淺論p53和Rb與胃癌組織學分型的關(guān)系

淺論p53和Rb與胃癌組織學分型的關(guān)系【摘要】目的：探討p53和Rb蛋白在不同組織學分型胃癌中的表達及意義。方法：采用免疫組化SP二步法檢測216例胃癌術(shù)后原發(fā)灶標本和80例癌旁正常的胃黏膜組織標本中p53及Rb蛋白的表達情況。胃癌標本按組織學特點分為：高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌、印戒細胞癌、未分化癌五型。結(jié)果：①正常胃黏膜和胃癌標本中p53的陽性表達率分別為0、%(P);Rb的陽性表達率分別為100%、%(P)。②不同組織學分型的胃癌中，癌細胞分化程度越好，p53的陽性表達率越低(P)，Rb的陽性表達率也越高(P)。③在胃癌中p53和Rb的蛋白表達無相關(guān)性(P)。結(jié)論：p53蛋白及Rb蛋白陽性表達在不同組織學分型的胃癌中差異呈顯著性;胃癌細胞分化程度越差，p53的陽性表達率越高，Rb的陽性表達率越低，但兩者并無關(guān)聯(lián)性。

【關(guān)鍵詞】胃腫瘤;p53;Rb;免疫組化;組織學分型;細胞分化

Abstract:Objective:Toexploretheexpressionofp53andRbproteiningastricneoplasmswithdifferenthistologicaltypesandtheirsignificance.Methods:Twohundredandsixteencasesofgastricneoplasmsspecimensand80normaladjacentgastricmucosaltissueswerecollected.Theexpressionofp53andRbwasexaminedwithimmunohistochemicalstaining(SPmethod).Accordingtothehistologicaltypes，gastricneoplasmsspecimensweredividedintofivegroups:well-differen-tiatedadenocarcinoma，moderate-differentiatedadenocarcinoma，poor-differentiatedadenocarcinoma，muci-nousadenocarcinomaandsignet-ringcellcarcinomaandanaplastic:①P53wasnoexpressioninnormalgastricmucosa，andwas%ingastricneoplasms(P).ThepositiverateofRbwas100%innormalgastricmucosa，andwas%ingastricneoplasms(P).②Theexpressionofp53wasnegativelyrelatedtothedifferentiationindifferenthistologicaltypesofgastricneoplasms(P)，buttheexpressionofRbwaspositivelyrelatedtothat(P).③Theexpressionofp53wasnotcorrelatedwithRbingastricneoplasms(P).Conclusion:Thepositiveexpressionofp53andRbingastricneoplasmswithdifferenthistologi-caltypesofferssignificantdifference.Thecytodifferentiationofgastricneoplasmsispoorer，thepositiverateofp53ishigherandthepositiverateofRbislower.Thesuppressorgenep53isnotcorrelatedwithRbinthecourse.

Keywords:gastricneoplasms;p53;Rb;immunohistochemistry;histologicaltype;cytodifferentiation

胃癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，發(fā)生機制較為復雜，涉及一系列遺傳學改變，現(xiàn)有研究表明其發(fā)生、發(fā)展與抑癌基因的突變、失活或缺失有關(guān)[1]。p53、Rb是重要的抑癌基因，它們的表達異常會導致癌瘤的生成與發(fā)展。有報道稱，p53基因的失活在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中起了關(guān)鍵作用。Rb蛋白表達能夠反映胃癌的進展程度，可以作為胃癌判斷預后的指標。因此，從分子或蛋白水平上尋找與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)的標志物，有助于胃癌的診斷。本研究通過免疫組織化學技術(shù)檢測p53、Rb蛋白在五種不同分型胃癌和正常胃黏膜組織中的表達情況，探討其在不同組織學分型胃癌發(fā)生、發(fā)展中的意義。

1材料和方法

材料

標本取自溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院2004年7月-2008年2月手術(shù)治療初診為胃癌的216例病例標本(胃癌組)，男144例，女72例;年齡27～89歲，平均(±)歲。伴有周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移145例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移71例。經(jīng)病理組織學證實癌旁5cm外正常的胃黏膜組織標本80例(正常胃黏膜組織組)，其中男59例，女21例，年齡30～75歲，平均(±)歲。所有研究對象受檢前均未經(jīng)放療、化療等治療。按UICC2002年TNM分類和分期法對本組胃癌病例進行分期，I期39例，II期44例，III期101例，IV期32例。標本經(jīng)10%的福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切取厚4μm切片，60℃烤片1h，37℃過夜備用。

方法

采用SP二步法進行免疫組化染色，組織切片脫臘至水;用3%的H2O2去離子水孵育10min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求，分別進行高壓和微波的抗原修復;冷卻至室溫，滴加一抗，在4℃冰箱中過夜;滴加通用型二抗IgG璈RP多聚體，37℃烘箱中孵育10min;二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，水洗;蘇木素復染、脫水、封片。陰性對照用PBS代替一抗，用已知的陽性片作陽性對照，顯微鏡觀察。p53、Rb鼠抗人單克隆抗體和通用型二抗、DAB顯色劑均購自北京中杉公司(進口分裝，即用型)。

判斷標準

p53、Rb陽性定位于細胞核。根據(jù)腫瘤陽性細胞數(shù)將其分為4級：≤10%，11%～50%，51%～75%，75%;再根據(jù)染色強度打分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色(染色深淺需與背景著色相對比)，兩者乘積3分為陽性。同時，根據(jù)胃癌在顯微鏡下的組織學特點，參照WHO胃癌分類標準將其分為五型：高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒細胞癌、未分化癌。

統(tǒng)計學處理方法

采用x2檢驗。

2結(jié)果

p53、Rb蛋白在胃癌組織中的表達

胃癌組p53蛋白的陽性表達率顯著高于正常胃黏膜組()，而Rb蛋白的陽性表達率顯著低于正常胃黏膜組()。見表1。

不同組織學分型胃癌中p53、Rb蛋白的陽性表達

p53和Rb都以細胞核呈棕黃(褐)色顆粒為陽性，未見棕黃(褐)色顆粒為陰性。見圖1、2。隨著病理分化程度的進展及病理組織學分型惡性程度的增高，分別表現(xiàn)為p53蛋白表達升高和Rb蛋白的陽性表達率降低，各型胃癌的p53、Rb的陽性表達率差異均有顯著性(P)。見表2。

p53、Rb蛋白在胃癌中表達的相關(guān)性

p53、Rb均為抑癌基因，兩者蛋白在胃癌中均有不同程度的表達，其表達情況p53陽性組145例中Rb陽性72例，Rb陰性73例;Rb陽性組112例中p53陽性72例，p53陰性40例。經(jīng)x2檢驗，連續(xù)性校正，x2=，。

3討論

p53基因是目前研究最系統(tǒng)的抑癌基因之一，據(jù)報道大約在60%的人類腫瘤中，發(fā)現(xiàn)有p53基因的突變和缺失。野生型p53蛋白在正常細胞中幾乎檢測不到，而突變型p53穩(wěn)定性增加，導致細胞無控制性生長，最終發(fā)展成惡性腫瘤，免疫組織化學技術(shù)所測的p53即為突變型，是胃腸腫瘤預后差的標志。Tohdo等認為p53基因突變與原發(fā)性胃癌的發(fā)生有關(guān)，是胃癌發(fā)生過程中的早期事件。本實驗結(jié)果提示，p53蛋白在胃癌組織中陽性表達率為%，隨著病理分化程度的進展，p53蛋白表達升高，差異有顯著性(P)，而在正常的胃黏膜組織中沒有表達，提示p53蛋白異常表達與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，檢測異常的p53蛋白可能作為鑒別正常胃組織和胃癌組織的常規(guī)方法。結(jié)果還提示，p53蛋白的陽性表達率在低中分化及黏液腺癌、印戒細胞癌明顯高于高分化腺癌，提示p53基因突變可能是胃癌發(fā)生發(fā)展的一個重要環(huán)節(jié)，檢測p53蛋白表達在判斷胃癌惡性程度和預后方面有輔助作用。

Rb基因是最先在視網(wǎng)膜母細胞瘤中發(fā)現(xiàn)的一類抗癌基因。Rb蛋白在G0及G1期細胞內(nèi)主要以非磷酸化的活性形式存在并與多種細胞蛋白結(jié)合，從而抑制其活化轉(zhuǎn)錄功能，因而具有G1期阻滯作用。當Rb基因發(fā)生缺失與重排時，G1期阻滯作用減弱，使細胞過度增殖，導致腫瘤的發(fā)生。本組實驗檢測了216例胃癌病例與80例正常胃黏膜組織中的Rb蛋白，其陽性率分別為%和100%，二者差異有顯著性(P)，提示Rb基因的表達缺失和突變可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。實驗結(jié)果還顯示，隨著病理組織學分型惡性程度的增高，Rb蛋白的陽性表達降低，低分化腺癌、黏液腺癌及未分化癌中的Rb蛋白表達低于高、中分化腺癌(P)，表明抑癌基因Rb的表達程度同癌細胞的分化程度有關(guān)，癌細胞分化越好，Rb陽性表達率越高，提示Rb蛋白的低表達在胃癌向不同分化方向發(fā)展方面可能起重要作用。Cordon等研究認為p53和Rb相互協(xié)同，共同影響細胞的增生狀況和癌變。Mattar等研究提示，p53蛋白異常在由高分化向低分化發(fā)展的不同組織學類型胃癌中起關(guān)鍵作用，而Rb基因失活在胃癌中不起重要作用，并且提示p53及Rb基因在胃癌的發(fā)生發(fā)展中無相關(guān)性，沒有協(xié)同作用。我們的實驗結(jié)果顯示，216例胃癌中，p53及Rb基因同時陽性表達有72例，同時2個基因均不表達有32例，同時表達p53陽性而Rb陰性有73例，同時表達p53陰性而Rb陽性有40例，差異無顯著性(P)，說明p53、Rb基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用是相互獨立的，二者沒有關(guān)聯(lián)性。目前也鮮有文獻報道p53、Rb基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中具有相關(guān)性，對于兩者是否與其他抑癌基因共同參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展尚有待于進一步研究

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Cordon-CardoC.