喜樹(shù)替代紫莖澤蘭過(guò)程中根際微生物群落特征

喜樹(shù)替代紫莖澤蘭過(guò)程中根際微生物群落特征收稿日期:收稿日期:2006*基金項(xiàng)目:國(guó)家林業(yè)局林業(yè)有害植物調(diào)查專(zhuān)項(xiàng)資助，教育部重點(diǎn)項(xiàng)目（104191）,資助**聯(lián)系人:Tel元?jiǎng)?,高崇洋1,王文杰1,楊逢建1，劉英1,王敏1,趙陽(yáng)國(guó)2(1東北林業(yè)大學(xué)森林植物生態(tài)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150040;2哈爾濱工業(yè)大學(xué)市政環(huán)境工程學(xué)院，哈爾濱150090)摘要：為研究我國(guó)重要經(jīng)濟(jì)樹(shù)種喜樹(shù)根際分泌物對(duì)根際微生物群落的影響，以及喜樹(shù)在控制林業(yè)有害植物紫莖澤蘭生物入侵的可行性，采用傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)、末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(TRFLP)-16SrDNA文庫(kù)相結(jié)合對(duì)喜樹(shù)(Ca)、紫莖澤蘭(Ea)和二者混栽體系(CE)根際土壤中的真核微生物和真細(xì)菌微生物群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比較。計(jì)數(shù)結(jié)果表明喜樹(shù)、二者混栽以及紫莖澤蘭根際中的真細(xì)菌數(shù)量依次減少而真核微生物數(shù)量依次增多。PCR-SSCP分析顯示，紫莖澤蘭根際土壤中真核微生物條帶數(shù)量(多樣性)遠(yuǎn)高于喜樹(shù)和混栽根際，對(duì)部分條帶克隆測(cè)序表明喜樹(shù)根際中Meristolohmanniaspp.為主要優(yōu)勢(shì)種群；TRFLP對(duì)真細(xì)菌結(jié)構(gòu)分析表明，三種根際中真細(xì)菌群落多樣性豐富，但沒(méi)有差別，對(duì)喜樹(shù)根際真細(xì)菌16SrDNA文庫(kù)測(cè)序比較分析，共包含了10個(gè)已分類(lèi)的門(mén)，其中Proteobacteria門(mén)為優(yōu)勢(shì)菌群，占24.71%(其中δ-Proteobacteria占17.65%)，Acidobacteria門(mén)占16.47%，Bacteroidetes門(mén)占10.59%。另外，色譜分析發(fā)現(xiàn)喜樹(shù)和混栽根際土壤中分別含有較低濃度喜樹(shù)堿和羥基喜樹(shù)堿，而紫莖澤蘭根際二者均檢測(cè)不到。由此可見(jiàn)，紫莖澤蘭的擴(kuò)散和蔓延依賴(lài)于特有的真核微生物群落結(jié)構(gòu)模式，并不改變真細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)，喜樹(shù)能夠通過(guò)根系分泌物改變紫莖澤蘭根際真核微生物群落結(jié)構(gòu)模式，進(jìn)而制約其外延。本研究將為喜樹(shù)在紫莖澤蘭生物替代中提供理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：喜樹(shù)，根際微生物，紫莖澤蘭，PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性技術(shù)(SSCP)，末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(TRFLP)，16SrDNA文庫(kù)CharacteristicsofMicrobialCommunityinRhizosphereofCamptothecaAcuminataMix-CulturedwithExoticInvasivePlantEupatoriumadenophorumZUYuan-gang1,GAOChong-yang1,WANGWen-jie1,YangFengjian1,LiuYing1,WangMin1,ZHAOYang-guo2(1KeyLaboratoryofForestPlantEcology,MinistryofEducation,NortheastForestryUniversity,Harbin150040;2SchoolofMunicipalandEnvironmentalEngineering,HarbinInstituteofTechnology,Harbin150090)Abstract:InordertoinvestigatetheimpactsofsecretionfromCamptothecaacuminate(Ca)rootsonthequantitiesandstructureofFungiandBacteriaintherhizosphere,andthepossibilitythatCacontrolsexoticinvasiveplantEupatoriumadenophorum(Ea),traditionalculture-dependentcountingmethodandculture-independentsmall-subunit-ribosomalRNAgene-targetedmoleculartechniques,PCR-Single-StrandConformationPolymorphism(SSCP),terminalRestraionFragementLengthPolymorphism(TRFLP)combinedwith16SrDNAlibrary,wereadoptedtocomparethecompositionandstructureofFungiandBacteriainrhizospheresofCa,EaandCa-Eamixedplantation(CE).CountingresultsindicatedthenumbersofBacteriaincreasedinturnsinrhizospheresofEa,Ca-EaandCa,whilethatofFungidecreasedinturns.PCR-SSCPprofilesshowedeucaryoticmicrobialbands(correspondingtobiodiveristy)inrhizosphereofEaweremorecomplexthanthatofCaandCE.ItwasMeristolohmanniaspp.thatbecamethesolepredominantgroupintherhizosphereofCademonstratedbycloningandsequencingapartofmainSSCPbands.TRFLPanalysisonBacteriashowednodifferenceamong3rhizospheres,andthesequencesof16SrDNAclonelibraryfromCarhizospheresdistributedin10knownphyla,inwhichphylumProteobacteriawastheabsolutedominantgroupandaccountedfor24.71%ofclonedsequences(δ-Proteobacteriaaccountedforupto17.65%),andphylaAcidobacteriaandBacteroidetesaccountedfor16.47%and10.59%ofclonedsequencesrespectively.Inaddition,highperformanceliquidchromatographycheckedoutatraceamountofcamptothecinandhydroxycamptothecinintherhizosphericsoilofCaandCE,butexaminednoeithercamptothecinorhydroxycamptothecininrhizosphericsoilofEa.Therefore,invasionanddiffusionofEaevidentlydependedondistinctiveeukaryoticcommunitystructuremode,butnotonthebacterialmode.AndCawasabletoaltertheinvasiveeukaryoticcommunitystructuremodeofEabysecretingcamptothecinandhydroxycamptothecinintorhizospheres,andfurtherinhitibitedoverspreadofEa.ThisstudyprovidedrhizospherictheoreticevidenceforsubstitutingCaforEa.Keywords:Camptothecaacuminate,rhizosphericmicrobe,Eupatoriumadenophorum,PCR-Single-StrandConformationPolymorphism(SSCP),terminalRestraionFragementLengthPolymorphism(TRFLP),16SrDNAlibrary喜樹(shù)(CamptothecaacuminataDecaisne,Ca)是多年生亞熱帶落葉闊葉樹(shù)，因其能夠合成顯著抗腫瘤活性的次生代謝產(chǎn)物喜樹(shù)堿(camptothecin)和羥基喜樹(shù)堿(hydroxycamptothecin)而倍受人們的關(guān)注。文獻(xiàn)表明，喜樹(shù)堿能夠與人的拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA(TopI-DNA)共價(jià)復(fù)合物結(jié)合，抑制酶在超螺旋雙鏈DNA上形成缺刻，從而阻止DNA的解旋，進(jìn)而起到抑制腫瘤細(xì)胞復(fù)制的抗癌作用[1]。喜樹(shù)堿在嫩葉中的含量為種子中的1.5倍，樹(shù)皮中的2.5倍[2],有研究表明喜樹(shù)根際也能夠分泌喜樹(shù)堿[3]，由于喜樹(shù)堿幾乎對(duì)所有真核生物均具有抑制作用，所以喜樹(shù)可能對(duì)根際土壤中的真核微生物群落結(jié)構(gòu)產(chǎn)生很大的影響。紫莖澤蘭(Eupatoriumadenophorum,Ea)作為重要的外來(lái)入侵植物越來(lái)越受到人們的重視，而對(duì)入侵植物的生物防治是最具應(yīng)用潛力的策略之一。研究表明，紫莖澤蘭等許多外來(lái)植物的入侵是通過(guò)改變根際中微生物群落的功能來(lái)實(shí)現(xiàn)的[4-8]，通過(guò)改變土壤中原有微生物群落模式來(lái)達(dá)到成功擴(kuò)散的目的。而喜樹(shù)根際能夠分泌抑制真核微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)從而極有可能改變整個(gè)微生物群落的結(jié)構(gòu)，進(jìn)而破壞紫莖澤蘭根際周?chē)鷺O具擴(kuò)散性的微生物群落模式，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)這種入侵植物的成功替代。根際中的微生物由于與宿主植物之間的相互依賴(lài)，相互制約的關(guān)系，致使不同植物根際的微生物群落具有很高的特異性[9,10]，喜樹(shù)作為重要經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，其根際微生物的群落結(jié)構(gòu)也應(yīng)存在其特異之處，而以培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行分析是無(wú)法滿足對(duì)精確，客觀，快速的要求。末端限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(terminalRestraionFragementLengthPolymorphism,TRFLP)[11]和PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-Single-StrandConformationPolymorphismPCR-SSCP)[12]技術(shù)作為重要的基因指紋技術(shù)，在揭示微生物群落結(jié)構(gòu)與動(dòng)態(tài)特征中應(yīng)用越來(lái)越廣泛。而真細(xì)菌16SrDNA文庫(kù)技術(shù)能更全面的揭示了真細(xì)菌微生物多樣性，Giovannoni等[13]首先采用該技術(shù)分析馬尾藻海海面上浮游微生物的多樣性，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的且在該環(huán)境中占優(yōu)勢(shì)的微生物類(lèi)群。目前，該技術(shù)已經(jīng)廣泛運(yùn)用于土壤、海洋、湖泊、動(dòng)物腸道等多種生態(tài)系統(tǒng)中微生物多樣性的調(diào)查，揭示了環(huán)境當(dāng)中前所未知的微生物的多樣性。本研究采用傳統(tǒng)培養(yǎng)技術(shù)對(duì)紫莖澤蘭、紫莖澤蘭-喜樹(shù)、喜樹(shù)三種根際中微生物數(shù)量進(jìn)行了調(diào)查，并采用SSCP和TRFLP-16SrDNA文庫(kù)技術(shù)對(duì)三種根際中的真核微生物和真細(xì)菌的多樣性、相似性進(jìn)行了比較，對(duì)喜樹(shù)控制紫莖澤蘭入侵和擴(kuò)散的可行性進(jìn)行了分析。緊1命材料燦與方姥法擁1.殲1浪實(shí)驗(yàn)演設(shè)計(jì)馳選擇條9若個(gè)體限積熄為擇0.騎6診m×山0.哲5完m×添0.銹2壺2纖m作栽培土箱，鬧裝滿合菜園守土后損分別怒種植扮喜樹(shù)道(C已a(bǔ))楚、赤紫莖擊澤蘭振(E萌a)座和蠶喜樹(shù)菜-紫懲莖澤恢蘭(頸CE撐)錄各3中箱誼，所恭有植商株叮的少株指行縫距均糊為0源.1吸m，們植株煌與箱賭邊距堡0.創(chuàng)05沃m，渠每箱止植株畝總量登為6薪行魔×事5株中=3付0株鈴，在盜喜樹(shù)澇-紫斯莖澤胃蘭混腎栽體肯系中溪，兩纖種植霜物間咐行種蒙植尿。吧在議水、概光、溫氣等壩外界泄環(huán)境唉一致落的條圍件下忌，礦溫室頓栽培己20奴個(gè)月譯。稱(chēng)1.觸2穴生物排量和史根際親土壤形中喜行樹(shù)堿嗚類(lèi)衍思生物輕測(cè)定怒1.控2.誕1戀實(shí)泉驗(yàn)魚(yú)植物伙生物送量的箏測(cè)定夾分別媽測(cè)量陸喜樹(shù)黨和紫犯莖澤縱蘭的巧株高貫、基撤莖徐和刻植物株干重捧，認(rèn)以壯O鑒ri召gi陸n軟次件暑(朝Or員ig養(yǎng)in頭L贈(zèng)ab剃C故or園po做ra旅ti巾on際,蠻MA侍U存SA嘩)隱中兩預(yù)樣緣本虛獨(dú)立韻性T寺檢驗(yàn)率分最析楊喜樹(shù)歌和患紫莖讓澤蘭到各生縮物量俘在混配栽及舞單獨(dú)傻栽培陸時(shí)是狂否存堆在顯書(shū)著差飲別(增0.廣05稿)。嫩1.交2.消2寧土芽壤中塘喜樹(shù)真堿類(lèi)射衍生予物測(cè)敲定暈分別講于陶三種楊栽培時(shí)體系努不同饞重復(fù)艘栽培知樣的選行往間播取其5素cm淡以下脈根際籮土壤凳2傷0奸g偷，將集相同步體系允土壤數(shù)充分宗混勻貝后晝，確取1膛00用g用柳于旺喜樹(shù)岔堿-涼羥基信喜樹(shù)炕堿檢術(shù)測(cè)羞，其秀余根停際土勇樣直麻接登用于尼平板擁菌落蜓計(jì)數(shù)依、終揮發(fā)光性懸劉浮固忘體/梅懸浮采固體灘(助VS菌S/業(yè)SS妙)鼠[1統(tǒng)4]誘檢測(cè)帝和饑總畫(huà)DN拜A肚的提臣取。仁將震10的0g寇根際拉土壤襪樣本禍完全麻懸浮秩于1眼00躬mL鳥(niǎo)無(wú)水朵乙醇塔中墾，于飼室溫黃下浸秧提6鐵0捎mi逢n度后話采用檢Wh同at偶ma驚n毀3M壤濾騙紙過(guò)遙濾，粘用5線0慧mL肌無(wú)水齒乙醇惕洗滌爽土壤壘，合宰并兩款次濾壇液。敵旋轉(zhuǎn)伏蒸發(fā)洪濾液秘至3橋mL乓，取健1菊mL送轉(zhuǎn)至幫1.敬5代mL室壇E阻pp芝en繭do矮rf擇管中疤，以縮10報(bào)00樓0丟×甜g離逮心賺8傘mi叨n，攻將上欠清移朋至一賓新管負(fù)中待猜用。斜取6臘00緊μ恩l于旦高效沾液相寨色譜軋(謀日本新Ja早sc輔o甩公司帝)中憤按文暮獻(xiàn)鐵[1風(fēng)5]限中的貧條件臥和方錦法果檢測(cè)找喜樹(shù)忙堿和醫(yī)羥基歷喜樹(shù)皺堿。鴉1.賴(lài)3河常規(guī)庸方法梯統(tǒng)計(jì)能三種祖根際升微生悅物數(shù)致量口將敬10府g詢(xún)土壤肌溶解愉于桶20取0m擱L墨無(wú)菌攻水錄(枯加絮5g少玻璃抱株盤(pán))塵中，套充分翁振蕩國(guó)，靜辱置1華0m忠in情后，侵取上場(chǎng)清液應(yīng)1m乘L塞，按萄10免倍梯壘度依游次稀毛釋至違10伴-哲10野。取益3橋樣品找的褲10武-層3濤~之10顯-載10訊稀釋符樣，孝各其0.聾2m殃L介分別辮涂布寬于細(xì)顫菌用跟LB賤培養(yǎng)辛基、突真菌笑用查條氏培獎(jiǎng)養(yǎng)基右[1豎6]者平板啊上，駐每樣項(xiàng)重復(fù)詠3嗽次。披細(xì)菌禽置于衰37剛℃馬培養(yǎng)淋1徑d后乘計(jì)數(shù)給，真丟菌置疫于熟28廈℃貍培養(yǎng)努3咐d策計(jì)數(shù)桶。之取扒菌落捕(截Co內(nèi)lo虹ny牽-F坦or京mi京ng叼U西ni位t兩，C米FU糾)蘋(píng)數(shù)摟在沫20喉~2暢00億個(gè)的慧梯度斗進(jìn)行訪計(jì)數(shù)耽和乎比較著分析灣。影1.攤4崗分子肉生物慢學(xué)技濱術(shù)分獄析三轉(zhuǎn)種根憂際中順微生筐物群類(lèi)落的引結(jié)構(gòu)至及組膠成憶1.達(dá)4.徑1安土壤色總演D肆NA耕的提為取資取鈴每種傷根際百土樣示0.麗25振g背，嬸以催土壤雖DN談A劇提取吧試劑店盒泉Po崇we場(chǎng)rS霞o(jì)i霜l燙(T滾M)繁省DN等A相Is綁ol酬at沾io節(jié)n碰ki志t股(筋M耳ob朵io奇CA爹U害SA徹)猶提取臥土樣瑞總毛DN即A趟，最綠終溶封解于見(jiàn)10造0蘆μ番l濁dd哈H冒2越O中落，采劍用紫績(jī)外分船光光鬼度窗儀短(造DU算80敬0,債B春ec黃km細(xì)an奶C察ou撤lt瘡er戰(zhàn)C壓A冤US提A籃)捆檢測(cè)產(chǎn)DN予A濃啄度，貢并計(jì)域算D賞NA土產(chǎn)率大(嗚W傅DN恩A棟/W撈土鉆樣棍)，粒各取眨3疤μ鍋l，系以疫λ/縮Hi俗nd淹II裝I墻(笑寶生洽物，鐘大連欲)桐為m受ar僵ke抬r進(jìn)茂行電汽泳檢桂測(cè)D棄NA協(xié)純度麻。庫(kù)1.沙4推.2鞋SS風(fēng)CP童分析存三種努根際罪土壤肌中真紅核微優(yōu)生物暴多樣紗性與用相似悅性鍛為研丸究真狹核微距生物腿多樣估性，員采用昨真菌問(wèn)類(lèi)1短8S禽r肢DN攤A通金用引卻物N況S7甚(壟5’覺(jué)-A傾TA窩AC驕AG限GT儲(chǔ)CT麥GT讓GA原TG蝦C堅(jiān)-3寒’懼)和訂NS領(lǐng)8(塔5’江-G憂CA網(wǎng)GG臘TT心CA厘CC曲TA榴CG撐GA血-3仁')宅[1寧7]搭以三筆種根愚際土朋壤總慧DN器A為微模板汪，擴(kuò)出增真改核微宰生物洪18聰S偏rD夜NA狗的V權(quán)8醒~想V9換區(qū)，箱約3吊40竄bp剛。其滋中反宋向引彎物N盆S8芒的屑5’夠端采嘩用磷望酸標(biāo)戶(hù)記，奉用于暖λ逢核酸懂外切斜酶識(shí)酷別及忌切除夠。茅引物協(xié)合成陳及標(biāo)寬記由斬In雕vo海tr斤ig倘en醬(上帝海)魄合成傷標(biāo)記旦。缸PC劍R擴(kuò)暢增調(diào)采用醬4管許平行之，掙反應(yīng)終體系毅25軍μ詞l包襲括：勿10春×b情uf碎fe念r待2.鞏5花μ若L涌(p訪lu鎮(zhèn)s泡Mg爽2+貞)，幼引物價(jià)各某0.膀75尚門(mén)μ蠅L扔(0袋.6夏μ陸M)鎖，d肆NT繪P威2稼μ搏L驅(qū)(2股00腎μ燈M)商，憶Ex劈Ta勤q餃DN瓜A聚治合都酶滅0.但8陣U(嚷寶生碑物)口，廉模板貌10介~5圓0生n單g俯。反貼應(yīng)于嗽Ge味ne巖Am癥p抽PC添R杜sy妥st均em圓2桶70千0地PC計(jì)R儀質(zhì)(器Ap墨pl市ie攔d基Bi纖os怨ys悔te合ms拜,錫CA級(jí)U設(shè)SA托)進(jìn)前行，翻程序欠為：設(shè)95楚℃預(yù)尼變性斬5渣mi啞n，那接以望30位個(gè)循療環(huán)包援括：搬95行℃變國(guó)性3催0s處，5托0℃全退火在30申s，茶72篩℃延斬伸1切m晨in盡，最出后7蝕2℃罵延伸重10說(shuō)mi鞭n。咸4管槐混合凱后以廣純化丟試劑俗盒(塵Nu仔cl閉eo葛Sp俊in險(xiǎn)?襖E帖xt幟ra暈ct店I培I，掘Ma誼ch庭e胡re摘y-怠Na照ge近l,登G贈(zèng)er班ma的ny獎(jiǎng))純搭化，焰并最拔終溶扮解于爛40蝶閑μ棍l剩dd慌H澇2濟(jì)O中購(gòu)。侍取3扭μ詞L除PC傘R產(chǎn)絹物與腥DL嚷20伶00彼ma納rk球er飽頂(寶社生物滴，大縱連辨)于淋1%袋的瓊劣脂糖歇凝膠散電泳裙檢測(cè)暮濃度活。日λ燒核酸烤外切從酶能梁夠黃專(zhuān)一蜻降解北雙鏈垂DN衣A中葛5’夕-滿磷酸辣標(biāo)記留的鏈鏟，從獎(jiǎng)而使鴉非標(biāo)陶記的全單鏈少釋放嚷出來(lái)盆[1敗8蒸]督，臟這樣旗既減欠少了監(jiān)SS默CP嚴(yán)圖譜哄中非綁特異局性帶左，又寄提高懼了精擁確度截。咱10森0μ寒L反縫應(yīng)體碗系中遙包括帳λ控核酸釋外切氧酶(動(dòng)NE播B衰，直MA決U柜SA偏)閘30晶U，術(shù)純化蚊的爐PC幕R產(chǎn)麥物禾15瓶μ溜g則，倍37標(biāo)℃拆溫浴高2學(xué)h紗。俗為減抄少蛋莖白質(zhì)嚴(yán)和核替苷酸涌等雜察質(zhì)對(duì)村SS或CP靜圖譜鋪質(zhì)量末的影歇響，側(cè)采用崖酚/蜻氯仿逆法滅純化肢酶切旋產(chǎn)物抗，并澡最終嚷溶于負(fù)2列0μ留L誘dd那H酸2仰O瘡中。董SS愿CP堡分析亦采用哀0.偏6捎×測(cè)MD品E鴨Ma燥tr粉ix兩(鑰Ca博mb禿re續(xù)x,睡蠶Ro常ck拐l(shuí)a紋nd纏,薦M社E烘US議A下)勞于鑰室淺溫下瓶進(jìn)行眼。酶衛(wèi)解沖產(chǎn)物蝦5當(dāng)μ缸g萍與舅5連μL固變性薯液混山合松，蜂95突℃惑變性批10伸mi臺(tái)n上暖樣樣，2宋5色0V暴電泳凈(稼Po祥we運(yùn)rP鐵ac稀1觸00茶0,鉆披Bi姜o-敬Ra島d懶,獎(jiǎng)CA跟U液SA年)蹲1段2希h。勁電泳潑結(jié)束躺后，勤按符Ba筋ss老am慢[1亡9醒]蘇的方噴法進(jìn)草行威銀染家。獲知得的持SS仁CP楊圖譜攜采用否UM武AX惜P遍ow鬧er俊lo歷ok爸1認(rèn)00舅0(結(jié)TX音U薯SA河)蓬掃描臭。杠將三笛種根貫際真策核微乒生物應(yīng)SS葵CP株圖譜怎數(shù)字截化，常在廟同一幕遷移昂率下知，堤有條史帶計(jì)桑為1具，無(wú)闊則為叢0，排然后英對(duì)孩圖譜喇各泳披道陳進(j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水躲平低垂于紫惕莖澤鼠蘭正找常生煩長(zhǎng)擴(kuò)用散時(shí)池真菌核數(shù)量挽。有壤研究柔表明岸，騎紫莖鼓澤蘭京等外粥來(lái)植盛物膝在生蒼物入渴侵過(guò)冤程中玻能與腫根際芝中塔微生棚物橡相互妥作用百，相佳互促媽進(jìn)，位形成寒獨(dú)特健而豐伙富的溜根際土真菌記群，幻從而蠻抑制搖其它樓植物辦的生芒長(zhǎng)，山達(dá)到駕入侵邊的目加的粱[仿4,物5恰,凳8狠]獅，根潔據(jù)本酒研究愈的結(jié)擁果，崇在喜嗽樹(shù)和仍紫莖巷澤蘭準(zhǔn)混栽鞏體系珠中根雅際真跨菌的毅數(shù)量診水平個(gè)明顯去降低待，喜雜樹(shù)可妻能通次過(guò)根糊際分毛泌物也破壞仗了紫貸莖澤暖蘭正紙常入株侵?jǐn)U千散的垃根際闊微生膠物群順落模協(xié)式，陰從而丸制約圖1菌落計(jì)數(shù)法對(duì)喜樹(shù)(Ca)、紫莖澤蘭(Ea)和喜樹(shù)-紫莖澤蘭混栽(CE)根際土壤微生物計(jì)數(shù)結(jié)果Numberofmicrobes(CFU)×106·g-1云喜樹(shù)伴、紫獸莖澤筆蘭以捏及二闊者混喪栽根崇際中橋真細(xì)毀菌數(shù)障量分逼別為雙16跨.2需4蕉×事10饅6櫻C滋FU糾/g撲，輔3.著15并×型10豐6凱C弦FU有/g謙和猛3.忙53勺×欺10倡6嗓C這FU鞋/g晨，喜帥樹(shù)根焰際真床細(xì)菌林?jǐn)?shù)量無(wú)明顯蜂高于役紫莖蒙澤蘭駐和繁混栽魚(yú)根際就，與擠根際奴真菌業(yè)數(shù)量蛛呈相矮反的倍趨勢(shì)數(shù)，而音紫莖濁澤蘭襯和混客栽體槐系中抗真細(xì)膀菌數(shù)襪量水披平相竟差尚不大漂。館為排隱除郊紫莖鞋澤蘭那的擴(kuò)碰散能橋夠通鳴過(guò)改葉變真鎮(zhèn)細(xì)菌院群落棋結(jié)構(gòu)潛來(lái)實(shí)壤現(xiàn)的擊可能家性，搏本文構(gòu)又采貿(mào)用T餐RF牌LP丸技術(shù)略對(duì)三立種根太際中廳真細(xì)蟲(chóng)菌群酸落結(jié)受構(gòu)進(jìn)墨行了報(bào)分析怕(抄見(jiàn)踩下文腫)。移2.技3皺總D悶NA夢(mèng)提取痛及三寒種世根際耕真每核微壁生物笨相似鍛性分扒析耳試劑箱盒烘提取反的土瑞壤總蛇DN藝A腹無(wú)色閣透明式，擴(kuò)產(chǎn)率耗為5等0~能20娃0卡μ犯g/躁g土版樣，帳OD躬28仔0李/O貝D魂26肺0只=1撤.6兩~2摧.0風(fēng)，濃幣度6毒59躁~1栽54感9論μ扎g/鏟mL誦，蝶片段腔約為鄭23撤kb濾，無(wú)爽降解膜，無(wú)漏RN飛A寇污染盯。湯對(duì)三炒種根患際中添真核權(quán)微生血物群洋落的唐SS旺CP戴分析惕圖譜富見(jiàn)眉圖屠2漢。謙結(jié)合續(xù)圖夫1懲和驅(qū)圖診2茫表明攏在單梅獨(dú)栽跡培的尼紫莖接澤蘭涼根際么中真研核微本生物新的費(fèi)多樣桑性將和數(shù)悶量均頌高于掛混栽斗和喜孟樹(shù)根走際才，進(jìn)炸而也煉說(shuō)明飼喜樹(shù)臟堿類(lèi)彎衍生斬物對(duì)哲絕大躲多數(shù)治真核乘微生坊物均幼具有宜抑制常作用控，體杰現(xiàn)了決其廣并譜性辱的特驚征，旅然而鋸根據(jù)急對(duì)喜早樹(shù)S省SC扒P圖穴譜中理優(yōu)勢(shì)麻條帶負(fù)分析皺表明化，仍陜有部梨分偉真核大微生少物爽種類(lèi)評(píng)，如言Me飾ri浸st奮ol株oh升ma開(kāi)nn渠ia倍sp僵p.呢(敵圖2掘中殃●資)第對(duì)喜掏樹(shù)堿測(cè)類(lèi)衍妹生物其不敏剩感艙。值毅得注扁意的蛋是，盡Te伯rm劃it傷om抱yc煙es聾s敞pp睛.認(rèn)(狗圖2詠中撈←兇)捎類(lèi)真蛙菌不跟但對(duì)貓喜樹(shù)料堿有床抗性敲，而闊且在張三種班根際暗中均品是優(yōu)浴勢(shì)類(lèi)麻群；選紫莖舟澤蘭茄根際棉中多女種摔類(lèi)群臟的真造核微舒生物健均處些于優(yōu)特勢(shì)狀效態(tài)竊.哀(提圖2壽中原○后)湯。P任CA艇分析籃也囑說(shuō)明慣紫莖絕澤蘭展根際然中真鑒核微稿生物椅類(lèi)群能同作喜樹(shù)枕及混板栽相服距較猴遠(yuǎn)(黨圖未震給出廊)。楊多數(shù)減研究倦均表擺明，著外來(lái)盲入侵窩種能恩夠顯浴著旨改變迷根際悄真核傳微生慕物厲的多闊樣性怒和功優(yōu)能受[4燕,2烘8]概，并礦且通挺過(guò)對(duì)胃土壤片微生億物咽功能同的影肌響達(dá)譜到成癢功入吹侵的拆目的蘭。比極較煙圖濁2母中夸單獨(dú)洗栽培押紫莖黃澤蘭走群落炎泳道伸(E符a)鄰和混懲栽泳咳道(繞CE趨)，英并結(jié)纖合心紫莖板澤蘭熟在2免種栽朋培體鋤系中派生物憑量的蠟差別奇，可股見(jiàn)喜饅樹(shù)改遭變了鄙紫莖關(guān)澤蘭解正常紡入侵圣時(shí)根籮際土籠壤真爭(zhēng)核微眼生物她群落紗模式犁，從概而制絮約了竊紫莖搖澤蘭節(jié)的進(jìn)獎(jiǎng)一步苦擴(kuò)散諸和蔓兆延的導(dǎo)勢(shì)頭汽。圖圖2喜樹(shù)(Ca)、紫莖澤蘭(Ea)和二者混栽(CE)中真核微生物的SSCP圖譜○示Ea中獨(dú)特的真核微生物條帶及多樣性;●示Ca中獨(dú)特的真核微生物條帶:Meristolohmanniaspp.;←示三種根際中都存在的類(lèi)群:Termitomycesspp.EaCaCE●←○←←←←←野2.卡4壇三種副根際遼土壤爐真細(xì)窄菌遮群落跳結(jié)構(gòu)橫相似覺(jué)性及招多樣頑性蓋分析獲三種跟根際領(lǐng)土壤舞真細(xì)習(xí)菌群顆落進(jìn)守行T弄RF規(guī)LP碎分析蠻的世部分督圖譜熟見(jiàn)末圖饞3世。旗對(duì)圖弱譜的踢主成寨分分疾析表框明除肚了喜煌樹(shù)根溜際真西細(xì)菌野圖譜幼有婦少許扇差別刺外，房其余烘基本附相同事(悶圖未命給出方)除。隱結(jié)合忌計(jì)數(shù)開(kāi)結(jié)果料，說(shuō)并明經(jīng)晉過(guò)2秒0個(gè)督月的接栽培琴過(guò)程燈中，揉3種翼栽培夜體系踩并沒(méi)簽有形孝成各久自獨(dú)忍特的厲真細(xì)冒菌類(lèi)撞群，脈紫莖述澤蘭饒沒(méi)有凡改變遞真細(xì)幟菌微滋生物惕群落唇的多告樣性唯，而請(qǐng)喜樹(shù)虎中真慈細(xì)菌養(yǎng)數(shù)量喂升高這僅僅紀(jì)在于嘴缺少賊真核涂微生愛(ài)物對(duì)恢營(yíng)養(yǎng)齊物競(jìng)虜爭(zhēng)或功分泌夕物為此其提白供了盟更多席的食琴物來(lái)攻源。民研究婦表明祖外來(lái)?yè)]種入面侵過(guò)惑程中輕，真趴細(xì)菌畫(huà)的多忽樣性斜一般霉會(huì)提碼高厚[2潛6]不，而縱本研愁究表熊明溉紫莖蘿澤蘭巴的蔓累延并稠沒(méi)有稼改變星真細(xì)玻菌微糞生物紐群落們的多激樣性膨。諸于興山軍等箏[8礙]陡研究遼表明向了紫吸莖澤稍蘭的訴成功銅入侵板可能屆是通至過(guò)改痛變微律生物遍群落胡的功問(wèn)能來(lái)搞實(shí)現(xiàn)稱(chēng)的，姓而土扭壤微籮生物巧的功匆能是結(jié)多種胳微生竭物，畝包括擱真核六類(lèi)和象原核同類(lèi)微令生物朵共同遵作用稍實(shí)現(xiàn)罵的種，本斷研究怠表明近這種蔽功能鞠的改期變?nèi)伎赡芤魜?lái)源寧于真侍核類(lèi)必微生叨物群當(dāng)落結(jié)唯構(gòu)的揚(yáng)變化隱，而齊非真椒細(xì)菌預(yù)多樣互性的峰變化辟。圖圖3對(duì)喜樹(shù)(Ca)、紫莖澤蘭(Ea)和二者混栽(CE)根際真細(xì)菌進(jìn)行TRFLP分析圖譜(只顯示前200bp)圖內(nèi)方框中為峰值對(duì)應(yīng)的克隆序列細(xì)菌種屬，部分峰無(wú)對(duì)應(yīng)序列引通過(guò)瞇對(duì)文客庫(kù)序顛列與錦TR違FL亭P片嘉段的鋸比較踐，找餃出了轉(zhuǎn)部分葬TR述F對(duì)凍應(yīng)的查序列紡及相母應(yīng)的罪種屬喉(岸圖采3示)，摔從中掉可見(jiàn)夏土壤著中真辯細(xì)菌粉群落擦的多記樣性燭及復(fù)膨雜性純。胳TR胞FL我P圖叢譜表些明臉三種岸根際范中的調(diào)真細(xì)肉菌微表生物洗群落冤多樣止性并過(guò)無(wú)太油大差臂異，肺以喜氧樹(shù)根燈際為駱代表邊，采缺用1拴6S客r能DN鹽A克桶隆文俯庫(kù)技挑術(shù)對(duì)壁根際餃中的傻真細(xì)頃菌群包落組傲成進(jìn)頭行普飯查。固對(duì)糕文庫(kù)會(huì)進(jìn)行再隨機(jī)正測(cè)序鞋，顫拼接晌整理稼得到修8遼4諷個(gè)全畝長(zhǎng)序芬列宏(約塘90腔0b貓p)垃，固Ge稈nB唯an略k炮登錄厚號(hào)：康DQ市09紙38頁(yè)77臟~D洪Q0呈93晃95含9秧，采溜用相仇鄰法腫與屬Ge瘦nB帽an摔k肢中部療分序芽列構(gòu)只建系次統(tǒng)進(jìn)央化樹(shù)饞見(jiàn)無(wú)圖膨4貍。凍根據(jù)誤進(jìn)化先樹(shù)，坑克隆杰序列似在各饞門(mén)中可的分習(xí)配比從例分斯別為懸：匙Pr弓ot質(zhì)eo摧ba燕ct市er狡ia叔為喜衰樹(shù)根欠際中謙絕對(duì)飛優(yōu)勢(shì)犧真細(xì)彈菌類(lèi)六群，彩占文補(bǔ)庫(kù)操矮作分不類(lèi)單覺(jué)元初(吹Op奇er冰at考io蕉na燭l兵Ta北xo昏no栗mi劃c詠Un巾it此,躲OT故U)明總數(shù)佛的波24哪.7同1原%倦，其斜中飲δ創(chuàng)-P螺ro刷te粱ob咸ac鐵te燈ri灰a鏟即占謙了1塞7.焰65鄰%束，該怨類(lèi)微瓣生物順主要芬為硫懇酸鹽栽還原良菌，葵能夠漸以各胃種化脆合物敢和簡(jiǎn)選單揮壞發(fā)酸預(yù)為電川子供甩體還串原硫川酸鹽狐[3燈0]華；其財(cái)次為損Ac值id作ob躍ac浮te確ri簡(jiǎn)a圖門(mén)，田占1皮6.敢47息%，任是一遷類(lèi)分探布廣督、代毫謝類(lèi)袍型豐國(guó)富的帆土壤桑細(xì)菌胃[3歸1]碌；醬Ba雅ct皇er猛oi肝de蔽te采s鞭門(mén)占灰10偉.5浩9暮%室，該局類(lèi)微靠生物列是有新機(jī)碳丟循環(huán)穴的重灣要貢咐獻(xiàn)者穴[3皆2]狹，有然研究瘡也表蠅明攪這類(lèi)冰細(xì)菌靈中的瀉某些花類(lèi)群濁還具喘有降個(gè)解有透機(jī)聚穩(wěn)合物朝的功疫能興[3聰3]對(duì)，夠Ch脆l(xiāng)o襪ro怨fl周ex浸i挎也占洞到群某落比四例的晨9.乘41談%，粱證明泄了光妹合作狡用在雄土壤半中的苗廣泛訓(xùn)存在酬，除棚此以擔(dān)外，姓還有饅12蹤.9閘4%誼的未礦分類(lèi)旱菌毯。擠微生匹物群千落的暖多樣熔性受松各種紗環(huán)境支生態(tài)穴因子灶的影自響，迅因此祖不同稿地域毫不同顏生境己中的斃群落圾結(jié)構(gòu)續(xù)顯著嚷不同店，如曲苗圃竟中健侵康的哭黑云騙杉幼戚苗根排際的祖微生堡物群積落組冶成聽(tīng)是以埋Ac炒id雹ob肅ac無(wú)te漿ri陡a饑,腳γ-針Pr蚊ot泛eo裳ba床ct胸er離ia趣和鐘Ho影mo閥ba孔si習(xí)di終om跟yc初et稻es薪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