鼠疫病原學(xué)檢驗的實驗室質(zhì)量控制

鼠疫病原學(xué)檢驗的實驗室質(zhì)量控制第一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗的實驗室質(zhì)量控制質(zhì)量控制的定義鼠疫病原學(xué)檢驗的質(zhì)量控制方法鼠疫病原學(xué)檢驗方法動物間鼠疫疫情的實驗室復(fù)判第二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二實驗室質(zhì)量控制的定義第三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二實驗室質(zhì)量控制的定義質(zhì)量控制(QualityContro,lQ.C)是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個管理過程。

鑒于鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗的重要性,有必要對其進(jìn)行規(guī)范化管理。鼠疫細(xì)菌學(xué)檢驗質(zhì)控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物學(xué)實驗室為了保證檢驗結(jié)果實事求是地反映客觀存在而建立的操作程序體系。第四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗的質(zhì)量控制方法第五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二室內(nèi)質(zhì)控(InternalQualityControlIQC)是指一個實驗室內(nèi)部對所有影響質(zhì)量的各個環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，是由實驗室內(nèi)部制定并實施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。目的是控制本實驗室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。室間質(zhì)控(ExternalQualityAssessment簡稱EQA)簡稱室間質(zhì)評。室間質(zhì)控由上級業(yè)務(wù)單位采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評價各實驗室的試驗結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實驗室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性，這種評價是一種回顧性評價。室內(nèi)質(zhì)控主要監(jiān)測試驗結(jié)果的精密度，而室間質(zhì)控主要控制實驗結(jié)果的準(zhǔn)確度，不互相替代，參與室間質(zhì)控的試驗室應(yīng)先做好室內(nèi)質(zhì)控。鼠疫病原學(xué)檢驗的質(zhì)量控制方法第六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗的質(zhì)量控制方法人員與組織管理儀器設(shè)備的質(zhì)控疑似鼠疫材料的采取、保存和運輸培養(yǎng)基、染色液、試劑盒等的質(zhì)量控制鼠疫細(xì)菌檢驗程序及結(jié)果判定報告卡的書寫、疫情上報及交換室內(nèi)質(zhì)控第七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二室內(nèi)質(zhì)控扎實的基礎(chǔ)教育和專業(yè)知識職業(yè)道德和高度的責(zé)任心質(zhì)量管理體系各實驗室制定SOP專業(yè)化的技能培訓(xùn)繼續(xù)教育人員與組織管理第八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二室內(nèi)質(zhì)控性能試驗正確貯存無菌試驗診斷試劑盒(噬菌體等)培養(yǎng)基量pH值試劑的質(zhì)量控制第九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二室內(nèi)質(zhì)控生物安全柜顯微鏡高壓鍋離心機(jī)培養(yǎng)箱冰箱儀器設(shè)備第十頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗的質(zhì)量控制方法設(shè)立參比實驗室發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行檢查評價定期舉辦各級培訓(xùn)班派觀察員到實驗室進(jìn)行檢查指導(dǎo)室間質(zhì)控方法第十一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二室間質(zhì)控的一般檢查項目實驗室的布局SOP制訂及執(zhí)行情況實驗室安全防護(hù)和污染物處理室內(nèi)質(zhì)控執(zhí)行情況及各種紀(jì)錄發(fā)放模擬標(biāo)本(菌種)，規(guī)定時間內(nèi)反饋至上級業(yè)務(wù)單位

以pH值、軟硬度、鼠疫菌生長數(shù)量(活菌數(shù))等為綜合指標(biāo)對培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)控和用已知菌對噬菌體進(jìn)行質(zhì)控盲點試驗，模擬標(biāo)本混入監(jiān)測標(biāo)本常規(guī)測定對結(jié)果進(jìn)行評價，分析錯誤原因第十二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗方法第十三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗方法染色鏡檢培養(yǎng)特性噬菌體裂解動物實驗基因檢測第十四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫病原學(xué)檢驗方法鼠疫病原體發(fā)現(xiàn)：1894年，在香港，日本學(xué)者北里柴三郎和法國學(xué)者亞力山大耶爾森二氏。分類位置：腸桿菌科耶爾森菌屬。生物學(xué)特性分子生物學(xué)特性：6MD、45MD、65MD三種質(zhì)粒；目前已知IS100、IS285、IS1541、IS1661四種插入序列，分布于鼠疫菌質(zhì)粒的染色體基因組中。毒力決定因子:F1抗原，VWa抗原，Pstl，Pgm分型:古典、中世紀(jì)、東方、田鼠變種四個生物變種；5個群（A、B、C、D、E群），21個生態(tài)型。第十五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二

染色鏡檢革蘭氏染色美蘭染色典型的鼠疫菌是短而粗、兩端鈍圓、兩極濃染的橢圓形小桿菌，革蘭氏染色陰性。第十六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二細(xì)菌培養(yǎng)第十七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二

病原學(xué)在普通培養(yǎng)基上28－30℃經(jīng)24h，肉眼可見形成薄薄一層淡灰色小菌落,圓形，有光澤，中心稍突起。透過光線呈灰白色或淡青色，菌落較干燥，鏡下：中央隆起中心發(fā)暗，有粗糙顆粒（黃褐色）周圍有薄而透明的花邊，呈鋸齒狀。培養(yǎng)特性第十八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二Y.PEVY.E耶爾森菌屬三個致病菌形態(tài)比較第十九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二噬菌體裂解實驗28－30℃24h噬菌帶明顯第二十頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二觀察1-9天，可以從感染動物體內(nèi)檢出鼠疫菌為陽性。動物實驗第二十一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二鼠疫菌的基因檢測病原學(xué)的檢測第二十二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二DNA提取水煮法提取可疑鼠疫菌DNA

對于臟器標(biāo)本，在強毒實驗室以無菌手續(xù)取動物的各種臟器(心、肝、脾、肺)約1g，加入到等量生理鹽水中，研碎，100℃水浴中煮沸10min，離心，取上清直接用作PCR模板對于培養(yǎng)可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于裝有500ul蒸餾水（生理鹽水）的1.5ml離心管中，于沸水浴中煮10min，離心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作為PCR模板。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取鼠疫菌基因組DNA

操作方法可根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。鼠疫菌的基因檢測第二十三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二體系配制PCR-bufferdNTP引物（2對各1ul）TaqDNA聚合酶模板純水總體積25ul2.5ul2ul4ul1ul（2.5U)1ul14.5ul鼠疫菌的基因檢測第二十四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二PCR擴(kuò)增93℃5min90℃1min60℃1min72℃1min30cycle72℃10min4℃保存鼠疫菌的基因檢測第二十五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二瓊脂糖凝膠鼠疫菌的基因檢測第二十六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二拍照鼠疫菌的基因檢測第二十七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二臟器懸液基因檢測：FI特異性片249bp，Pla特異性片456bp第二十八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期二菌懸液基因檢測：FI特異性片249bp