分子生物學(xué)知識點

一、名詞解釋：基因DNARNA基因表達因的激活、轉(zhuǎn)錄、翻譯以及相關(guān)的加工修飾等多個步驟或過程。管家基因GAPDH、β因。啟動子：是指位于基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游、能夠與RNADNA操縱子操縱序列等。如：乳糖操縱子、色氨酸操縱子等。反式作用因子而參與調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄的蛋白因子（轉(zhuǎn)錄因子。順式作用元件DNA列。是轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點，通過與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合而實現(xiàn)對真核基因轉(zhuǎn)錄的精確調(diào)控。Ct值：即循環(huán)閾值（cyclethreshold，Ct，是指在PCR物的熒光信號達到設(shè)定的熒光閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（PCR存在線性對數(shù)關(guān)系，由此可以對擴增樣品中的目的基因的模板量進行準確的絕對和（或））核酸分子雜交：是指核酸分子在變性后再復(fù)性的過程中，來源不同但互不配對的核酸單鏈（包括DNARNA）特性或現(xiàn)象，依據(jù)此特性建立的一種對目的核酸分子進行定性和定量分析的技術(shù)則稱為分子雜交技術(shù)。至尼龍膜等支持載體上的一種方法，該技術(shù)類似于用吸墨紙吸收紙張上的墨跡。酸片段。DNADNADNADNA有這些分子中的插入片段的總和，可代表某種生物的全部基因組序列或全部的mRNADNAcDNA克?。菏莵碜酝皇甲娴南嗤北净蚩截惖募?。DNADNADNA基因工程（GeneticEngineering：又稱基因操作（genemanipulation、DNA重組DNArecombination的藍圖，將一種或多種生物體（供體）的基因育載體在體外進行拼接重組構(gòu)建成DNA（受體）內(nèi)，以改變生物原有的遺傳特性并表達出新的性狀。獲得新品種，生產(chǎn)新產(chǎn)品，或是研究基因的結(jié)構(gòu)和功能。因此，供體、受體和載體稱為基因工程的三大要素，其中相對于受體而言，來自供DNA可以將基因工程表征為分子克?。∕olecularCloning）或基因的無性繁殖。DNA生長因子（growthfactor）部，調(diào)節(jié)細胞生長與增殖的多肽類物質(zhì)。基因組：泛指一個生命體、病毒或細胞器的全部遺傳物質(zhì)。胞或組織在翻譯水平的蛋白質(zhì)表達譜。198630及其表達水平是否正常，從而對人體狀態(tài)和疾病做出診斷的方法。揮作用而達到治療疾病目的的方法均稱為基因治療。DNARNA癌基因（oncogene）達異常，可以引起細胞癌變。病毒癌基因：存在于腫瘤細胞中，能使靶細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。抑癌基因化，和抑制細胞遷移，因此起負調(diào)控作用，抑癌基因的突變是隱性的（）DNA二、問答題轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)——操縱子調(diào)控模式基因、啟動序列、操縱序列等。如：乳糖操縱子、色氨酸操縱子等。IO、一個PZYA。其中調(diào)節(jié)基因I（CAP）Z、YA其調(diào)節(jié)機制主要有正性和負性兩種模式。①阻遏蛋白的負性調(diào)節(jié)：當沒有乳糖時，調(diào)節(jié)基因表達生成阻遏蛋白，阻遏蛋白結(jié)合操縱子序列出，阻礙RNA結(jié)合酶與啟動序列結(jié)合，抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄啟動，此時操縱子處于阻遏狀態(tài)；當有半乳糖存在時，乳糖首先被轉(zhuǎn)變成半乳糖，半乳糖則作為一種誘導(dǎo)劑與阻遏蛋白結(jié)合，誘發(fā)蛋白質(zhì)構(gòu)象改變，使阻遏蛋白從啟動序列上解離下來，從而啟動結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，此時操縱子處于誘導(dǎo)狀態(tài)。②CAPCAPcAMPCAP③協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：實際情況下，上述兩種調(diào)節(jié)方式是相輔相成、相互協(xié)調(diào)的。譬如：在無乳糖且有葡萄糖時，阻遏蛋白負性調(diào)節(jié)起作用，此時結(jié)構(gòu)基因不被轉(zhuǎn)錄；在有乳糖且有葡萄糖時，阻遏蛋白負性調(diào)節(jié)不起作用，此時結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄水平低；結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平最高。生長因子的作用機制同的響應(yīng)，生長因子是作用機制分為三種情況：①生長因子與具有酪氨酸蛋白激酶（TPK）活性的跨膜受體結(jié)合，TPK被活化，磷酸化相應(yīng)蛋白質(zhì)，產(chǎn)生生理效應(yīng)。因轉(zhuǎn)錄，達到調(diào)節(jié)生長與分化的作用。與膜受體結(jié)與胞內(nèi)受體胞生長。與膜受體結(jié)與胞內(nèi)受體活化酪氨酸激

生長因子作用機制示意圖產(chǎn)生第二信生長因子-受體復(fù)常規(guī)PCR生長因子-受體復(fù)

活化蛋白激DNA核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子活

激活胞核相關(guān)PCR由變性——退火——延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。（denatureDNA經(jīng)加熱至95DNAPCRDNA②退火annealing（復(fù)性：模板DNATm（55℃左右DNA交鏈。③延伸（extension：DNA模板-引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模DNA2~4302~3DNA貝。定量PCRPCRPCRPCRPCR反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號強度達到設(shè)定閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（即Ct）和（或）相對定量。循環(huán)閾值（cyclethreshold，Ct）PCR信號達到設(shè)定的熒光閾值所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。熒光閾值（threshold）PCR15（baseline3~15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10實際上就是熒光信號開始由本底信號進入指數(shù)增長階段的拐點時的熒光信號強度。SangerSanger法也稱雙脫氧鏈末端終止法，是目前應(yīng)用最為廣泛的方法。DNAddNTPdNTPDNADNAddNTPDNA由于ddNTP3'5'-位磷3',5'DNAddNTPSouthernNorthern相同點：基本流程相似不同點：SouthernSouthern（雜交）Northern（雜交）用途主要用于檢測基因組主要用于檢測RNADNA事先進行限制性內(nèi)切酶需要不需要，可直接電泳處理進行堿變性需要不需要，采而是用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳基因工程中如何選擇載體？基因工程選擇載體的標準如下：①能自主復(fù)制②具有兩個以上的遺傳標記物，便于重組體的篩選和鑒定③有克隆位點（外源DNA插入點DNA重組DNA重組DNA技術(shù)的基本操作過程可形象的歸納為“分、切、接、轉(zhuǎn)、篩DNADNAcDNAPCRDNADNADNA重組DNA分子導(dǎo)入相應(yīng)宿主細胞后，隨受體細胞生長、增殖而得以復(fù)制、擴增。⑤重組體的篩選根據(jù)載體體系、宿主細胞特性及外源基因在受體細胞表達情況，采取直接選擇法和非直接選擇法進行篩選，獲得含有重組DNA分子的克隆。⑥克隆基因的表達。克隆的目的基因如果需要正確而大量表達有特殊意義的蛋白質(zhì)，則需要建立相應(yīng)的表達體系，包括表達載體的構(gòu)建、受體細胞的建立及表達產(chǎn)物的分離、純化等。目前基因治療采用的方法分為哪幾種？基因治療的方法分為以下：①基因矯正，將致病基因的異常堿基進行糾正，而正常部分予以保留的基因治療方法；②基因置換，用正常的基因通過體內(nèi)基因同源DNA治療方法；③基因增補，將目的基因?qū)氩∽兓蚱渌毎蝗コ惓；?，通過目的基因的非定點整合，使其表達產(chǎn)物補償缺陷基因的功能或使原有的功能得以加強的基因治療方法；④基因失活，將特定的序列導(dǎo)入細胞后，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平阻斷某些基因的異常表達的治療方法；⑤自殺基因的應(yīng)用，用某些病毒或細菌的基因所表達的酶能將對人體無毒或低毒的藥物前體在人體細胞內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎拘援a(chǎn)物，從而導(dǎo)致攜帶該基因的受體細胞也被殺死，故稱這類基因為“自殺基基因治療的基本過程？內(nèi)，將治療基因修飾的細胞以不同的方式回輸體內(nèi)以發(fā)揮治療作用。人類基因組計劃的基本任務(wù)及意義HCGHCG、序列圖。①遺傳圖：又稱連鎖圖，是具有遺傳多態(tài)性的遺傳標記作RFLP、VNTRSNP。②物理圖譜：是以一段已知核苷酸的DNA片段DNA實際長度（Mbkb）作為圖距的基因組圖。③5cDNA這四張圖被譽為人類“分子水平上的解剖圖”或“生命元素周期表性。因醫(yī)學(xué)的新時代；③推動模式生物基因組的研究；④促進學(xué)科交叉與重組。什么是基因組學(xué)？包括哪些內(nèi)容？基因組學(xué)于1986年被首次提出，以“人類基因組計劃”為誕生標志，由“后基因組計劃”的實施推動其發(fā)展的一門學(xué)科?；蚪M學(xué)的內(nèi)容亞領(lǐng)域 內(nèi)容結(jié)構(gòu)基因組學(xué)