豬瘟抗體ELISA試劑盒武漢科前動(dòng)物生物制品有限課件

ELISA【樣品制備】取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。注意量少、溶血、脂血、黃疸血，必須在申請(qǐng)單，接收上標(biāo)明，對(duì)于影響很大的，必須委婉拒絕接收【溶血】血液中的紅細(xì)胞被破壞，釋放到血中，使血清或血漿呈紅色【脂血】

脂內(nèi)物質(zhì)進(jìn)入血液中，使血清或血漿呈乳白色【黃疸】huangdan

血清或血漿中膽紅素含量過高，肉眼觀看顯明黃色血清樣品的運(yùn)輸冷藏離心分離血清血清的保存棄掉血凝塊的血清：冷凍帶血凝塊的血清：冷藏豬瘟抗體ELISA試劑盒

武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司試劑盒組成黃色蓋-樣品稀釋液白色蓋-20×洗滌液藍(lán)色蓋-酶標(biāo)二抗棕色-底物液B紅色-底物液A淡藍(lán)/白色-終止液陰陽(yáng)性血清藍(lán)色為陰性紅色為陽(yáng)性抗原包被板和血清稀釋板試劑盒組成（1）抗原包被板2板（96孔/板）

（2）陰性對(duì)照血清（藍(lán)色蓋子）1管（1ml/管）

（3）陽(yáng)性對(duì)照血清（紅色蓋子）1管（1ml/管）

（4）羊抗豬酶標(biāo)二抗（藍(lán)色蓋子）1瓶（20ml/瓶）

（5）樣品稀釋液（黃色蓋子）1瓶（50ml/瓶）

（6）底物液A（紅色蓋子）1瓶（10ml/瓶）

（7）底物液B（黑色蓋子）1瓶（10ml/瓶）

（8）終止液（藍(lán)色蓋子）1瓶（10ml/瓶）

（9）20倍濃縮洗滌液（白色蓋子）1瓶（30ml/瓶）

（10）血清稀釋板2板（96孔/板）

【洗滌液配制】使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃），并搖動(dòng)，使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用蒸餾水作20倍稀釋（例如：30ml的濃縮洗滌液加上570ml蒸餾水）混勻，稀釋好的洗滌液2～8℃可存放7日。

【樣品稀釋】在血清稀釋板中按1:40的體積稀釋待檢血清樣品（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清樣品）?！緦?duì)照稀釋】

在血清稀釋板中按1:4分別稀釋陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（180μl樣品稀釋液中加60μl對(duì)照血清）。

【注意事項(xiàng)】

（1）試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。使用后放回2~8℃保存。

（2）不同批號(hào)的試劑盒組份不得混用，不同試劑使用時(shí)應(yīng)防止交叉污染。

（3）底物液和終止液不能暴露于強(qiáng)光或接觸氧化劑。

（4）待檢血清數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)先稀釋完所有待檢血清，再加到抗原包被板上，使反應(yīng)時(shí)間一致。

（5）稀釋20倍濃縮洗滌液時(shí)，如發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，應(yīng)加熱使其溶解后再使用。

（6）移液時(shí)，應(yīng)盡量準(zhǔn)確，防止產(chǎn)生氣泡。

（7）應(yīng)嚴(yán)格遵守各操作步驟規(guī)定的時(shí)間和溫度。

（8）2~8℃避光保存，有效期為10個(gè)月。

【操作步驟】1.取抗原包被板用稀釋好的洗滌液洗板2次；2.將稀釋好的待檢血清、陰性對(duì)照血清和陽(yáng)性對(duì)照血清各取100μl加至抗原包被板中，待檢血清設(shè)1孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品，置37℃下溫育30分鐘。

【操作步驟】3.棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μl，靜置3分鐘后，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，重復(fù)洗滌5次。

4.每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100μl，置37℃下溫育30分鐘。

【操作步驟】5.每孔加底物液A50μl、底物液B約50μl，混勻，置室溫（20~25℃）下避光顯色10分鐘。

6.每孔加入終止液50μl，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上讀各孔OD630nm值。試驗(yàn)成立的條件是：陽(yáng)性對(duì)照孔OD630nm值均應(yīng)≥0.6，陰性對(duì)照孔OD