.DNA碎片可被細(xì)胞膜包裹，形成凋亡小體

(一)DNA凝膠電泳原理：凋亡細(xì)胞降解產(chǎn)生一系列規(guī)則的DNA片斷，其電泳結(jié)果呈典型的“梯狀帶”(ladder)；而壞死或凋亡后壞死細(xì)胞的DNA分解是隨機(jī)的，產(chǎn)生的碎片分子量大小不一，在電泳時(shí)形成“涂片狀”(smear)。普通瓊脂糖凝膠電泳、Southernblotting、放射自顯影(32PdATP或32PdCTP連接到DNA片斷的3’端)(二)原位役標(biāo)記未法TU銷NE園L(償Td虛Tme皆di刊at胞eddU泡TPni旱cken上d乞la填be舌l(xiāng)i虜ng)終末水脫氧構(gòu)核糖懲核苷慎酸轉(zhuǎn)冰移酶類介導(dǎo)搜的原文位缺面口末剝端標(biāo)種記技斧術(shù)。原理殃：在Td攔T的作踏用下仙，帶蠅有標(biāo)肆記物長(zhǎng)的dU老TP被連興接在潮斷裂DN川A3府’末端鐵，然蔽后通怒過(guò)相藥應(yīng)的耐方法弱檢測(cè)表標(biāo)記棄物，際從而蠟判斷似是否亂有凋江亡發(fā)雅生。應(yīng)用毫范圍敘：石鋸蠟包稼埋的涉組織香切片歇、冰估凍組疤織切艇片、啊培養(yǎng)翁細(xì)胞同、組隨織中鳳分離洲的細(xì)期胞(三)訓(xùn)EL扮IS袋A法原理無(wú)：以沈抗組拔蛋白印抗體蒜包被餅微孔換板壁肺，加析入標(biāo)淹本，鏈凋亡歌細(xì)胞辨的核陽(yáng)小體劈燕可與成抗體帶結(jié)合夢(mèng)，再拖加入豎抗-D濱NA片斷-P知OD復(fù)合棄物，疤與核圣小體回中的DN鈔A片斷暗結(jié)合怠，最響后加詞入PO數(shù)D顯色話底物紐奉，以必酶標(biāo)刊儀測(cè)雅定光繭密度吼以進(jìn)蹦行定燒量分喝析。三.凋亡躲酶學(xué)箱分析1.內(nèi)切皂核酸衛(wèi)酶(en倘do紐奉nu釀cl序ea耐se,DN池as炊e)種類慰：DN境as巴eⅠ（內(nèi)質(zhì)猶網(wǎng)、葛高爾歌基體),DN挎as西eⅡ（溶酶產(chǎn)體、顫胞核)，NU芒C1駛8（胞核暖，胸災(zāi)腺細(xì)龍胞中)等作用逼：使DN響A斷裂暮成18從0－20摩0b紛p或其蔬倍數(shù)輸?shù)钠瑤煍嗉せ钊鐧C(jī)制辯：CA綢D(棕ca丑sp期as血e-a慚ct部iv暈at貝eDN臂as腎e)IC斃AD夢(mèng)(i脅nh劍ib侄to魯rof夢(mèng)C叼AD嶺)檢測(cè)畢：We堆st耗er私n敞B戚lo于tt號(hào)in肥g2.Ca塞sp廁as陪es家族Ca岡sp留as舅e是半束胱氨責(zé)酸基館天冬己氨酸虜－特廣異性禍蛋白只酶(cy蹈st辱ei叫ny坐las翼pa倒rt志at放esp幟ec鎖if回icpr約ot賤ei陣na樓se)的縮沾寫，權(quán)共有13個(gè)家羊族成唱員。盡可將遠(yuǎn)人體爽內(nèi)的ca方sp猛as是es分為或三個(gè)痰亞家品族：識(shí)①IC省E亞家膛族，ca末sp陸as歇e-封1,匙4,志5,主要詞參與瓶炎癥胃反應(yīng)掉；②Ya松ma亞家便族，ca浴sp點(diǎn)as柴e-廊3,電6烤,乞7,強(qiáng)8掌,1具0,主要誼參與過(guò)細(xì)胞歸凋亡呀；③Ne辜dd襪-2亞家旗族，ca凈sp肅as劫e-搶2,塘9，參與篩細(xì)胞量凋亡負(fù)。啟動(dòng)缸型：ca鼠sp氏as臣e8蜜,9籮,1毒0執(zhí)行烈型：ca靜sp城as嫁e3揚(yáng),6壁,7Ca蜻sp錯(cuò)as傍es蛋白混酶的傍共同萍特點(diǎn)1.均為口天冬俯氨酸之特異方性的峰半胱牛氨酸結(jié)蛋白痛酶；2.均含育保守逢的五蒙肽序載列(Gl驗(yàn)n-魄Al炸a-朽Cy付s-悟Ar蜘g-唯Gl估y,嘩QA孫CR士G)3.均以佳無(wú)活濤性的漫酶原賀形式枕存在岸，經(jīng)飛蛋白候裂解居激活4.常有緊異構(gòu)渡體形桌式存賴在5.裂解寶的最某適序軋列為宅含As靠p的四稈肽Ca頁(yè)sp翁as漠es作用設(shè)的一糖些底館物PA愛RP：DN疏A修復(fù)粥酶DN很A-血PK：參與念雙鏈DN頭A斷裂器修復(fù)帳的酶核纖顛層蛋刺白(la券mi醒ns)：核膜扎的重切要結(jié)繩構(gòu)蛋輩白胞襯吐蛋白(fo株dr目in)：大多洪數(shù)真缺核細(xì)惡胞堪骨筐架的紡組成天成分強(qiáng)，裂吐解后旺參與興凋亡金小體諒或bl允eb凡bi挑ng的形偵成U1小核抬糖體昌蛋白關(guān)的70挪kD蛋白(U遭1-蛇70狼kD頌)：參與RN點(diǎn)A的剪接其他示凋亡孩相關(guān)渡的酶盡：絲氨誤酸蛋藥白酶架：Gr燈an祝zy證me華A,B發(fā),遍1Ca昂lp穩(wěn)ai拿ns轉(zhuǎn)谷孝氨?？瓢访?TGa岡se):tTGa另se誘導(dǎo)口型一專氧化腳氮合逼成酶(iN傍OS)Ca押sp染as思es的檢污測(cè)1.戶C宋as木pa宰se但-3活性圈測(cè)定(F否IE眠NA法)熒光筐測(cè)定怕免疫屯吸附恒法(fl變ur賽om陽(yáng)et沒ri野cim稠mu極no慨so漢rb齊en于ten垂zy類me啦a逆ss樸ay溫,牛FI燥EN堪A)墨,獎(jiǎng)ca偽sp晝as頑e-辰3可作音用于殿連接她熒光彈素的凈特異幅底物皮－乙治?；吞於瑲灠彼?谷氨誓酸-頡氨男酸-天冬輩氨酰間胺(A景c-拌DE封VD糊),產(chǎn)生鞭發(fā)熒仆光的亮裂解莖產(chǎn)物AF駝C，且ca架sp勝as職e-義3活性糾與Ac魂-D臥EV蝕D-初AF已C分解囑的量槳或自繭由熒賠光AF繭C產(chǎn)生赤熒光攀的強(qiáng)京弱成籍正比黃，故罪可定胡量檢趁測(cè)2.蛋白唉印跡德法Ca胞sp警as五e(cuò)s作用押底物樹的檢煉測(cè)PA膨RP虜89怒kD的檢撇測(cè)四.凋亡龍相關(guān)培蛋白旅分析1.回Bc味l-鎖2家族促進(jìn)柏凋亡票：Ba打x,紡Ba疼l,Bc含l-X盆s,蓋B白ad繭,幟Bi毒d,Bi與k,Bi某m,Hr嫂k,Bo理k等抑制桃凋亡橋：Bc賊l-鏡2,Bc怨l-X傲l,Bc攏l-放w,葡Mc亂l-駁1,壇A1莊/B償fl略-1等均含銳有BH敬(B橫cl劍-2層h處om系ol證og識(shí)y)結(jié)構(gòu)前域，朋通過(guò)載此結(jié)留構(gòu)域董以二梳聚體疊形式旅調(diào)控藏凋亡據(jù)。2.其他釘相關(guān)艷蛋白p5扶3,My惱c,Fa雄s等流式呀細(xì)胞令分析FL己