微生物實驗報告答案

微生物實驗報告答案微生物實驗報告答案微生物實驗報告答案微生物實驗報告答案【篇一：微生物的革蘭氏染色實驗報告】=txt>二、實驗?zāi)康模?、學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法；2、認(rèn)識革蘭氏染色的原理；3、堅固顯微鏡的使用。三、實驗原理：革蘭氏染色是1884年丹麥病理學(xué)家christaingram氏創(chuàng)辦的，是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒識染色法。染色步驟分為四個部分：1、初染：加入堿性染料結(jié)晶紫固定細(xì)菌圖片；2、媒染：加入碘液，碘與結(jié)晶紫形成一種不溶于水的復(fù)合物；3、脫色：利用有機溶劑乙醇或丙酮進行脫色；g-和g+細(xì)胞壁的比較：1、陽性（g+）菌細(xì)胞壁特色：細(xì)胞壁厚，只有一層，主要由肽聚糖組成，肽聚糖含量高，構(gòu)造親近，脂類含量低。當(dāng)乙醇脫色時，細(xì)胞壁肽聚糖層孔徑變小，通透性降低，結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物被保存在細(xì)胞壁內(nèi)，復(fù)染后仍顯紫色（如芽孢桿菌）。2、陰性（g-）菌細(xì)胞壁特色：細(xì)胞壁薄，由兩層組成，內(nèi)壁層和外壁層，細(xì)胞壁中脂類中脂類物質(zhì)含量較高，肽聚糖含量較低，網(wǎng)狀構(gòu)造交聯(lián)程度低，乙醇脫色時溶解了脂類物質(zhì)，通透性加強，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物易被乙醇抽提出來，因此，革蘭氏陰性菌細(xì)胞被脫色，當(dāng)復(fù)染時，脫掉紫色的細(xì)胞的細(xì)胞壁又著上紅色（比方大腸桿菌）。四、實驗器械：1、菌種：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。2、溶液和試劑：革蘭氏染液、草酸銨結(jié)晶紫染液、碘液、95%乙醇、番紅復(fù)染液、水。3、儀器及其余用品：酒精燈、載玻片、顯微鏡、接種環(huán)、試管架、濾紙、滴管。五、實驗步驟：1、取一個載玻片，將其洗凈并沿一個方向擦抹潔凈，直至液體不再其上縮短為止；將接種環(huán)整平，用灼燒過的接種環(huán)在混勻的菌種中取菌，按常例方法圖片，應(yīng)涂大，不宜過厚。2、翻開酒精燈，用火焰固定，不宜烤得太狠，不然菌種呈假陽性。3、輕旋結(jié)晶紫染液滴管，將其旋出，滴加1滴草酸銨結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位（輕晃使其完滿覆蓋），染色40s。4、染色完成后傾去染液，水洗至流出水為無色。5、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。6、在涂菌部位滴加碘液，覆蓋1min。7、媒染完成后，傾去碘液，水洗至流出水無色。8、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。9、將載玻片放在白色筆錄本上，用滴管滴加95%乙醇脫色，脫色30~40s，不宜脫色太狠，不然菌種呈假陰性。、脫色完成后立刻用水洗去乙醇。、將玻片上殘留水用濾紙吸去，待其干燥。12、滴加番紅復(fù)染液，染色4min。13、染色完成后，水洗至流出水無色。14、吸去殘留水并晾干。15、用顯微鏡察看并畫圖。用以上步驟完成：大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混雜圖片染色、大腸桿菌獨自菌種染色、金黃色葡萄球菌獨自菌種染色。六、注意事項：1、采納活躍生長久菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細(xì)菌會被染成紅色而造成假陰性。2、圖片不宜過厚，免得脫色不完滿造成假陽性。3、脫色是革蘭氏染色能否成功的重點，脫色不夠造成假陽性，脫色過分造成假陰性。七、實驗結(jié)果與討論：1、結(jié)果：繪出高倍鏡下察看的菌體圖像。2、思慮題：1）寫出常有的革蘭氏陽性菌與陰性菌，包含致病菌。2）革蘭氏染色的原理是什么？印象要素有哪些？3）怎樣考證你的染色結(jié)果能否正確？【篇二：微生物實驗報告一】s=txt>學(xué)生實驗報告院（部）生物科學(xué)與工程學(xué)院姓名學(xué)號專業(yè)生物工程班級同組人員課程名稱微生物學(xué)類實驗實驗名稱產(chǎn)酶微生物的分別、純化與選育實驗日期2013.11批閱日期成績教師署名北方民族大學(xué)教務(wù)處制產(chǎn)酶微生物的分別、純化與選育實驗意義：酶是生物體內(nèi)進行生物化學(xué)反響的催化劑，在生物體中已發(fā)現(xiàn)的酶有2500多種。因為酶促反響的特異性強，反響平和，安全無毒，環(huán)境污染少，在沖刷劑、皮革、紡織、診療、制藥等領(lǐng)域擁有寬泛的應(yīng)用價值。能由工業(yè)生產(chǎn)的50多種酶制劑蛋白酶、淀粉酶等，大部分是由霉菌、細(xì)菌、鏈霉菌和酵母菌生產(chǎn)的。經(jīng)過本實驗，學(xué)會從自然界中分別產(chǎn)酶微生物的方法，軍中的純化技術(shù)及其高產(chǎn)菌的選育技術(shù)。蛋白酶產(chǎn)生菌的分別與純化1.1實驗?zāi)康模簩W(xué)習(xí)從自然界中分別蛋白酶產(chǎn)生菌并純化。1.2實驗原理好多細(xì)菌和霉菌產(chǎn)生蛋白酶，細(xì)菌中的芽孢桿菌是常有的蛋白酶產(chǎn)生菌。本實驗將土壤樣品（或其余樣品）懸液加熱辦理，殺死非芽孢細(xì)菌及其余微生物后進行劃線分別獲取芽孢桿菌，將其接種到酪蛋白平板進行培育，依據(jù)酪蛋白平板的水解圈作初篩。也可直接將細(xì)菌或霉菌接種到酪蛋白平板進行培育，分別精選其余蛋白酶產(chǎn)生菌。1.3實驗儀器與資料土壤樣品或其余富含蛋白質(zhì)的樣品、牛肉膏蛋白胨培育基平板、酪蛋白平板、無菌水（帶玻璃珠）、芽孢染色液；顯微鏡、恒溫水浴鍋、酒精燈、接種針、游標(biāo)卡尺、無菌移液管、無菌試管、量筒等。1.4實驗方法與步驟1.4.1配制酪素培育基：牛肉膏0.3g、nacl0.5g2.0g，蒸餾水100ml左右，調(diào)理ph7.6-8.0。1.4.2配制土壤樣品：

，酪素

1.0g

，瓊脂1）采集土壤樣品，用無菌水制備1：10土壤懸液。2）取1：10土壤懸液5ml，此后將懸液按10、10、10、10

梯度稀釋，注入試管中。

-1-2-3-43）將這些試管放入

75-80

℃水浴中熱辦理

10min

，以殺死非芽孢細(xì)菌。1.4.3滅菌與接種：1）將培育基滅菌辦理。1.4.4.蛋白酶產(chǎn)生菌的純化：1）依據(jù)酪蛋白平板的水解圈作初篩，精選出單菌落的蛋白酶產(chǎn)生菌。2）將精選出的單菌落用平板劃線法接種到牛肉膏蛋白胨培育基上，此后將平板倒置放于培育箱中24—48h。1.4.5芽孢桿菌的染色判斷1）挑去菌落涂片固定。2）滴加1——2滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。3）用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸干，必需時可增添少量染液4）傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再退色為止。5）用番紅水溶液復(fù)染1分鐘，水洗至水為無色。6）待干燥后，置油鏡察看，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。1.4.6蛋白酶產(chǎn)生菌的保存培育：1）用斜面劃線法，取純化判斷后的菌種接種于斜面上，放于培育箱中24—48h。2）將培育后的菌種置于冰箱中保存。1.5實驗結(jié)果：在含酪蛋白的平板上，產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌可形成蛋白質(zhì)水解圈。自然界中分其余微生物各菌株間產(chǎn)蛋白酶活力有很大差別，有些芽孢桿菌酶活力超出4000u/ml。1）描繪你所分其余蛋白酶產(chǎn)生菌的菌落特色和個體形態(tài)特色；答：第一組：a:原液培育基表面出現(xiàn)大面積菌落，難以挑出所需單調(diào)菌落；b:10培育基表面菌落好多，但未發(fā)現(xiàn)與所需菌落有關(guān)特色；c:10培育基表面基本未出現(xiàn)菌落：d:10、10均發(fā)現(xiàn)與所需菌落特色吻合的菌落，連續(xù)培育待進一步純化。第二組：a：原液培育基表面出現(xiàn)大面積菌落，難以劃分-2-3-4-1b:10培育基表面基本未出現(xiàn)菌落c:10培育基表面基本未出現(xiàn)菌落：d:10、10培育基表面均發(fā)現(xiàn)與所需菌落特色吻合的菌落，連續(xù)培育待進一步純化2）報告你所分其余蛋白酶產(chǎn)生菌的初篩（水解圈與菌苔直徑的比值）結(jié)果。答：求的均勻hc值=1.7-1-2-4-31.6注意事項1）土壤懸液加熱辦理的溫度和時間應(yīng)正確控制；2）點接含酪蛋白的平板時，接種量及接種面積要基真同樣。1.7分析與討論在酪蛋白平板上水解圈與菌落直徑比值大的菌落，其蛋白酶活力不用然大，因此，對初精選出的水解圈與菌落直徑比值大的菌落要進行發(fā)酵培育，進一步對發(fā)酵液進行酶活力測定。1.8思慮題1）對所精選的菌株怎樣進一步提升酶活力？請寫出設(shè)想和方案；答：采納蛋白酶產(chǎn)量較高的原始菌種，擴大培育后，采納低濃度的菌懸液，進行紫外線時間梯度照耀，采納一個突變率較高，成活率也較高的時間，大量量的進行紫外照耀誘變，此后在明膠固體培育基平板上精選水解圈較大的菌株接種，培育后測定水解酶活性，進一步精選出高產(chǎn)菌株。2）蛋白酶有哪些方面的應(yīng)用。答：蛋白酶寬泛存在于動物內(nèi)臟、植物莖葉、果實和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、細(xì)菌，其次由酵母、放線菌生產(chǎn)。產(chǎn)酶微生物菌種的選育生物的遺傳信息的改變是經(jīng)過基因突變、基因重組和基因轉(zhuǎn)移來進行的?；蛲蛔?，又稱點突變（pointmutation），包含自覺突變和惹起突變，前者是未經(jīng)人為施加誘變劑辦理而發(fā)生的突變，后者是經(jīng)人為施加誘變劑辦理而獲取的突變。兩種突變都是因為一個或幾個堿基的增添、缺失或置換而惹起的，因此實質(zhì)同樣，不同樣的但是惹起突變的頻次比自覺突變的頻次要高得多。這一部分的實驗是以紫外線為例介紹了物理要素對微生物的誘變作用。本實驗中，學(xué)生將精選出的蛋白酶的產(chǎn)生菌株作為出發(fā)菌株經(jīng)過紫外線即物理要素對微生物的誘變作用，對以上菌株進行選育工作。特以蛋白酶產(chǎn)生菌株作為出發(fā)菌株，經(jīng)過紫外線的誘變作用，依據(jù)透明圈直徑與菌落直徑的比值，可初步確立蛋白酶的高產(chǎn)菌株為例來介紹本實驗內(nèi)容。2.1實驗?zāi)康慕?jīng)過實驗察看紫外線和亞硝基胍等理化要素對微生物的誘變效應(yīng)，并掌握基本方法。2.2實驗原理基因突變可分為自覺突變和惹起突變。好多物理要素、化學(xué)要素和生物要素對微生物都有誘變作用，這些能使突變率提升到自覺突變水平以上的要素稱為誘變劑。紫外線（uv）是一種最常用的物理誘變要素。它的主要作用是使dna雙鏈之間或同一條鏈上兩個相鄰的胸腺嘧啶間形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復(fù)制和堿基的正常配對，從而惹起突變。紫外線照射惹起的dna損害，可由收復(fù)生酶的作用進行修復(fù)，使胸腺嘧啶二聚體解開恢還原狀。因此，為了防備收復(fù)生，用紫外線照耀辦理以及辦理后的操作應(yīng)在紅光下進行，而且照耀辦理后的微生物放在暗處培育。本實驗分別以紫外線作為單因子誘變劑辦理產(chǎn)生蛋白酶的菌株，根據(jù)試驗菌誘變后在蛋白酶培育基上透明圈直徑的大小來指示誘變效應(yīng)。一般來說，透明圈越大，蛋白酶活性越強。2.3實驗儀器與資料精選出的蛋白酶的產(chǎn)生菌株、酪素培育基、無菌生理鹽水、無菌水試管等；1ml無菌吸管、玻璃涂棒、血細(xì)胞計數(shù)板、顯微鏡、紫外線等（15w）、磁力攪拌器、臺式離心計、震蕩混雜器等。2.4實驗方法與步驟1）菌懸液的制備：①取培育48小時生長旺盛的出發(fā)菌株斜面4-5支，用10ml無菌生理鹽水將菌苔洗下，倒入盛有玻璃珠的小三角燒瓶中，振蕩30分鐘，以打壞菌塊。②用顯微鏡直接計數(shù)法計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為每毫升10個。2）平板制作：將酪素培育基熔解后，冷至55℃左右時倒平板18套，凝結(jié)后待用。8【篇三：微生物生理生化反響實驗報告】txt>姓名系年級2011級生科2班組別四科目微生物學(xué)實驗題目微生物的生理生化反響微生物的生理生化反響一、【實驗?zāi)康摹孔C明不同樣微生物對各樣有機大分子物質(zhì)的水解能力不同樣，從而說明不同樣微生物有著不同樣的酶系統(tǒng)。2.掌握進行微生物大分子物質(zhì)水解試驗的原理和方法。3.認(rèn)識糖發(fā)酵的原理和在腸細(xì)菌堅定中的重要作用。4.掌握經(jīng)過糖發(fā)酵鑒識不同樣微生物的方法。認(rèn)識吲哚和甲基紅試驗的原理以及其在腸道細(xì)菌判斷中的意義和方法。二、【實驗儀器與試劑】菌種：枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、一般變形桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌培育基：培育基：固體淀粉培育基、固體油脂培育基（大分子水解試驗）；葡萄糖發(fā)酵培育基、乳糖發(fā)酵培育基（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管）（糖發(fā)酵試驗）；蛋白胨水培育基（吲哚試驗）；葡萄糖蛋白胨水培育基；試劑：盧戈氏碘液、乙醚、吲哚試劑、甲基紅試劑、蒸餾水、儀器：酒精燈、接種針、培育皿、試管、試管架、燒杯、量筒、德漢氏小管三、【實驗原理】在所有生活細(xì)胞中存在的所有生物化學(xué)反響稱之為代謝，代謝過程主假如酶促反響過程，因為各樣微生物擁有不同樣的酶系統(tǒng)，因此他們能利用的底物不同樣，或雖利用同樣的底物但產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物卻不同樣，因此可以利用各樣生理生化反響來鑒識不同樣的細(xì)菌，特別是在腸桿菌科細(xì)菌的判斷中，生理生化試驗據(jù)有重要的地位。淀粉的水解：因為微生物對淀粉這類大分子物質(zhì)不可以直接利用，必然靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解才能被微生物汲取利用.胞外酶主要為水解酶,經(jīng)過加水裂解大的物質(zhì)為較小的化合物,使其能被運輸至細(xì)胞內(nèi).如淀粉酶水解淀粉為小分子的糊精,雙糖和單糖；而淀粉遇碘液會產(chǎn)生藍(lán)色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，則能利用其四周的淀粉，在淀粉培育基上培育用碘辦理其菌落四周不呈藍(lán)色，而是無色透明圈，據(jù)此可分辨微生物能否產(chǎn)生淀粉酶。油脂的水解：在油脂培育基上接種細(xì)菌，培育一段時間后察看菌苔的顏色，若出現(xiàn)紅色斑點，則說明其中菌可產(chǎn)生疏解油脂的酶。糖發(fā)酵試驗：糖發(fā)酵試驗是常用的鑒識微生物的生化反響,在腸道細(xì)菌的判斷上特別重要.絕大部分細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源,但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大的差別.有些細(xì)菌能分解某種糖產(chǎn)生有機酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)平和體(如氫氣,甲烷,二氧化碳等);有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.比方大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。產(chǎn)酸后再加入溴甲酚指示劑后會使溶液呈黃色，且德漢氏小管中會采集到一部分氣體。若細(xì)菌不可以使糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則最后溶液為指示劑的紫色，且德漢氏小管中無氣體。5.imvc實驗主要用于迅速鑒識大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌。1）吲哚試驗：是用來檢測吲哚的產(chǎn)生，在蛋白胨培育基中，若細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，則可將蛋白胨中的色氨酸分解為丙酮酸和吲哚，吲哚與對二甲基苯甲醛反響生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但其實不是所有的微生物都擁有分解色氨酸產(chǎn)生吲哚的能力，因此吲哚實驗可以作為一個生物化學(xué)檢測的指標(biāo)。大腸桿菌吲哚反響陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。2）甲基紅試驗（mr）：某些細(xì)菌在糖代謝過程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者從而被分解產(chǎn)生甲酸，乙酸和乳酸等多種有機酸，培育基就會變酸，使加入培育基中的甲基紅指示劑由橙黃色轉(zhuǎn)變成紅色，即甲基紅反響。大腸桿菌為陽性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。四、【實驗步驟】1.淀粉水解實驗1）倒平板：依據(jù)淀粉培育基配方配制固體淀粉培育基，滅菌，待培育基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰旁倒平板，每組兩個平板。（2）用記號筆在平板底部劃成四部分。3）接種：在無菌操作臺上，將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌分別在不同的部分點種，如圖一所示，注意僅用接種針接觸很少面積的培育基，在平板的反面對應(yīng)部分貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上分別寫上菌名，免得混雜。（4）培育：將平板倒置，在28℃溫箱中培育兩天。5）察看：拿出培育基，察看各樣細(xì)菌的生長狀況，翻開平板蓋子，滴入少量盧戈氏碘液于平板中，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪滿整個平板，察看培育皿中菌落四周能否有無色透明圈，如有無色透明圈出現(xiàn)，說明淀粉已經(jīng)被水解，為陽性，反之則為陰性。記錄實驗結(jié)果。圖一：淀粉水解試驗接種表示圖圖二：油脂水解試驗接種表示圖2.油脂水解試驗1）倒平板：依據(jù)油脂培育基配方配制固體油脂培育基，滅菌，待培育基冷卻至50℃左右，充分振蕩，使油脂均勻散布，在酒精燈火焰下倒平板，每組兩個平板。（2）用記號筆在在平板底部劃成四部分。3）接種：在無菌操作臺大將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌分別劃十字線接種于平板相對應(yīng)部分的中心，如圖二所示，并貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽上注明菌種的名稱。（4）培育：將平板倒置，在28℃溫箱中培育兩天。5）察看：拿出平板，察看菌苔顏色，假如出現(xiàn)紅斑點，說明脂肪水解，為陽性反響。記錄實驗結(jié)果。3.葡萄糖發(fā)酵實驗1）培育基的配制：依據(jù)糖發(fā)酵培育基配置葡萄糖發(fā)酵培育基，分裝至試管中，用膠頭滴管往德漢氏小管中注滿培育基，再把德漢氏小管倒置放入試管中，注意不要讓德漢氏小管中進入空氣，每組五只試管，滅菌。2）接種：待培育基冷卻至常溫時，在無菌操作臺上，取葡萄糖發(fā)酵培育基試管2支接入大腸桿菌，再取兩只接入一般變形桿菌，接種后輕搖試管，使其均勻，防備倒置的小管進入氣泡，第五支不接種，作為比較。在各試管外壁上貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上分別注明發(fā)酵培育基的名稱和所接種的細(xì)菌菌名。3）培育：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培育箱中于28℃下培育兩天。（4）察看：察看各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡，并記錄實驗結(jié)果。4.乳糖發(fā)酵實驗1）培育基的配制：依據(jù)糖發(fā)酵培育基配置乳糖發(fā)酵培育基，分裝至試管中，用膠頭滴管往德漢氏小管中注滿培育基，再把德漢氏小管倒置放入試管中，注意不要讓德漢氏小管中進入空氣，每組五只試管，滅菌。2）接種：待培育基冷卻至常溫時，在無菌操作臺上，取乳糖發(fā)酵培育基試管2支接入大腸桿菌，再取兩只接入一般變形桿菌，接種后輕搖試管，使其均勻，防備倒置的小管進入氣泡第五支不接種，作為比較。在各試管外壁上貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽上分別注明發(fā)酵培育基的名稱和所接種的細(xì)菌菌名。（3）培育：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培育箱中于28℃下培育兩天。（4）察看：察看各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡，并記錄實驗結(jié)果。5.吲哚試驗1）培育基的配制：依據(jù)蛋白胨水培育基配方配制培育基，分裝至試管中，每組五只試管，在高壓蒸氣鍋內(nèi)滅菌。（2）接種：待培育基冷卻后，在無菌操作臺大將大腸桿菌接入2支蛋白胨水培育基，產(chǎn)氣腸桿菌接入2支蛋白胨水培育基，節(jié)余一只試管不接種，作為空白比較，貼好標(biāo)簽。3）培育：把接種后的試管放在試管架上，把試管連同試管架放入培育箱中于28℃下培育兩天。（4）察看：往培育后的蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)加入3~4滴乙醚，搖動數(shù)次，靜置1min，待乙醚上漲后，沿試管避漸漸加入2滴吲哚試劑。在乙醚和培育物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反響。察看加入試劑后試管內(nèi)的