細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)研究方法

首先我們學(xué)習(xí)

第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)第三節(jié)細(xì)胞工程技術(shù)目錄主要內(nèi)容

第二節(jié)細(xì)胞組分的分析與檢測(cè)技術(shù)當(dāng)前第1頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)顯微鏡技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)μm(10-6m)nm(10-9m)?(10-10m)肉眼分辨率:0.2mm光學(xué)顯微鏡:0.2μm電子顯微鏡:0.2nm當(dāng)前第2頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)顯微鏡技術(shù)光學(xué)顯微鏡技術(shù)電子顯微鏡技術(shù)SEM（scanningelectronmicroscope）TEM（transmitionelectronmicroscope）掃描隧道顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第3頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)以可見(jiàn)光（或紫外光）為光源類(lèi)型普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡特殊光學(xué)顯微鏡：相差和微分干涉顯微鏡、錄像增差顯微鏡、暗視野顯微鏡、熒光顯微鏡、倒置顯微鏡等多功能顯微鏡激光掃描共焦顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第4頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)1、普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡構(gòu)成：性能參數(shù)：分辨率放大率特點(diǎn)和局限性第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第5頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)（1）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡性能參數(shù)分辨率：區(qū)分開(kāi)兩點(diǎn)間的最小距離R=0.61λ/nsin(α/2)

NA=nsin(α/2)

NA(numericalaperture)為物鏡的數(shù)值孔徑值影響分辨率的因素入射光的波長(zhǎng)鏡口角介質(zhì)的折射率第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第6頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)（2）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡特點(diǎn)和局限性特點(diǎn)：明視場(chǎng)顯微鏡是以標(biāo)本的顏色及其透射率為基礎(chǔ)的顯微鏡。一般需要對(duì)處理過(guò)的樣品（固定染色）進(jìn)行觀察以可見(jiàn)光為光源（波長(zhǎng)范圍400nm-700nm）局限性難以觀察活的樣品分辨能力有限

能不能用光學(xué)顯微鏡觀察活細(xì)胞呢？第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第7頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)2、活細(xì)胞觀察技術(shù)相差顯微鏡微分干涉顯微鏡錄像增差顯微鏡倒置顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第8頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)（1）活細(xì)胞觀察技術(shù)—相差顯微鏡原理：把透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差（相位差）變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見(jiàn)。特殊構(gòu)造：相差物鏡、環(huán)形光闌、合軸調(diào)中望遠(yuǎn)鏡、綠色濾光片第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第9頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第10頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)相差顯微鏡的應(yīng)用特點(diǎn)：可以對(duì)無(wú)色透明的標(biāo)本進(jìn)行觀察。適合于觀察未經(jīng)染色的活細(xì)胞。第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第11頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)（2）活細(xì)胞觀察技術(shù)—微分干涉顯微鏡特點(diǎn)：以平面偏振光為光源，能區(qū)分樣品厚度的微小差別，增加樣品反差，有立體感。應(yīng)用：觀察未染色標(biāo)本，更適于研究活細(xì)胞中較大的細(xì)胞器（3）錄像增差顯微鏡—計(jì)算機(jī)輔助的微分干涉顯微鏡降低背景噪聲，提高分辨率，填補(bǔ)光鏡與電鏡之間的空白第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第12頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)（4）活細(xì)胞觀察技術(shù)—倒置顯微鏡應(yīng)用：通常具有相差物鏡，用來(lái)觀察正在培養(yǎng)的活細(xì)胞第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第13頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)3、特殊光學(xué)顯微鏡—熒光顯微鏡光源：汞燈—短波長(zhǎng)紫外光裝置：激發(fā)濾光片、阻斷濾光片、分色鏡熒光染料染色應(yīng)用：在光鏡水平對(duì)細(xì)胞中特異的蛋白質(zhì)分子或核苷酸片段等進(jìn)行定位、定性分析。綠色熒光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第14頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)3、特殊光學(xué)顯微鏡—熒光顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreen當(dāng)前第15頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)4、光學(xué)顯微鏡—激光掃描共焦顯微鏡用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描，排除焦平面以外光的干擾，增強(qiáng)圖像反差和提高分辨率分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類(lèi)似熒光顯微鏡，可自動(dòng)改變觀察的焦平面,通過(guò)“光學(xué)切片”觀察較厚樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，并可通過(guò)三維重構(gòu),形成立體圖像。在研究亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)與組分方面應(yīng)用廣泛.第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第16頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)4、光學(xué)顯微鏡—激光掃描共焦顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第17頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)光學(xué)顯微鏡—激光掃描共焦顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)FigureComparisonofconventionalandconfocalfluorescencemicroscopy.Thesetwomicrographsareofthesameintactgastrula-stageDrosophilaembryothathasbeenstainedwithafluorescentprobeforactinfilaments.Theconventional,unprocessedimage(A)isblurredbythepresenceoffluorescentstructuresaboveandbelowtheplaneoffocus.Intheconfocalimage(B),thisout-of-focusinformationisremoved,whichresultsinacrispopticalsectionofthecellintheembryo.當(dāng)前第18頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)1熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)5、與熒光觀察有關(guān)的技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)2熒光漂白恢復(fù)技術(shù)檢測(cè)活體中生物大分子納米級(jí)距離和距離變化的工具。GFP突變體：CFP青綠色、YFP黃色檢測(cè)活體細(xì)胞表面或內(nèi)部的分子運(yùn)動(dòng)以及在各種結(jié)構(gòu)上分子動(dòng)態(tài)變化率大小的技術(shù)。當(dāng)前第19頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)6、特殊顯微鏡—暗視野顯微鏡原理：通過(guò)在明場(chǎng)顯微鏡上安裝暗場(chǎng)聚光鏡，使來(lái)自聚光鏡的光線不直接入射到物鏡內(nèi)，而被標(biāo)本散射的光則可以進(jìn)入物鏡，從而達(dá)到在黑暗的背景下可看到標(biāo)本的外部形態(tài)。特點(diǎn)視野是暗的，物象是亮的?？梢杂^察在明視場(chǎng)中看不見(jiàn)的細(xì)菌等微小標(biāo)本的存在。只能看清標(biāo)本輪廓，分不清內(nèi)部結(jié)構(gòu)第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第20頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第21頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)7、多功能顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第22頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)二、電子顯微鏡以電子束作為光源掃描電子顯微鏡利用二次反射電子成像，主要用來(lái)觀察樣品表面的形態(tài)特征。透射電子顯微鏡利用透過(guò)的電子成像，用來(lái)觀察細(xì)胞內(nèi)部的詳細(xì)結(jié)構(gòu)。第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第23頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)FigureLimitofresolutionoftheelectronmicroscope.Electronmicrographofathinlayerofgoldshowingtheindividualfilesofatomsinthecrystalasbrightspots.Thedistancebetweenadjacentfilesofgoldatomsisabout0.2nm(2?).

當(dāng)前第24頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)二、電子顯微鏡1、基本構(gòu)造電子束照明系統(tǒng)：成像系統(tǒng)：電磁透鏡真空系統(tǒng)：記錄系統(tǒng)：熒光屏或感光膠片第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第25頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第26頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第27頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第28頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)電子顯微鏡能不能取代光學(xué)顯微鏡呢？當(dāng)前第29頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)二、電子顯微鏡2、電子顯微鏡的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：比光學(xué)顯微鏡分辨率高缺點(diǎn)：不能觀察活的生物樣品，而且不能觀察細(xì)胞全貌。第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第30頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)二、電子顯微鏡3、電子顯微鏡制樣技術(shù)超薄切片技術(shù)（厚度40～50nm）電鏡負(fù)染色技術(shù)冷凍斷裂和冷凍蝕刻技術(shù)電鏡三維重構(gòu)技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)超薄切片技術(shù)：固定、包埋、切片、染色染色劑：重金屬，成黑白圖像冷凍蝕刻電鏡技術(shù)主要用于膜斷裂面的蛋白質(zhì)顆粒和膜面結(jié)構(gòu)，深度蝕刻主要用于觀察胞質(zhì)中的細(xì)胞骨架纖維及其結(jié)合蛋白電鏡三維重構(gòu)技術(shù)適于分析難以形成三維晶體的膜蛋白及病毒和蛋白質(zhì)-核酸復(fù)合物等大的復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)當(dāng)前第31頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第32頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)三、掃描隧道顯微鏡分辨率：橫向?yàn)?.1～0.2nm，縱向可達(dá)0.001nm。用途：是探測(cè)微觀世界物質(zhì)表面形態(tài)的儀器，三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察?？芍苯佑^察生物大分子生物結(jié)構(gòu)的原子排列，并且可避免損傷樣品。工作原理第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第33頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)三、掃描隧道顯微鏡第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu2500萬(wàn)倍硅晶體表面

DNA當(dāng)前第34頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)第一節(jié)細(xì)胞的形態(tài)觀察技術(shù)當(dāng)前第35頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞組分的分離細(xì)胞組分的分析定量細(xì)胞化學(xué)技術(shù)第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第36頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)一、細(xì)胞組分的分離細(xì)胞組分的獲得：用低滲勻漿、超聲破碎、研磨等方法獲得細(xì)胞組分勻漿。細(xì)胞組分分離—離心技術(shù)：離心是研究如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體、溶酶體和微體，以及各種大分子基本手段。常用差速離心技術(shù)、密度梯度離心技術(shù)，或者是二者結(jié)合。第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第37頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)一、細(xì)胞組分的分離第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)低速離心機(jī)轉(zhuǎn)速<8ooor/min，離心力<10kg高速離心機(jī)轉(zhuǎn)速為10000~25000r/min，離心力為10-100（kg）轉(zhuǎn)速超過(guò)25000r/min，離心力大于100Kｇ者稱(chēng)為超速離心機(jī)。目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超過(guò)500Kg。當(dāng)前第38頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)1、差速離心第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)特點(diǎn)：介質(zhì)密度均一；速度由低向高，逐級(jí)離心。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過(guò)氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體——核蛋白體。通過(guò)差速離心可將細(xì)胞初步分離，常需進(jìn)一步通過(guò)密度梯離心再行分離純化。當(dāng)前第39頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)2、密度梯度離心第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)密度梯度離心：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過(guò)離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層、分離。速度區(qū)帶離心用于分離密度相近大小不一的細(xì)胞組分等密度梯度離心用于分離不同密度的細(xì)胞組分用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。速度區(qū)帶梯度介質(zhì)最大密度小于樣品顆粒最小密度要控制好離心時(shí)間分離密度不等的顆粒等密度梯度離心梯度介質(zhì)最大密度大于樣品顆粒最大密度，樣品密度介于梯度密度最大與最小之間，樣品不能到達(dá)離心管底部。當(dāng)前第40頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)二、細(xì)胞組分分析細(xì)胞化學(xué)技術(shù)：細(xì)胞學(xué)和化學(xué)的結(jié)合產(chǎn)生了細(xì)胞化學(xué),主要是研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)的化學(xué)組成及化學(xué)分子的定位、分布及其生理功能,包括定性和定量分析。包括酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、放射自顯影示蹤細(xì)胞化學(xué)技術(shù)等。第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第41頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)二、細(xì)胞組分分析酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)：通過(guò)酶的特異細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)來(lái)顯示酶在細(xì)胞內(nèi)的定位。免疫標(biāo)記技術(shù)：特異性蛋白抗原的定性、定位分析——將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)、金標(biāo)技術(shù)等相結(jié)合用來(lái)研究特異蛋白在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。（選擇11）原位雜交技術(shù)（Insituhybridization）：特異核酸序列的定位、定性分析。（選擇題12-16）放射標(biāo)記技術(shù)：研究生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的合成動(dòng)態(tài)（選擇題17）第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)原位雜交技術(shù)將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。Southern印跡雜交是進(jìn)行基因組DNA特定序列定位的通用方法。Northern雜交用來(lái)檢測(cè)樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量。WesternBlot中文一般稱(chēng)為蛋白質(zhì)印跡。檢測(cè)蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中的表達(dá)情況。當(dāng)前第42頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)InsituhybridizationforRNAlocalizationintissues.Electron-microscopicautoradiography第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第43頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)三、定量細(xì)胞化學(xué)技術(shù)顯微分光光度技術(shù)流式細(xì)胞儀用途：對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門(mén)技術(shù)。計(jì)數(shù)、分類(lèi)、測(cè)定等第二節(jié)細(xì)胞組分分析技術(shù)當(dāng)前第44頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞工程應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科的理論和技術(shù)，按照人們的需要，有計(jì)劃地大規(guī)模地培養(yǎng)生物組織和細(xì)胞，以獲得生物及其產(chǎn)品，或改變細(xì)胞的遺傳組成以獲得新的種或品種，為社會(huì)和人類(lèi)提供需要。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第45頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)概念：在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，使從機(jī)體取出的細(xì)胞在體外繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖的技術(shù)包括：細(xì)菌培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物細(xì)胞培養(yǎng)在細(xì)胞培養(yǎng)中防止污染是決定細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第46頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)語(yǔ)原代培養(yǎng)（primaryculture）：從動(dòng)物機(jī)體取出直接進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞群叫原代細(xì)胞，對(duì)原代細(xì)胞的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞稱(chēng)為傳代細(xì)胞。將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以一定的比例轉(zhuǎn)移到另外的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)的過(guò)程，即稱(chēng)為傳代或傳代培養(yǎng)。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第47頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)

動(dòng)物細(xì)胞原代培養(yǎng)

第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第48頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)傳代細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第49頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)形式單層細(xì)胞培養(yǎng)：也稱(chēng)群體培養(yǎng)，將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，匯合后形成均勻的單細(xì)胞層克隆培養(yǎng)：將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中；各個(gè)細(xì)胞貼壁后，彼此距離較遠(yuǎn)，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)增殖每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落，稱(chēng)為克隆。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來(lái)源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。懸浮培養(yǎng)：使用特定的裝置，使細(xì)胞處于懸浮狀態(tài)進(jìn)行增殖的培養(yǎng)方法。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第50頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)單層細(xì)胞培養(yǎng)和克隆培養(yǎng)第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第51頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的概念細(xì)胞系（cellline）：原代培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)過(guò)傳代形成的生物學(xué)特性不均一的細(xì)胞群體。有限細(xì)胞系（finitecellline）：指?jìng)鞔螖?shù)有限的體外培養(yǎng)細(xì)胞。有限細(xì)胞系仍然保持細(xì)胞原來(lái)染色體的二倍體數(shù)量和接觸抑制行為。連續(xù)細(xì)胞系或永生細(xì)胞系（infinitecellline）：培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞或從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群，在培養(yǎng)條件下可無(wú)限繁殖。染色體明顯改變，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第52頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞克?。簭囊粋€(gè)經(jīng)過(guò)鑒定的細(xì)胞系由單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群.具有基本相同的遺傳性狀。細(xì)胞株:是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞.第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第53頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)體外培養(yǎng)的細(xì)胞具有依附生長(zhǎng)特性和接觸抑制現(xiàn)象。接觸抑制:細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,形成良好單層后,細(xì)胞彼此接觸,移動(dòng)運(yùn)動(dòng)停止的現(xiàn)象.貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的基本形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第54頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)植物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)單倍體培養(yǎng)第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第55頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)非細(xì)胞體系（P72）定義：來(lái)源于細(xì)胞，不具備完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但包含了進(jìn)行正常生物學(xué)反應(yīng)所需的物質(zhì)（如供能系統(tǒng)和酶反應(yīng)體系等）組成的體系即為非細(xì)胞體系。應(yīng)用：近年來(lái)，非細(xì)胞體系在研究DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、高爾基體的膜泡運(yùn)輸機(jī)制及細(xì)胞核裝配（染色質(zhì)、核膜、核骨架裝配）等方面顯示了重要作用。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第56頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交技術(shù)細(xì)胞融合：自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜交細(xì)胞。誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法生物方法：滅活的仙臺(tái)病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒化學(xué)方法：聚乙二醇PEG物理方法：電擊和激光第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第57頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體技術(shù)免疫技術(shù)細(xì)胞融合細(xì)胞培養(yǎng)：選擇性細(xì)胞培養(yǎng)、克隆培養(yǎng)當(dāng)前第58頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)細(xì)胞拆合與顯微操作技術(shù)細(xì)胞拆合：物理方法：機(jī)械方法或超聲處理去核化學(xué)方法：松胞素處理使細(xì)胞排核，再離心得到胞質(zhì)體和核質(zhì)體。第三節(jié)細(xì)胞工程與細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)前第59頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)本章鞏固練習(xí)一、名詞解釋1、原代培養(yǎng)2、傳代培養(yǎng)3、克隆培養(yǎng)4、群體培養(yǎng)5、接觸抑制6、細(xì)胞株7、細(xì)胞系8、非細(xì)胞體系二、填空1、光學(xué)顯微鏡的分辨率由

、

和

三種因素決定，用紫外光為光源觀察物體比用可見(jiàn)光的分辨率要高，這是因?yàn)?/p>

。2、適于觀察活細(xì)胞的光鏡有

、

、

、

等。3、電子顯微鏡使用的是

透鏡，而光學(xué)顯微鏡使用的是

透鏡。4、熒光顯微鏡是以

為光源，而電子顯微鏡則以

作為光源。5、可用

技術(shù)來(lái)研究質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的不對(duì)稱(chēng)性。6、細(xì)胞生物學(xué)研究中常用的光鏡有

、

、

、

。7、貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的形態(tài)為

、

。8、超速離心的方法包括

和

兩種，其中前者適合對(duì)組分進(jìn)行粗分離，而后者則為較為精細(xì)的分離手段。當(dāng)前第60頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)三、選擇題1、在光學(xué)顯微鏡下所觀察到的組織或細(xì)胞結(jié)構(gòu)一般稱(chēng)為

A．顯微結(jié)構(gòu)

B．超微結(jié)構(gòu)

C．亞顯微結(jié)構(gòu)

D．分子結(jié)構(gòu)

2．研究細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)一般要利用下列哪種技術(shù)

A．光學(xué)顯微鏡技術(shù)

B．電子顯微鏡技術(shù)

C．X射線衍射技術(shù)D．離心技術(shù)

E．熒光顯微鏡3、適于觀察細(xì)胞表面及斷面超微結(jié)構(gòu)三維圖像的儀器是

A．普通光學(xué)顯微鏡

B．熒光顯微鏡

C．相差顯微鏡

D．掃描電鏡

E．透射電鏡4、適于觀察細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的顯微鏡是

A．透射電鏡

B．掃描電鏡

C．熒光顯微鏡

D．倒置顯微鏡

E．相差顯微鏡5、適于觀察培養(yǎng)瓶中活細(xì)胞的顯微鏡是

A．透射電鏡

B．掃描電鏡

C．熒光顯微鏡

D．倒置顯微鏡

E．相差顯微鏡6、不能用于研究膜蛋白流動(dòng)性的方法是()技術(shù)。A．熒光抗體免疫標(biāo)記B．熒光能量共振轉(zhuǎn)移C．光脫色恢復(fù)D．熒光標(biāo)記細(xì)胞融合當(dāng)前第61頁(yè)\共有64頁(yè)\編于星期四\21點(diǎn)7、用于觀察活細(xì)胞的顯微鏡是()。A．倒置顯微鏡B．相差顯微鏡C．微分干涉顯微鏡D．三者都是8、激光共焦點(diǎn)掃描顯微鏡可用于()。A．獲得細(xì)胞不同切面的圖像B．觀察無(wú)色透明的標(biāo)本C．定量分析細(xì)胞中的化學(xué)成分D．觀察細(xì)胞表面的立體形貌9、用電子顯微鏡在細(xì)胞中觀察不到微粒體，其原因是()。A．微粒體