細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)研究方法詳解演示文稿

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)研究方法詳解演示文稿當(dāng)前第1頁\共有63頁\編于星期四\21點（優(yōu)選）細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)研究方法當(dāng)前第2頁\共有63頁\編于星期四\21點顯微鏡技術(shù)第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)μm(10-6m)nm(10-9m)?(10-10m)肉眼分辨率:0.2mm光學(xué)顯微鏡:0.2μm電子顯微鏡:0.2nm當(dāng)前第3頁\共有63頁\編于星期四\21點顯微鏡技術(shù)光學(xué)顯微鏡技術(shù)電子顯微鏡技術(shù)SEM（scanningelectronmicroscope）TEM（transmitionelectronmicroscope）掃描隧道顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第4頁\共有63頁\編于星期四\21點一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)以可見光（或紫外光）為光源類型普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡特殊光學(xué)顯微鏡：相差和微分干涉顯微鏡、錄像增差顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、倒置顯微鏡等多功能顯微鏡激光掃描共焦顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第5頁\共有63頁\編于星期四\21點1、普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡構(gòu)成：性能參數(shù)：分辨率放大率特點和局限性第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第6頁\共有63頁\編于星期四\21點（1）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡性能參數(shù)分辨率：區(qū)分開兩點間的最小距離R=0.61λ/nsin(α/2)

NA=nsin(α/2)

NA(numericalaperture)為物鏡的數(shù)值孔徑值影響分辨率的因素入射光的波長鏡口角介質(zhì)的折射率第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第7頁\共有63頁\編于星期四\21點（2）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡特點和局限性特點：明視場顯微鏡是以標(biāo)本的顏色及其透射率為基礎(chǔ)的顯微鏡。一般需要對處理過的樣品（固定染色）進行觀察以可見光為光源（波長范圍400nm-700nm）局限性難以觀察活的樣品分辨能力有限

能不能用光學(xué)顯微鏡觀察活細胞呢？第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第8頁\共有63頁\編于星期四\21點2、活細胞觀察技術(shù)相差顯微鏡微分干涉顯微鏡錄像增差顯微鏡倒置顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第9頁\共有63頁\編于星期四\21點（1）活細胞觀察技術(shù)—相差顯微鏡原理：把透過標(biāo)本的可見光的光程差（相位差）變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。特殊構(gòu)造：相差物鏡、環(huán)形光闌、合軸調(diào)中望遠鏡、綠色濾光片第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第10頁\共有63頁\編于星期四\21點當(dāng)前第11頁\共有63頁\編于星期四\21點相差顯微鏡的應(yīng)用特點：可以對無色透明的標(biāo)本進行觀察。適合于觀察未經(jīng)染色的活細胞。第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第12頁\共有63頁\編于星期四\21點（2）活細胞觀察技術(shù)—微分干涉顯微鏡特點：以平面偏振光為光源，能區(qū)分樣品厚度的微小差別，增加樣品反差，有立體感。應(yīng)用：觀察未染色標(biāo)本，更適于研究活細胞中較大的細胞器（3）錄像增差顯微鏡—計算機輔助的微分干涉顯微鏡降低背景噪聲，提高分辨率，填補光鏡與電鏡之間的空白第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第13頁\共有63頁\編于星期四\21點（4）活細胞觀察技術(shù)—倒置顯微鏡應(yīng)用：通常具有相差物鏡，用來觀察正在培養(yǎng)的活細胞第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第14頁\共有63頁\編于星期四\21點3、特殊光學(xué)顯微鏡—熒光顯微鏡光源：汞燈—短波長紫外光裝置：激發(fā)濾光片、阻斷濾光片、分色鏡熒光染料染色應(yīng)用：在光鏡水平對細胞中特異的蛋白質(zhì)分子或核苷酸片段等進行定位、定性分析。綠色熒光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第15頁\共有63頁\編于星期四\21點3、特殊光學(xué)顯微鏡—熒光顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreen當(dāng)前第16頁\共有63頁\編于星期四\21點4、光學(xué)顯微鏡—激光掃描共焦顯微鏡用激光作光源，逐點、逐行、逐面快速掃描，排除焦平面以外光的干擾，增強圖像反差和提高分辨率分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類似熒光顯微鏡，可自動改變觀察的焦平面,通過“光學(xué)切片”觀察較厚樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，并可通過三維重構(gòu),形成立體圖像。在研究亞細胞結(jié)構(gòu)與組分方面應(yīng)用廣泛.第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第17頁\共有63頁\編于星期四\21點4、光學(xué)顯微鏡—激光掃描共焦顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第18頁\共有63頁\編于星期四\21點光學(xué)顯微鏡—激光掃描共焦顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)FigureComparisonofconventionalandconfocalfluorescencemicroscopy.Thesetwomicrographsareofthesameintactgastrula-stageDrosophilaembryothathasbeenstainedwithafluorescentprobeforactinfilaments.Theconventional,unprocessedimage(A)isblurredbythepresenceoffluorescentstructuresaboveandbelowtheplaneoffocus.Intheconfocalimage(B),thisout-of-focusinformationisremoved,whichresultsinacrispopticalsectionofthecellintheembryo.當(dāng)前第19頁\共有63頁\編于星期四\21點1熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)5、與熒光觀察有關(guān)的技術(shù)第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)2熒光漂白恢復(fù)技術(shù)檢測活體中生物大分子納米級距離和距離變化的工具。GFP突變體：CFP青綠色、YFP黃色檢測活體細胞表面或內(nèi)部的分子運動以及在各種結(jié)構(gòu)上分子動態(tài)變化率大小的技術(shù)。當(dāng)前第20頁\共有63頁\編于星期四\21點6、特殊顯微鏡—暗視野顯微鏡原理：通過在明場顯微鏡上安裝暗場聚光鏡，使來自聚光鏡的光線不直接入射到物鏡內(nèi)，而被標(biāo)本散射的光則可以進入物鏡，從而達到在黑暗的背景下可看到標(biāo)本的外部形態(tài)。特點視野是暗的，物象是亮的?？梢杂^察在明視場中看不見的細菌等微小標(biāo)本的存在。只能看清標(biāo)本輪廓，分不清內(nèi)部結(jié)構(gòu)第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第21頁\共有63頁\編于星期四\21點當(dāng)前第22頁\共有63頁\編于星期四\21點7、多功能顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第23頁\共有63頁\編于星期四\21點二、電子顯微鏡以電子束作為光源掃描電子顯微鏡利用二次反射電子成像，主要用來觀察樣品表面的形態(tài)特征。透射電子顯微鏡利用透過的電子成像，用來觀察細胞內(nèi)部的詳細結(jié)構(gòu)。第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第24頁\共有63頁\編于星期四\21點FigureLimitofresolutionoftheelectronmicroscope.Electronmicrographofathinlayerofgoldshowingtheindividualfilesofatomsinthecrystalasbrightspots.Thedistancebetweenadjacentfilesofgoldatomsisabout0.2nm(2?).

當(dāng)前第25頁\共有63頁\編于星期四\21點二、電子顯微鏡1、基本構(gòu)造電子束照明系統(tǒng)：成像系統(tǒng)：電磁透鏡真空系統(tǒng)：記錄系統(tǒng)：熒光屏或感光膠片第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第26頁\共有63頁\編于星期四\21點當(dāng)前第27頁\共有63頁\編于星期四\21點當(dāng)前第28頁\共有63頁\編于星期四\21點當(dāng)前第29頁\共有63頁\編于星期四\21點電子顯微鏡能不能取代光學(xué)顯微鏡呢？當(dāng)前第30頁\共有63頁\編于星期四\21點二、電子顯微鏡2、電子顯微鏡的優(yōu)缺點優(yōu)點：比光學(xué)顯微鏡分辨率高缺點：不能觀察活的生物樣品，而且不能觀察細胞全貌。第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第31頁\共有63頁\編于星期四\21點二、電子顯微鏡3、電子顯微鏡制樣技術(shù)超薄切片技術(shù)（厚度40～50nm）電鏡負染色技術(shù)冷凍斷裂和冷凍蝕刻技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)超薄切片技術(shù)：固定、包埋、切片、染色染色劑：重金屬，成黑白圖像冷凍蝕刻電鏡技術(shù)主要用于膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒和膜面結(jié)構(gòu)，深度蝕刻主要用于觀察胞質(zhì)中的細胞骨架纖維及其結(jié)合蛋白電鏡三維重構(gòu)技術(shù)適于分析難以形成三維晶體的膜蛋白及病毒和蛋白質(zhì)-核酸復(fù)合物等大的復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)當(dāng)前第32頁\共有63頁\編于星期四\21點當(dāng)前第33頁\共有63頁\編于星期四\21點三、掃描隧道顯微鏡分辨率：橫向為0.1～0.2nm，縱向可達0.001nm。用途：是探測微觀世界物質(zhì)表面形態(tài)的儀器，三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進行觀察?？芍苯佑^察生物大分子生物結(jié)構(gòu)的原子排列，并且可避免損傷樣品。工作原理第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第34頁\共有63頁\編于星期四\21點三、掃描隧道顯微鏡第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu2500萬倍硅晶體表面

DNA當(dāng)前第35頁\共有63頁\編于星期四\21點第一節(jié)細胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第36頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞組分的分析方法細胞組分的分離細胞組分的分析定量細胞化學(xué)技術(shù)第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第37頁\共有63頁\編于星期四\21點一、細胞組分的分離細胞組分的獲得：用低滲勻漿、超聲破碎、研磨等方法獲得細胞組分勻漿。細胞組分分離—離心技術(shù)：離心是研究如細胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體，以及各種大分子基本手段。常用差速離心技術(shù)、密度梯度離心技術(shù)，或者是二者結(jié)合。第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第38頁\共有63頁\編于星期四\21點一、細胞組分的分離第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)低速離心機轉(zhuǎn)速<8ooor/min，離心力<10kg高速離心機轉(zhuǎn)速為10000~25000r/min，離心力為10-100（kg）轉(zhuǎn)速超過25000r/min，離心力大于100Kｇ者稱為超速離心機。目前超速離心機的最高轉(zhuǎn)速可達100000r/min，離心力超過500Kg。當(dāng)前第39頁\共有63頁\編于星期四\21點1、差速離心第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)特點：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級離心。用途：分離大小相差懸殊的細胞和細胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體——核蛋白體。通過差速離心可將細胞初步分離，常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。當(dāng)前第40頁\共有63頁\編于星期四\21點2、密度梯度離心第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)密度梯度離心：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場的作用使細胞分層、分離。速度區(qū)帶離心用于分離密度相近大小不一的細胞組分等密度梯度離心用于分離不同密度的細胞組分用途：分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。速度區(qū)帶梯度介質(zhì)最大密度小于樣品顆粒最小密度要控制好離心時間分離密度不等的顆粒等密度梯度離心梯度介質(zhì)最大密度大于樣品顆粒最大密度，樣品密度介于梯度密度最大與最小之間，樣品不能到達離心管底部。當(dāng)前第41頁\共有63頁\編于星期四\21點二、細胞組分分析細胞化學(xué)技術(shù)：細胞學(xué)和化學(xué)的結(jié)合產(chǎn)生了細胞化學(xué),主要是研究細胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)組成及化學(xué)分子的定位、分布及其生理功能,包括定性和定量分析。包括酶細胞化學(xué)技術(shù)、免疫細胞化學(xué)技術(shù)、放射自顯影示蹤細胞化學(xué)技術(shù)等。第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第42頁\共有63頁\編于星期四\21點二、細胞組分分析酶細胞化學(xué)技術(shù)：通過酶的特異細胞化學(xué)反應(yīng)來顯示酶在細胞內(nèi)的定位。免疫標(biāo)記技術(shù)：特異性蛋白抗原的定性、定位分析——將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)、金標(biāo)技術(shù)等相結(jié)合用來研究特異蛋白在細胞內(nèi)分布的方法。（選擇11）原位雜交技術(shù)（Insituhybridization）：特異核酸序列的定位、定性分析。（選擇題12-16）放射標(biāo)記技術(shù)：研究生物大分子在細胞內(nèi)的合成動態(tài)（選擇題17）第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)原位雜交技術(shù)將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。Northern雜交用來檢測樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量。WesternBlot中文一般稱為蛋白質(zhì)印跡。檢測蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中的表達情況。當(dāng)前第43頁\共有63頁\編于星期四\21點InsituhybridizationforRNAlocalizationintissues.Electron-microscopicautoradiography第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第44頁\共有63頁\編于星期四\21點三、定量細胞化學(xué)技術(shù)顯微分光光度技術(shù)流式細胞儀用途：對單個細胞進行快速定量分析與分選的一門技術(shù)。計數(shù)、分類、測定等第二節(jié)細胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第45頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞工程應(yīng)用細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科的理論和技術(shù)，按照人們的需要，有計劃地大規(guī)模地培養(yǎng)生物組織和細胞，以獲得生物及其產(chǎn)品，或改變細胞的遺傳組成以獲得新的種或品種，為社會和人類提供需要。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第46頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞培養(yǎng)概念：在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，使從機體取出的細胞在體外繼續(xù)生長繁殖的技術(shù)包括：細菌培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)和植物細胞培養(yǎng)在細胞培養(yǎng)中防止污染是決定細胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第47頁\共有63頁\編于星期四\21點動物細胞培養(yǎng)術(shù)語原代培養(yǎng)（primaryculture）：從動物機體取出直接進行培養(yǎng)的細胞群叫原代細胞，對原代細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。將細胞從一個培養(yǎng)瓶以一定的比例轉(zhuǎn)移到另外的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)的過程，即稱為傳代或傳代培養(yǎng)。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第48頁\共有63頁\編于星期四\21點

動物細胞原代培養(yǎng)

第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第49頁\共有63頁\編于星期四\21點傳代細胞的培養(yǎng)過程第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第50頁\共有63頁\編于星期四\21點動物細胞的培養(yǎng)形式單層細胞培養(yǎng)：也稱群體培養(yǎng)，將含有一定數(shù)量細胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細胞貼壁生長，匯合后形成均勻的單細胞層克隆培養(yǎng)：將高度稀釋的游離細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中；各個細胞貼壁后，彼此距離較遠，經(jīng)過生長增殖每一個細胞形成一個細胞集落，稱為克隆。一個細胞克隆中的所有細胞均來源于同一個祖先細胞。懸浮培養(yǎng)：使用特定的裝置，使細胞處于懸浮狀態(tài)進行增殖的培養(yǎng)方法。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第51頁\共有63頁\編于星期四\21點單層細胞培養(yǎng)和克隆培養(yǎng)第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第52頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞培養(yǎng)有關(guān)的概念細胞系（cellline）：原代培養(yǎng)細胞經(jīng)過傳代形成的生物學(xué)特性不均一的細胞群體。有限細胞系（finitecellline）：指傳代次數(shù)有限的體外培養(yǎng)細胞。有限細胞系仍然保持細胞原來染色體的二倍體數(shù)量和接觸抑制行為。連續(xù)細胞系或永生細胞系（infinitecellline）：培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細胞或從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細胞群，在培養(yǎng)條件下可無限繁殖。染色體明顯改變，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第53頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞克?。簭囊粋€經(jīng)過鑒定的細胞系由單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法由單細胞增殖形成的細胞群.具有基本相同的遺傳性狀。細胞株:是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細胞.第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第54頁\共有63頁\編于星期四\21點動物細胞培養(yǎng)的特點體外培養(yǎng)的細胞具有依附生長特性和接觸抑制現(xiàn)象。接觸抑制:細胞培養(yǎng)過程中,形成良好單層后,細胞彼此接觸,移動運動停止的現(xiàn)象.貼壁生長細胞的基本形態(tài)：成纖維樣細胞、上皮樣細胞。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第55頁\共有63頁\編于星期四\21點植物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)單倍體培養(yǎng)第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第56頁\共有63頁\編于星期四\21點非細胞體系（P72）定義：來源于細胞，不具備完整的細胞結(jié)構(gòu)，但包含了進行正常生物學(xué)反應(yīng)所需的物質(zhì)（如供能系統(tǒng)和酶反應(yīng)體系等）組成的體系即為非細胞體系。應(yīng)用：近年來，非細胞體系在研究DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、高爾基體的膜泡運輸機制及細胞核裝配（染色質(zhì)、核膜、核骨架裝配）等方面顯示了重要作用。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第57頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞融合與細胞雜交技術(shù)細胞融合：自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個不同基因型的細胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜交細胞。誘導(dǎo)細胞融合的方法生物方法：滅活的仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒化學(xué)方法：聚乙二醇PEG物理方法：電擊和激光第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第58頁\共有63頁\編于星期四\21點第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)單克隆抗體技術(shù)免疫技術(shù)細胞融合細胞培養(yǎng)：選擇性細胞培養(yǎng)、克隆培養(yǎng)當(dāng)前第59頁\共有63頁\編于星期四\21點細胞拆合與顯微操作技術(shù)細胞拆合：物理方法：機械方法或超聲處理去核化學(xué)方法：松胞素處理使細胞排核，再離心得到胞質(zhì)體和核質(zhì)體。第三節(jié)細胞工程與細胞培養(yǎng)當(dāng)前第60頁\共有63頁\編于星期四\21點本章鞏固練習(xí)一、名詞解釋1、原代培養(yǎng)2、傳代培養(yǎng)3、克隆培養(yǎng)4、群體培養(yǎng)5、接觸抑制6、細胞株7、細胞系8、非細胞體系二、填空1、光學(xué)顯微鏡的分辨率由

、

和

三種因素決定，用紫外光為光源觀察物體比用可見光的分辨率要高，這是因為

。2、適于觀察活細胞的光鏡有

、

、

、

等。3、電子顯微鏡使用的是

透鏡，而光學(xué)顯微鏡使用的是

透鏡。4、熒光顯微鏡是以

為光源，而電子顯微鏡則以

作為光源。5、可用

技術(shù)來研究質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的不對稱性。6、細胞生物學(xué)研究中常用的光鏡有

、

、

、

。7、貼壁生長細胞的形態(tài)為

、

。8、超速離心的方法包括

和

兩種，其中前者適合對組分進行粗分離，而后者則為較為精細的分離手段。當(dāng)前第61