實(shí)驗(yàn)三革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)三革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)課件第一頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二一目的要求：1、學(xué)習(xí)并初步掌握革蘭氏染色法。2、了解革蘭氏染色法的原理極其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。二基本原理：革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家ChristainGran創(chuàng)立的，基本步驟是：1、初染：結(jié)晶紫染色2、媒染：碘液媒染3、脫色：乙醇脫色4、復(fù)染：番紅復(fù)染第二頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二

經(jīng)此法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性菌；細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而染上復(fù)染劑的顏色（紅色）的細(xì)菌為革蘭氏陰性菌。GramstainofGram-GramstainofGram+第三頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌對(duì)革蘭氏染色的不同反應(yīng)是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。初染后，所有細(xì)菌都被染成初染劑的藍(lán)紫色。碘作為媒染劑，它能與結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫—碘的復(fù)合物，增強(qiáng)染料與細(xì)菌的結(jié)合力。當(dāng)用脫色劑處理時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，壁厚、類脂質(zhì)含量低，用乙醇脫色時(shí)細(xì)胞壁脫水，使肽聚糖層的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔經(jīng)縮小，透性降低，從而使結(jié)晶紫—碘的復(fù)合物不易被洗脫而保留在細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復(fù)染后仍保留初染劑的藍(lán)紫色。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄、類脂質(zhì)含量高，所以當(dāng)脫色處理時(shí)，類脂質(zhì)被乙醇溶解，細(xì)胞壁透性增大，使結(jié)晶紫—碘的復(fù)合物比較容易被洗脫出來(lái)，用復(fù)染劑復(fù)染后，細(xì)胞被染上復(fù)染劑的紅色。第四頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二StructureofaGram-NegativeCellWallStructureofaGram-PositiveCellWall

第五頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、器材：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，革蘭氏染色液，載玻片，顯微鏡等四、操作步驟：1、涂片：將大腸桿菌（24h）和金黃色葡萄球菌（24h）分別涂片、干燥、固定。2、染色：（1）初染：加草酸銨結(jié)晶紫一滴，約一分鐘，水洗（2）媒染：滴加碘液沖去殘水，并覆蓋一分鐘，水洗（3）脫色：將水甩凈，并襯以白背景，用95%乙醇滴洗至剛剛無(wú)紫色為止，約20—30秒，立即用水沖凈乙醇（4）復(fù)染：用番紅液染1--2分鐘，水洗第六頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二3、鏡檢：干燥后，油鏡觀察。以分散開的細(xì)菌顏色為準(zhǔn)，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。4、混合制片觀察：一載玻片上兩種菌混合制片，對(duì)比觀察。第七頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二步驟1：涂片

第八頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二步驟2：干燥

第九頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二步驟四染色步驟三固定第十頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二crystalvioletstain

washwithwater結(jié)晶紫染色水洗第十一頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二Stainwithgram'siodinesolution

碘液復(fù)染Decolorizebyadding95%alcohol

95%酒精脫色第十二頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二CounterstainwithSafranin

沙黃復(fù)染Resultsofstain染色結(jié)果第十三頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二五注意事項(xiàng)

1）注意涂片不宜過(guò)。

2）火焰固定溫度要適宜。

3）注意控制好脫色程度。第十四頁(yè)，共十五頁(yè)，編輯于2023年，星期二六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

1、結(jié)果：列表簡(jiǎn)述2株細(xì)菌的染色觀察結(jié)果（形狀、顏色、革蘭氏染色反應(yīng)）。

2、思考題：

1）作革蘭氏染色涂片為什么不能過(guò)于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵步驟是什么？

2）當(dāng)你對(duì)