紙色譜法實(shí)驗報告

文檔從網(wǎng)絡(luò)中收集，已重整理排版文檔從網(wǎng)絡(luò)中收集，已重整理排版.word版本可編輯..11:..紙色譜法試驗報告篇一：試驗六紙層析法觀看轉(zhuǎn)氨基作用試驗報告試驗六紙層析法觀看轉(zhuǎn)氨基作用09救援一班第三大組李嵐宇XX222336室溫：28°〔一〕試驗?zāi)康模?、學(xué)習(xí)氨基酸紙層析的根本原理。2、把握氨基酸紙層析的操作原理。〔二〕試驗原理：轉(zhuǎn)氨基作用是氨基酸代謝過程中的一個重要反響，在轉(zhuǎn)氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸與α-酮基的互換反響稱為轉(zhuǎn)氨基作用。轉(zhuǎn)氨基作用廣泛地存在于機(jī)體各組織器官中，是體內(nèi)氨基酸代謝的重要途徑。氨基酸反響時均由專一的轉(zhuǎn)氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基轉(zhuǎn)移到另一α－酮基酸上。各種轉(zhuǎn)氨酶的活性不同，其中肝臟的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶〔ALT〕催化如下反響：α—酮戊二酸+丙氨酸谷氨酸+丙酮酸本試驗以丙氨酸和α-酮戊二酸為底物，加肝勻漿保溫后，用紙層析法檢查谷氨酸的消滅，以證明轉(zhuǎn)氨基作用。紙層析屬于安排層析。以濾紙為支持物，濾紙纖維與水親合力強(qiáng)，水被吸附在濾紙的纖維素的纖維之間形成固定相。有機(jī)溶劑與水不相溶，把預(yù)分別物質(zhì)加到濾紙的一端，使流淌溶劑經(jīng)此向另一端移動，這樣物質(zhì)隨著流淌相的移動進(jìn)展連續(xù)、動態(tài)的不斷安排。由于物質(zhì)安排系數(shù)的差異，而使移動速度就不一樣，在固定相中，安排趨勢較大的組分，隨流淌相移動的速度就慢，反之，在流淌相安排趨勢較大的成分，移動速度快，最終不同的組分彼此分別，物質(zhì)在紙上移動的速率Rf????ALT物質(zhì)在肯定的溶液中的安排系數(shù)是肯定的，故比值RfRf的物質(zhì)。試劑：1、0.01mol/LpH7.42、0.2mol/LNa2HPO4溶液81ml與0.2mol/LNaH2PO419ml2030.1mol/L丙氨酸溶液稱取丙氨酸0.891克,先溶于少0.01mol/LpH7.41.0NNaOH仔細(xì)調(diào)至pH7.4100ml。40.1mol/Lα－酮戊二酸稱取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/LpH7.41.0NNaOHpH7.4100ml。5、0.1mol/L0.735少量0.01mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液中，以1.0NNaOH認(rèn)真調(diào)至pH7.450ml。6、0.50.5100ml溶解。7、層析溶劑：將重蒸過的酚2份和水1份按比例混合24酚層轉(zhuǎn)移到瓶中備用。儀器：玻璃勻漿器、10ml試管、培育皿、外表皿、沸水浴鍋、37℃恒溫水浴箱、9cm液漏斗。〔四〕試驗步驟:1、肝勻漿制備：取穎動物肝0.5克,剪碎后放入勻漿0.01mol/LpH7.41.0ml,快速研成4.5ml2〔測定管〔比照管各加肝勻漿0.5ml。把比照管放沸水浴中加熱10分鐘，取出冷卻。0.1mol/L丙氨酸0.5ml,0.1mol/Lα-酮戊0.5ml,0.01mol/LpH7.41.5ml,搖勻?！?〕37℃保溫，30〔4〕把測定管放沸水浴中煮10分鐘，取出后冷卻，過濾。3、層析取圓形濾紙一張〔直徑9cm〕放潔白紙上，以圓點(diǎn)1cm四等份處標(biāo)清四點(diǎn)編號作為點(diǎn)樣原點(diǎn)。點(diǎn)樣：用四根毛細(xì)玻璃管分別進(jìn)展點(diǎn)樣。把丙氨2、4分別點(diǎn)在原點(diǎn)1、3處。留意斑點(diǎn)不宜過大〔應(yīng)在直徑0.5cm以下。在第一次點(diǎn)樣點(diǎn)干后，再在原處同樣點(diǎn)第2層析：先在濾紙圓心處打一小孔〔鉛筆芯粗細(xì)〕，再取濾紙一條卷成捻如燈芯狀,上端插入濾紙中心孔中，下端剪成須狀。把濾紙平放在上述培育皿上，使紙芯下浸入層析液中，蓋上培育皿蓋?？梢妼游鲆貉丶埿旧仙綖V紙中心，1cm時，約25分鐘，取出濾紙，用鑷子留神取下紙芯，放入烘箱中烘干。顯色：將上述濾紙平放在培育皿上，滴0.5％茚三酮的丙酮溶液，使濾紙全部潮濕，再放入烘箱枯燥，此時可Rf值，分析是否發(fā)生了轉(zhuǎn)氨基反響?！参濉吃囼灲Y(jié)果記錄：圖〔1〕〔六〕試驗爭論：1、從表格〔1〕中可以看出，測定管上清液點(diǎn)樣消滅了Rf發(fā)生了轉(zhuǎn)氨基作用，生成的未知物質(zhì)b為谷氨酸，則未知溶質(zhì)a為丙氨酸；比照管中由于酶的失活而沒有發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反響，只有丙氨酸，所以色斑只有一個。2以免污染。3、層析液中含有腐蝕性酚，取用時留意安全，防止濺到皮膚及眼睛。40.5cm.XX919氨基酸的紙層析法一．目的了解并把握氨基酸紙層析的原理和方法。二、原理以濾紙為支持物的層析法，稱為紙層析法。紙層析所用展層劑大多由水和有機(jī)溶劑組成。展層時，水為靜止相，他與濾紙纖維親和力強(qiáng)；有機(jī)溶劑為流淌相，它與濾紙纖維親和力弱。有機(jī)溶劑在濾紙上又下向上移動的，稱為上行法；有上向下移動的，稱為下行法。將樣品在濾紙上確定的原點(diǎn)處展層，由于樣品中各種氨基酸在兩相中不斷進(jìn)展安排，且他們的分別系數(shù)各不一樣，所以不同的氨基酸隨流淌相移動的速率也不一樣，于是各種氨基酸在濾紙上就相互分別出來，形成距原點(diǎn)不等的層析點(diǎn)。在肯定條件下〔室溫、展層劑的組成、濾紙的質(zhì)量、PH值等不變〔Rf值〕Rf=原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離。用混合氨基酸做樣品時，假設(shè)只用一種溶劑展層，由于某些氨基酸的移動速率一樣或相近，就不能將它們分開，為此，當(dāng)用一90為原點(diǎn)，在用另一溶劑展層，從而到達(dá)分別的目的。這種方法稱為雙向?qū)游龇?。本試驗主要介紹的是單向?qū)游龇?。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸組成。12345671〔精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸〕212%氨水：95%乙醇：蒸餾水=13：3：3：1〔v:v〕30.5%茚三酮—無水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml無水丙酮，貯于棕色瓶中五、試驗步驟120×10系一根細(xì)線，在另一端2~3cm處用鉛筆畫一橫線，中間畫一圓點(diǎn)〔原點(diǎn)。2、取毛細(xì)管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原點(diǎn)處點(diǎn)樣，樣點(diǎn)直徑不宜超過5mm2~33、點(diǎn)樣(原文來自：xiaOcAofANweN文網(wǎng):紙色譜法試驗報告)后將濾紙放入層析缸中展層，留意點(diǎn)樣線要高于層析液面，濾紙不要貼在層析缸璧上，當(dāng)展1~2cm〔2~3。4、取出濾紙，用鉛筆登記溶劑前沿，然后用熱風(fēng)吹干〔60℃〕烘干。5不連續(xù)。6、用吹風(fēng)機(jī)吹干，觀看層析點(diǎn)，確定其幾何中心。7、量取數(shù)值，計算各自的Rf值，與表中標(biāo)準(zhǔn)氨基酸Rf〔書上圖譜橫著看〕六．試驗結(jié)果H1=1.0cmH2=4.4cmH3=5.0cmH4=0.99cmH=11.7cm由此可得Rf1=0.08547Rf2=0.37607Rf3=0.42735Rf4=0.08461據(jù)此可知，混合氨基酸是由甘氨酸〔Gly〕和苯丙氨酸〔Phy〕組成。七．試驗分析試驗中消滅了拖尾的現(xiàn)象。拖尾現(xiàn)象是指展層，顯色后在層析安排圖上，所看到的某一種氨基酸的分子位移，不是如標(biāo)準(zhǔn)圖譜所示的那樣，完整地顯示在某一位置上，而是形成象笤帚似的那樣，前端粗圓而漸漸細(xì)小下來，如同拖著一個尾巴。其圖所呈顏色也是由濃漸淡。Rf值的主要因素要求，Rf析溶劑對Rf值的影響，PH對Rf值的影響(溶劑、濾紙和樣品的PH值)，溫度對Rf值的影響，濾紙的質(zhì)地是否均勻，RfRfRf都仍不行避開地要消滅拖尾現(xiàn)象。此時，這就需要從具體操作標(biāo)準(zhǔn)方面，諸如樣品的處理，點(diǎn)樣、展層、顯色等幾個操作程序去考慮思考，經(jīng)認(rèn)真分析，樣品的處理是為除去雜質(zhì)純化樣品，到達(dá)層析分Rf值的主要因素要求下進(jìn)展，使樣品到達(dá)一個適當(dāng)?shù)奈灰?，便于在顯色后從圖象上，區(qū)分不同樣品的氨基酸；顯色是在用更何況顯色劑又是含水量極低，不會影響洋品的斑點(diǎn)集中，那么問題就集中在點(diǎn)樣這個操作程序上了。點(diǎn)樣是將被層析安排的幾種氨基酸混合液，和為了比照試驗結(jié)果，而分別配制的幾種氨基酸的溶液，用微量點(diǎn)樣管或毛細(xì)管，或血球計數(shù)器將5一j5微升的樣品，點(diǎn)在以濾紙為惰性支持物的層析紙上設(shè)計好的多點(diǎn)位置中去。點(diǎn)樣后要自然風(fēng)干，或冷風(fēng)吹干。最好不要用加熱裝置，如吹風(fēng)機(jī)，燈泡之類的熱源將其樣品點(diǎn)加速枯燥。由于加熱裝置在學(xué)生操作時，一但留意不夠，把握不好，則溫度上升勢必要使樣品破壞，更會使佯品點(diǎn)干的太燥。正是由于這樣，樣品點(diǎn)太枯燥，使其樣品物樣品點(diǎn)的每個物質(zhì)分子，不能在層析紙上同時起步，而是形成了有先有后，魚貫而上行或下行的狀況，最終使洋品