經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)演示文稿

經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)演示文稿當前第1頁\共有81頁\編于星期五\11點（優(yōu)選）經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當前第2頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當前第3頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的條件及附加因素，沉淀反應(yīng)可分為兩種主要形式：1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)當前第4頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的條件及附加因素，沉淀反應(yīng)可分為兩種主要形式：

1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)當前第5頁\共有81頁\編于星期五\11點1．溶液中沉淀反應(yīng)

（Precipitationreactioninsolution）

是指在清徹透明的液體中，呈溶解狀態(tài)的抗原與抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，可凝聚成為肉眼可見的絮狀或顆粒狀的不溶性沉淀物。當前第6頁\共有81頁\編于星期五\11點溶液中沉淀反應(yīng)

鹽溶液抗原+抗體———沉淀

20~56℃、pH6～8

抗原：沉淀原抗體：沉淀素當前第7頁\共有81頁\編于星期五\11點1．溶液中沉淀反應(yīng)

（Precipitationreactioninsolution）

（1）環(huán)狀沉淀試驗（2）免疫比濁法（3）免疫沉淀技術(shù)當前第8頁\共有81頁\編于星期五\11點（1）環(huán)狀沉淀試驗

環(huán)狀沉淀試驗

（ringprecipitationtest）或毛細管內(nèi)沉淀反應(yīng) （precipitationin capillarytube）當前第9頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第10頁\共有81頁\編于星期五\11點（2）免疫比濁法(immunonephelomytry）

可溶性的抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)渾濁。復(fù)合物的量與濁度成正比。與標準品比較即可計算出樣品中的抗原或抗體含量。當前第11頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第12頁\共有81頁\編于星期五\11點免疫沉淀技術(shù)當前第13頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第14頁\共有81頁\編于星期五\11點免疫共沉淀當前第15頁\共有81頁\編于星期五\11點GSTpull-down技術(shù)

當前第16頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的條件及附加因素，沉淀反應(yīng)可分為兩種主要形式：1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)當前第17頁\共有81頁\編于星期五\11點2．凝膠中沉淀反應(yīng)（Precipitationreactioningel）

1968年Ouchterlong發(fā)明的。即將抗原抗體溶液放在瓊脂凝膠板上的小孔中，使它們彼此對向擴散，在抗原抗體相遇的地方形成沉淀線。當前第18頁\共有81頁\編于星期五\11點2．凝膠中沉淀反應(yīng)

此沉淀線的突出性質(zhì)是：特異性抗原抗體不能通過；與沉淀線無關(guān)的抗原和抗體分子則可自由通過此沉淀線。當前第19頁\共有81頁\編于星期五\11點2．凝膠中沉淀反應(yīng)（1）單相免疫擴散試驗（2）雙相免疫擴散試驗（3）免疫電泳（4）火箭電泳試驗（5）免疫印跡技術(shù)當前第20頁\共有81頁\編于星期五\11點單相免疫擴散試驗當前第21頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第22頁\共有81頁\編于星期五\11點雙相免疫擴散試驗當前第23頁\共有81頁\編于星期五\11點（3）免疫電泳（immunoelectrophoresis）當前第24頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第25頁\共有81頁\編于星期五\11點（4）火箭電泳試驗當前第26頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第27頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第28頁\共有81頁\編于星期五\11點又稱Westernblotting電泳印漬及檢測（5）免疫印漬技術(shù)（immunoblotting）當前第29頁\共有81頁\編于星期五\11點免疫印漬當前第30頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第31頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當前第32頁\共有81頁\編于星期五\11點第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當前第33頁\共有81頁\編于星期五\11點第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當前第34頁\共有81頁\編于星期五\11點1．直接凝集反應(yīng)

（directagglutination）

是將細菌或紅細胞與其相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細菌凝集或紅細胞凝集現(xiàn)象。當前第35頁\共有81頁\編于星期五\11點1．直接凝集反應(yīng)（1）微生物凝集反應(yīng) 如診斷傷寒病的肥達氏（Widalreaction）反應(yīng)（2）同種紅細胞凝集反應(yīng)如檢查血型的血細胞凝集現(xiàn)象當前第36頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第37頁\共有81頁\編于星期五\11點第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當前第38頁\共有81頁\編于星期五\11點2．間接凝集反應(yīng)

（indirectagglutination）

用可溶性抗原（或抗體）包被在一種與免疫無關(guān)的、具一定大小的不溶性顆粒（即載體顆粒，如：乳膠顆?；蚣t細胞）的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在有適宜電解質(zhì)存在的條件下，結(jié)合產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。當前第39頁\共有81頁\編于星期五\11點2．間接凝集反應(yīng)正向間接凝集反應(yīng)：將抗原先吸附在載體表面，然后與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應(yīng)。反向間接凝集反應(yīng)：將特異性抗體先吸附在載體表面，然后與相應(yīng)抗原結(jié)合產(chǎn)生的凝集反應(yīng)。既可檢測抗原，也可檢測抗體；方法簡便、敏感。當前第40頁\共有81頁\編于星期五\11點正向間接凝集反應(yīng)當前第41頁\共有81頁\編于星期五\11點

此方法對檢測微量抗原具有較高的敏感性。而且由于相關(guān)病原體的抗原成分一般情況下比血清抗體出現(xiàn)早，所以可用于某些傳染病如鉤端螺旋體抗原和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)或原發(fā)性肝癌AFP的檢測等。反向間接凝集反應(yīng)當前第42頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第43頁\共有81頁\編于星期五\11點第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當前第44頁\共有81頁\編于星期五\11點3．橋梁凝集反應(yīng)

又稱Coombs抗球蛋白試驗。此試驗用于檢測不完全抗體。當前第45頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第46頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第47頁\共有81頁\編于星期五\11點第二節(jié)凝集反應(yīng)1．直接凝集反應(yīng)2．間接凝集反應(yīng)3．橋梁凝集反應(yīng)4．共同凝集反應(yīng)

當前第48頁\共有81頁\編于星期五\11點4．共同凝集反應(yīng)

又稱協(xié)同凝集反應(yīng)。指由兩種顆粒成分相互作用而發(fā)生的凝集反應(yīng)。當前第49頁\共有81頁\編于星期五\11點4．共同凝集反應(yīng)（1）細菌抗體與攜帶蛋白A的金黃色葡萄球菌CowanⅠ系致敏，即通過其IgG的Fc段與蛋白A結(jié)合，再與相應(yīng)細菌發(fā)生凝集反應(yīng)。（2）玫瑰花結(jié)試驗：主要用于研究各種淋巴細胞特性。當前第50頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第51頁\共有81頁\編于星期五\11點E花環(huán)形成示意圖當前第52頁\共有81頁\編于星期五\11點

B細胞EA、EAC玫瑰花環(huán)形成示意圖

當前第53頁\共有81頁\編于星期五\11點淋巴細胞的分離當前第54頁\共有81頁\編于星期五\11點玫瑰花結(jié)當前第55頁\共有81頁\編于星期五\11點淋巴細胞與紅細胞形成

玫瑰花結(jié)的主要模式玫瑰花結(jié)的類型紅細胞的類型及處理淋巴細胞類型E花結(jié)綿羊紅細胞T、50%NKEA花結(jié)抗體致敏的紅細胞B、T、NK、粒細胞、單核細胞及巨噬細胞EAC花結(jié)補體致敏的紅細胞B當前第56頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當前第57頁\共有81頁\編于星期五\11點

第三節(jié)

補體參與的抗原抗體反應(yīng)

1．補體參與直接的抗原抗體反應(yīng)2．補體參與間接的抗原抗體反應(yīng)當前第58頁\共有81頁\編于星期五\11點

第三節(jié)

補體參與的抗原抗體反應(yīng)

1．補體參與直接的抗原抗體反應(yīng)2．補體參與間接的抗原抗體反應(yīng)當前第59頁\共有81頁\編于星期五\11點1．補體參與直接的

抗原抗體反應(yīng)

（1）溶血反應(yīng)（2）溶菌反應(yīng)當前第60頁\共有81頁\編于星期五\11點（1）溶血反應(yīng)

（hemolyticassay）

溶血反應(yīng)常作為是否存在游離補體的指示系統(tǒng)。當前第61頁\共有81頁\編于星期五\11點（1）溶血反應(yīng)1942年Rutstein和Walker根據(jù)補體能使兔抗羊紅細胞抗體致敏的羊紅細胞發(fā)生溶血的特點，建立了測定血清中總補體活性的方法（即50%溶血反應(yīng)CH50

測定方法）當前第62頁\共有81頁\編于星期五\11點（2）溶菌反應(yīng)

溶菌反應(yīng)常作為某血清中是否存在相應(yīng)抗體的檢測方法。當前第63頁\共有81頁\編于星期五\11點

第三節(jié)

補體參與的抗原抗體反應(yīng)

1．補體參與直接的抗原抗體反應(yīng)2．補體參與間接的抗原抗體反應(yīng)當前第64頁\共有81頁\編于星期五\11點2．補體參與間接的

抗原抗體反應(yīng)

（1）補體結(jié)合試驗（2）被動紅細胞溶解試驗（3）溶血空斑試驗當前第65頁\共有81頁\編于星期五\11點（1）補體結(jié)合試驗（complementfixationtest）

1901年由Bordet和Gengou首先應(yīng)用溶血反應(yīng)作為指示系統(tǒng)，建立的檢測抗原抗體反應(yīng)的方法。當前第66頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第67頁\共有81頁\編于星期五\11點補體結(jié)合試驗原理當前第68頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第69頁\共有81頁\編于星期五\11點（2）被動紅細胞溶解試驗

即吸附抗原的紅細胞在有相應(yīng)抗體和補體存在時，出現(xiàn)紅細胞溶解反應(yīng)?？乖旅艏t細胞——加入待測血清和補體——判斷結(jié)果（陽性對照：加入相應(yīng)抗體和補體）

當前第70頁\共有81頁\編于星期五\11點（3）溶血空斑試驗

是測定B淋巴細胞產(chǎn)生和分泌抗體功能的一種體外試驗方法。當前第71頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第72頁\共有81頁\編于星期五\11點當前第73頁\共有81頁\編于星期五\11點溶血空斑試驗當前第74頁\共有81頁\編于星期五\11點第一節(jié)沉淀反應(yīng)第二節(jié)凝集反應(yīng)第三節(jié)補體參與的抗原 抗體反應(yīng)第四節(jié)中和反應(yīng)第五章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)當前第75頁\共有81頁\編于星期五\11點第四節(jié)中和反應(yīng)中和反應(yīng)（neutralization）：是免疫學(xué)和病毒學(xué)中常用于檢測中和抗體是否存在及其效價的試驗，反映抗體中和病毒感染性或細菌毒素的生物學(xué)效應(yīng)。當前第76頁\共有81頁\編于星期五\11點

中和抗體：病原微生物侵入機體后，使之產(chǎn)生能中和相應(yīng)微