果蠅資源庫(kù)管理方法研究

果蠅資源庫(kù)管理方法研究徐龍梅吳薇（果蠅資源與技術(shù)平臺(tái)）對(duì)于每一個(gè)以果蠅為模式動(dòng)物來(lái)開(kāi)展研究的實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，果蠅資源庫(kù)的管理是研究的基礎(chǔ)，也是重中之重。果蠅資源與技術(shù)平臺(tái)（以下簡(jiǎn)稱“平臺(tái)”）現(xiàn)有約16000個(gè)品系的龐大果蠅資源庫(kù)，3年來(lái)，我對(duì)如何管理好果蠅資源庫(kù)進(jìn)行深入研究，總結(jié)出一套行之有效的管理方法。文中我主要從果蠅資源的搜集、入庫(kù)前的準(zhǔn)備、入庫(kù)后的日常管理及果蠅資源庫(kù)管理交接這四個(gè)方面來(lái)闡述這套管理方法。一：果蠅資源的搜集每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有自己需要的果蠅品系，可以自己制備，也可以和兄弟實(shí)驗(yàn)室分享，還可以從國(guó)際果蠅資源中心訂購(gòu)，常用的有美國(guó)的bloomington、奧地利的VDRC、瑞士的FlyORF、日本的NIG和Kyoto等。但原則是正確，對(duì)于所搜集的果蠅最重要的一件事是確定其是否正確，否則會(huì)影響到以后所有的實(shí)驗(yàn)。可以通過(guò)肉眼觀察、PCR方式等檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)。檢測(cè)正確的果蠅就可以作為實(shí)驗(yàn)室果蠅資源庫(kù)的一員了。二：入庫(kù)前的準(zhǔn)備和入庫(kù)須知新搜集的果蠅，檢測(cè)正確后，需要先在隔離間經(jīng)過(guò)一系列純化處理方可入庫(kù)。第一步：果蠅資源庫(kù)清潔。將新建的果蠅資源庫(kù)（房間或培養(yǎng)箱）徹底地清潔、除蟲(chóng)、消毒。先用紫外燈輻照消毒2h，然后在地面和空架子上噴灑75%的酒精或除蟲(chóng)劑擦拭。如果環(huán)境中曾出現(xiàn)過(guò)螨蟲(chóng)、細(xì)菌和真菌等有害生物，可噴灑強(qiáng)效殺蟲(chóng)劑悶殺，次日通風(fēng)后才能引入果蠅。第二步：搜集的果蠅先在正常的25℃培養(yǎng)，觀察果蠅長(zhǎng)勢(shì)，有無(wú)螨蟲(chóng)、細(xì)菌或真菌等有害生物。有有害生物的果蠅需進(jìn)行純化，正常每隔1-2d轉(zhuǎn)一次新管，3~5次后正常培養(yǎng)。第一代果蠅出成蟲(chóng)后繼續(xù)重復(fù)上述步驟，直至果蠅長(zhǎng)勢(shì)良好，沒(méi)有有害生物方可入庫(kù)。第三步：入庫(kù)，正?；铙w保種的溫度是18℃，經(jīng)過(guò)純化后入庫(kù)的果蠅需要及時(shí)觀察，有些溫度敏感型果蠅及時(shí)取出，置于25℃保種。第四步：建立電子檔案?，F(xiàn)常用辦公軟件MicrosoftOfficeExcel將收到的每一個(gè)果蠅品系編號(hào)，按順序排列，每一個(gè)編號(hào)有對(duì)應(yīng)的基因型等信息，需要時(shí)從表中查找后有的就可以用，一目了然。三：入庫(kù)后的日常管理果蠅資源庫(kù)的日常管理包括環(huán)境控制、繼代培養(yǎng)和果蠅資源庫(kù)電子檔案的實(shí)時(shí)更新等。環(huán)境控制環(huán)境控制主要包括溫度、濕度、光照和清潔四個(gè)方面。溫度均衡是理想狀態(tài)，但是培養(yǎng)箱和裝空調(diào)的房間都很難做到每個(gè)角落溫度都一致。冬天，需要制熱的時(shí)候，靠風(fēng)口的果蠅溫度高，生長(zhǎng)快，夏天制冷反之。所以需要調(diào)整出風(fēng)口位置，盡量保證溫差小。并及時(shí)關(guān)注果蠅生長(zhǎng)狀態(tài)，分別對(duì)待。長(zhǎng)得快的先傳代，長(zhǎng)得慢的可以等合適的時(shí)間，原則是“就快不就慢”。濕度對(duì)果蠅的影響非常大，正常濕度在40%~60%為宜。培養(yǎng)箱必須能控制濕度。房間需添放加濕器和除濕機(jī)。南方雨水充足的地方如上海、廣州、深圳等基本僅除濕就好。北方干燥的如北京、陜西等需要加加濕器。需要注意的是，除濕機(jī)和加濕器等各類(lèi)儀器啟動(dòng)時(shí)，周邊溫度會(huì)上升，因此放置在除濕機(jī)周邊的果蠅生長(zhǎng)速度也會(huì)加快。因此需密切關(guān)注儀器周邊果蠅的生長(zhǎng)狀態(tài)，及時(shí)傳代。為了維持果蠅的節(jié)律，必須控制光照。培養(yǎng)箱選透明門(mén)采用自然光或采用光照培養(yǎng)箱。房間可以用微電腦時(shí)控開(kāi)關(guān)控制。日常清潔必不可少，架子和地面要保持整潔。定期進(jìn)行資源庫(kù)大掃除，將果蠅搬入另外房間，如新建庫(kù)時(shí)一樣做徹底清潔。繼代培養(yǎng)資源庫(kù)保種溫度正常是18℃。在18℃的保存條件下，果蠅在35d左右必須轉(zhuǎn)管。有些必須在25℃保種的果蠅，18d左右必須轉(zhuǎn)管。果蠅轉(zhuǎn)管時(shí)間要適宜，并不是越早越好。過(guò)早轉(zhuǎn)管，親本果蠅已經(jīng)死亡而新果蠅尚未孵化，從而轉(zhuǎn)不出果蠅，且過(guò)早轉(zhuǎn)管也會(huì)浪費(fèi)大量的時(shí)間和食物。過(guò)晚轉(zhuǎn)管，有些長(zhǎng)勢(shì)差的果蠅由于沒(méi)有及時(shí)轉(zhuǎn)管，新孵化的果蠅已經(jīng)全部死亡，導(dǎo)致該品系滅絕；過(guò)晚轉(zhuǎn)管，還會(huì)發(fā)生食物發(fā)黑、發(fā)霉長(zhǎng)菌等各種情況，影響果蠅的生長(zhǎng)。繼代培養(yǎng)換下的舊管中有各個(gè)時(shí)期的果蠅，需及時(shí)清理銷(xiāo)毀?？刹捎贸蜏兀?18℃以下）冷凍、高溫（60℃以上）烘烤等方法，但必須確保果蠅的胚胎、幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)等各個(gè)時(shí)期全部死亡。果蠅資源電子檔案的及時(shí)更新果蠅資源列表有專(zhuān)人管理。入庫(kù)時(shí)及時(shí)更新表格，果蠅品系丟失時(shí)及時(shí)刪除。保證資源列表的準(zhǔn)確性。四：果蠅資源庫(kù)管理交接果蠅資源庫(kù)管理的交接是不可避免的。為避免果蠅品系丟失，管理必須規(guī)范，需要形成約定的流程。交接主要有以下幾方面：果蠅資源庫(kù)電子檔案的交接需要告訴下一任管理者實(shí)驗(yàn)室果蠅資源庫(kù)共有多少品系；如何分類(lèi)編號(hào)排列的；品系來(lái)源、重要果蠅特性等詳細(xì)信息。實(shí)體果蠅資源庫(kù)交接需要告訴下一任管理者實(shí)驗(yàn)室果蠅資源的排列順序，入庫(kù)前的準(zhǔn)備和入庫(kù)須知及入庫(kù)后的日常管理等信息，越詳盡越好。比如果蠅是保存在10*10的盒子中，還是9*9的盒子中，在排序時(shí)，左上為第一管，然后從左往右排，還是從上往下排等等，必須形成規(guī)定動(dòng)作，個(gè)人服從集體。每一盒果蠅的盒子上都貼有標(biāo)簽，需要標(biāo)明哪些內(nèi)容，正常是序號(hào)和繼代時(shí)間。當(dāng)其中某一個(gè)品系弱的時(shí)候，如何處理。平臺(tái)會(huì)將它保存到25℃精心飼養(yǎng)，同時(shí)保留其位置仍然。當(dāng)該品系生長(zhǎng)良好時(shí)再將它補(bǔ)入該位置。如果確定這一管果蠅已經(jīng)丟失，則將后面的果蠅往前排，將它的位置取消。同時(shí)在資源列表中