【高中生物】基因工程賦予生物新的遺傳特性（2）課件+高二下學(xué)期生物浙科版選擇性必修3

4.1基因工程賦予生物新的遺傳特性（2）

——基因工程的基本操作程序三、基因工程的一系列操作可使生物獲得新的遺傳特性主要需要四個(gè)步驟：獲取目的基因、構(gòu)建重組DNA分子、將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞、檢測(cè)目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物。培育轉(zhuǎn)基因大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素一般需要哪些步驟？基因結(jié)構(gòu)原核生物基因真核生物基因非編碼區(qū)位置作用主要結(jié)構(gòu)編碼區(qū)位于基因的兩端對(duì)基因的表達(dá)起調(diào)控作用啟動(dòng)子終止子與RNA聚合酶結(jié)合，控制轉(zhuǎn)錄的開始當(dāng)RNA聚合酶到達(dá)時(shí)，釋放出RNA產(chǎn)物，轉(zhuǎn)錄結(jié)束核苷酸序列是連續(xù)的，轉(zhuǎn)錄出的mRNA可直接作為翻譯的模板核苷酸序列是不連續(xù)的，分為外顯子和內(nèi)含子，兩者均會(huì)被轉(zhuǎn)錄成mRNA前體，再在核內(nèi)切去內(nèi)含子對(duì)應(yīng)部分，加工成為成熟的mRNA。啟動(dòng)子和起始密碼子、終止子和終止密碼子的區(qū)別歸納總結(jié)

啟動(dòng)子終止子起始密碼子終止密碼子化學(xué)成分位置作用DNA片段mRNA上三個(gè)相鄰堿基DNA片段mRNA上三個(gè)相鄰堿基目的基因首端目的基因尾端mRNA首端mRNA尾端RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部分，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA決定轉(zhuǎn)錄的結(jié)束翻譯的起始信號(hào)決定翻譯過程的結(jié)束（一）獲取目的基因在基因工程的設(shè)計(jì)和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等相關(guān)的基因。根據(jù)不同的需要，目的基因不同，主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因。如：與生物抗逆性、優(yōu)良品質(zhì)、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相關(guān)的基因。1.目的基因：2.獲取目的基因的方法（1）化學(xué)合成法

蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推測(cè)推測(cè)化學(xué)合成DNA合成儀①前提：基因比較小、核苷酸序列已知③方法：通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成目的基因②過程2.獲取目的基因的方法（1）化學(xué)合成法基因組文庫cDNA文庫（2）從基因文庫中獲取需已知目的基因全部序列

蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推測(cè)推測(cè)化學(xué)合成基因組文庫：含有某種生物全部基因片段的重組DNA的克隆群體。（1）建立基因組文庫某生物所有DNA特定的限制酶基因組所有基因每個(gè)基因和載體結(jié)合重組DNA分子導(dǎo)入受體菌基因組文庫（2）建立cDNA基因文庫雙鏈DNA片段（cDNA）某種生物的成熟mRNA單鏈DNA導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存cDNA文庫逆轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶與載體連接2.獲取目的基因的方法（1）化學(xué)合成法基因組文庫cDNA文庫（2）從基因文庫中獲取需已知目的基因全部序列

蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因推測(cè)推測(cè)化學(xué)合成（3）利用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因PCR是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。結(jié)合體內(nèi)DNA復(fù)制過程，思考PCR的進(jìn)行需要哪些條件？①聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（簡(jiǎn)稱PCR）②PCR的條件耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）四種脫氧核苷三磷酸（dNTP））DNA模板引物穩(wěn)定的緩沖溶液（一般添加Mg2+）1.名稱：脫氧腺苷5′-三磷酸(dATP)、脫氧鳥苷5′-三磷酸(dGTP)、脫氧胞苷5′-三磷酸(dCTP)和脫氧胸腺苷5′-三磷酸(dTTP)。DNA復(fù)制時(shí)，脫氧核苷酸鏈的延伸使用的原料只能是dNTP。DNA的合成需要能量，dNTP才能提供足夠的能量，四種脫氧核苷三磷酸（dNTP）3.作為原料的原因2.結(jié)構(gòu)PCR的引物引物其實(shí)就是引子，是一小段單鏈DNA（體內(nèi)DNA復(fù)制所用的引物是RNA），是作為DNA復(fù)制的起始點(diǎn)，決定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性和長(zhǎng)度。1.概念2.引物的長(zhǎng)度其長(zhǎng)度常用的是15～30個(gè)脫氧核苷酸因?yàn)檫^短則特異性低。過長(zhǎng)的引物會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，不適于TaqDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。3.引物的種類PCR擴(kuò)增時(shí)應(yīng)有兩種引物，即分別能與兩條模板鏈配對(duì)的兩種單鏈DNA。4.結(jié)合位點(diǎn)由于DNA復(fù)制只能是5'→3'進(jìn)行，而DNA的兩條單鏈又是反向平行的。5.設(shè)計(jì)引物的要求引物是復(fù)制時(shí)所要合成的新鏈中的一段，在整個(gè)PCR周期都一直存在（體內(nèi)DNA復(fù)制因用的引物是RNA，最后是被DNA聚合酶I切除的）。要考慮長(zhǎng)度、G/C堿基對(duì)的數(shù)目外，還要避免兩個(gè)引物（特別是3’端）間發(fā)生互補(bǔ)，避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)等。6.引物數(shù)量要求模板鏈的3’端（2011·江蘇）設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（圖1），請(qǐng)分別說明理由。①第1組：

；②第2組：

。引物I和引物Ⅱ局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效引物I’自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效(2016·天津）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。圖3中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。925575℃3`5`5`3`Taq聚合酶引物1引物2原料模板DNA目的基因PCR過程925575℃變性3`5`5`3`第一輪含有目的基因的雙鏈DNA片段氫鍵斷裂，DNA解聚為單鏈溫度上升到90℃以上變性925575℃退火Taq聚合酶引物1引物2原料第一輪兩條DNA單鏈引物和兩條單鏈DNA堿基互補(bǔ)配對(duì)溫度下降到50℃左右復(fù)性925575℃延伸Taq聚合酶引物1引物2原料第一輪引物和互補(bǔ)DNA結(jié)合脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈溫度上升到72℃左右延伸思考：循環(huán)N次，會(huì)得到多少個(gè)DNA分子呢？925575℃變性Taq聚合酶引物1引物2原料第二輪925575℃退火Taq聚合酶引物1引物2原料第二輪925575℃延伸Taq聚合酶引物1引物2原料第二輪925575℃變性第三輪925575℃退火第三輪925575℃延伸第三輪思考：繼續(xù)循環(huán)N次，會(huì)得到多少個(gè)DNA分子呢？③PCR反應(yīng)過程④PCR產(chǎn)物鑒定常用方法：瓊脂糖凝膠電泳原理：核酸是帶有負(fù)電荷的生物大分子，在電場(chǎng)作用下，向正極移動(dòng)，核酸分子越大，向正極遷移速率越慢。結(jié)果：a.每個(gè)條帶包含的DNA片段長(zhǎng)度是相同的。b.DNA可用熒光或放射性染料對(duì)DNA進(jìn)行標(biāo)記或用亞甲基藍(lán)將DNA染成藍(lán)色。c.DNAMarker是一組已知長(zhǎng)度和含量的標(biāo)準(zhǔn)DNA片段混合物。討論1.目的基因雙鏈DNA片段在第

次循環(huán)后出現(xiàn)。2.第n次循環(huán)后共有

個(gè)分子。這些分子可以分為3種類型：目的基因雙鏈DNA片段為

個(gè)，雙鏈中有1條鏈長(zhǎng)于目的基因的DNA片段為

個(gè)，雙鏈均長(zhǎng)于目的基因的DNA片段有

個(gè)。3.共進(jìn)行n輪循環(huán)，總共消耗引物A的數(shù)量

個(gè)。第n輪循環(huán)后，含有引物A的DNA數(shù)量

個(gè)。三（2n-2n）2（n-1）22n2n-12n-1利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似，如圖所示。圖中引物為單鏈DNA片段,它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。①從理論上推測(cè),第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為

。②在第

輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段。15/16三PCR技術(shù)與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的比較比較項(xiàng)目細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR技術(shù)區(qū)別解旋方式場(chǎng)所酶引物溫度結(jié)果聯(lián)系解旋酶催化DNA在高溫下變性解旋主要在細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞外解旋酶、DNA聚合酶熱穩(wěn)定TaqDNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)溫和條件3個(gè)溫度，需在不同溫度下進(jìn)行合成整個(gè)DNA分子擴(kuò)增特定的DNA片段或基因(1)模板：均需要脫氧核苷酸雙鏈作為模板(2)原料：均為四種脫氧核苷三磷酸（dNTP）(3)酶：均需DNA聚合酶(4)引物：都需要引物，使DNA聚合酶從引物開始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成RNA、最后切除單鏈DNA、始終存在用PCR可以擴(kuò)增mRNA嗎？mRNA不可以直接擴(kuò)增，需要將它逆轉(zhuǎn)錄成cDNA再進(jìn)行擴(kuò)增。1.逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的DNA鏈，形成RNA-DNA雜交分子；2.核酸酶H降解RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈，使之變成單鏈DNA；3.以單鏈DNA為模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一條互補(bǔ)的DNA鏈，形成雙鏈DNA分子，即cDNAPCR擴(kuò)增DNA片段及凝膠電泳鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理1.利用PCR在體外進(jìn)行DNA片段擴(kuò)增的原理①PCR利用了DNA的______原理，通過_________來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合，PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺(tái)能夠_____________的儀器，一次PCR一般要經(jīng)歷___次循環(huán)；熱變性調(diào)節(jié)溫度自動(dòng)調(diào)控溫度30②PCR擴(kuò)增DNA片段還利用了______________的原理；DNA半保留復(fù)制2.DNA片段電泳鑒定的原理①DNA分子具有_____________，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場(chǎng)的作用下，這些________會(huì)向著________________的電極移動(dòng)，這個(gè)過程就是電泳?？山怆x的基團(tuán)帶電分子與它所帶電荷相反②PCR的產(chǎn)物一般通過_______________來鑒定；③在凝膠中DNA分子的遷移速率與___________、______________和_____等有關(guān)④凝膠中的DNA分子使用

進(jìn)行染色，再用

以及蒸餾水

，觀察并分析瓊脂糖凝膠中DNA條帶。瓊脂糖凝膠電泳凝膠的濃度亞甲基藍(lán)溶液75%酒精脫色DNA分子的大小構(gòu)象二、材料用具①PCR儀（自動(dòng)控溫，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增）②微量離心管（實(shí)際上是進(jìn)行PCR反應(yīng)的場(chǎng)所）③微量移液器（用于向微量離心管轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體）④一次性吸液槍頭（微量移液器吸取一種試劑更換一次槍頭）⑤電泳裝置（包括電泳儀、電泳槽等）10倍濃縮的擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）5μL20mmol/L的4種脫氧核苷酸的等量混合液（實(shí)為dNTP）2μL20μmol/L的引物A4μL20μmol/L的引物B4μL無菌H2O32μLTaqDNA聚合酶（即耐高溫的DNA聚合酶）1μL酵母細(xì)胞菌液2μL總體積50μL⑧PCR反應(yīng)體系的配方⑥4種脫氧核苷酸等量混合液、2種引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、擴(kuò)增緩沖液、無菌水。⑦電泳緩沖液、凝膠載樣緩沖液、瓊脂糖和核酸染料等

預(yù)變性使DNA充分變性，以利于引物更好地和模板結(jié)合。三、方法步驟1.PCR擴(kuò)增（1）移液：用微量移液器按照PCR反應(yīng)體系配方或PCR試劑盒的說明書，在微量離心管中依次加入各組分（2）離心：待所有組分都加入后，蓋嚴(yán)離心管的蓋子，將微量離心管放入離心機(jī)里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在離心管的底部（提高反應(yīng)速率）（3）反應(yīng)：參照右圖的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。2.瓊脂糖凝膠電泳（1）配制瓊脂糖溶液

根據(jù)待分離DNA片段的大小，用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液，一般配制質(zhì)量體積比0.8%-1.2%的瓊脂糖溶液。在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化。（2）制備凝膠①將溫?zé)岬沫傊侨芤貉杆俚谷肽z盒，并插入合適大小的梳子，以形成加樣孔。③將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒過凝膠1mm為宜②待凝膠溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。（3）加樣將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。留一個(gè)加樣孔加入指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物（4）電泳蓋上電泳槽蓋，連接好電極插頭后再接通電源。將直流電泳儀設(shè)置成80V，開始電泳。25min后關(guān)閉電源，停止電泳。注意觀察溴酚藍(lán)不要遷移出凝膠。3.染色染色方案1：（1）將凝膠放入培養(yǎng)皿，倒入0.1%亞甲基藍(lán)溶液，沒過凝膠5mm，染色8min。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿，讓染液進(jìn)入凝膠下表面與培養(yǎng)皿之間，不要留有氣泡。染液使用后可回收利用。（2）倒入75%酒精沒過凝膠5min，不斷晃動(dòng)培養(yǎng)皿1～1.5min。再倒去酒精。（3）加入冷的蒸餾水進(jìn)行脫色。當(dāng)出現(xiàn)清晰的藍(lán)色區(qū)帶時(shí)，倒去蒸餾水終止脫色。此過程中可更換染藍(lán)的蒸餾水。如果凝膠在蒸餾水中浸泡過久，條帶顏色會(huì)變淡直至無色。染色方案2：

向盛有凝膠的培養(yǎng)皿倒入0.002%亞甲基藍(lán)溶液，沒過凝膠5mm。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿，讓染液進(jìn)入凝膠下表面與培養(yǎng)皿之間。蓋上培養(yǎng)皿蓋，4℃冷藏過夜。第二天觀察到清晰的藍(lán)色區(qū)帶時(shí)，倒去染液，終止染色。染液可回收利用。4.觀察注意1.為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。2.該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購買，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲(chǔ)存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。4.在進(jìn)行操作時(shí)，一定要戴好一次性手套。5.PCR擴(kuò)增不能隨意加大試劑用量。討論1.本實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的對(duì)照組應(yīng)該如何設(shè)計(jì)？2.請(qǐng)根據(jù)本活動(dòng)中提供的引物序列，寫出PCR產(chǎn)物兩端的DNA雙鏈序列。在配制對(duì)照組PCR體系時(shí)，用等體積的無菌水代替酵母菌細(xì)胞懸液，其他條件均相同。5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG……GCATATCAATAAGCGGAGGA-3’3’-AGGCATCCACTTGGACGCC……CGTATAGTTATTCGCCTCCT-5’目的：避免外源DNA的污染1.你是否成功擴(kuò)增出DNA片段？判斷的依據(jù)是什么？2.你進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果是幾條條帶？如果不止一條條帶，請(qǐng)分析產(chǎn)生這個(gè)結(jié)果的可能原因。

可以在紫外燈下直接觀察到DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果。進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果應(yīng)該是一條條帶，該片段大小約為750bp。

如果擴(kuò)增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反應(yīng)成分，各反應(yīng)成分的用量不當(dāng)，PCR程序設(shè)置不當(dāng)?shù)?。如果擴(kuò)增結(jié)果不止一條條帶，可能的原因有：引物設(shè)計(jì)不合理，它們與非目的序列有同源性或容易形成二聚體；退火溫度過低；DNA聚合酶的質(zhì)量不好等。（二）構(gòu)建重組DNA分子獲得了足量的目的基因后，是否能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞呢？若這樣操作，效果如何？目的：確保目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)，并且能遺傳給下一代。核心步驟1.過程：結(jié)合圖示，概述基因表達(dá)載體構(gòu)建的流程：（1）用限制酶切割載體，使它出現(xiàn)一個(gè)缺口；（2）用同種限制酶或能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段，獲取目的基因；（3）用DNA連接酶將目的基因片段拼接到載體缺口處，形成重組DNA分子。思考：1.如果用一種限制酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，再用DNA連接酶處理后會(huì)出現(xiàn)幾種產(chǎn)物？(只考慮兩兩結(jié)合)目的基因——載體連接物、載體——載體連接物、目的基因——目的基因連接物。思考：2.如何防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化以及目的基因的反向連接？雙酶切-G-CTTAA-A-TCTAG2.克隆載體與表達(dá)載體克隆載體表達(dá)載體用于大量擴(kuò)增外源DNA的載體使目的基因既能擴(kuò)增又能表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)的載體作為基因表達(dá)載體，除了目的基因、復(fù)制原點(diǎn)外，還需要哪些元件呢？①區(qū)別②構(gòu)件啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因（常用是抗性基因）例(2016·全國(guó)丙，40)圖(a)中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖(b)為某種表達(dá)載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點(diǎn)是唯一的)。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：(1)經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_____________________________________________。(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示，這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有____________，不能表達(dá)的原因是___________________。Sau3AⅠ兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端甲、丙甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄（三）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞接受目的基因的細(xì)胞稱為受體細(xì)胞。根據(jù)受體細(xì)胞類型可選擇不同的基因?qū)敕椒?.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞微生物（常用大腸桿菌）①優(yōu)點(diǎn)：繁殖周期短；體積小易于培養(yǎng)操作；多為單細(xì)胞；遺傳物質(zhì)相對(duì)較少②流程：大腸桿菌低溫CaCl2感受態(tài)細(xì)胞溶于緩沖液中的重組DNA分子轉(zhuǎn)化——CaCl2處理法2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞——顯微注射法操作程序：取受精卵顯微注射移植到同期發(fā)情的母畜子宮內(nèi)為什么常選用受精卵作為受體細(xì)胞呢？提純基因表達(dá)載體3.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞——農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因插入

中，用

轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，再讓農(nóng)桿菌的

植物細(xì)胞，目的基因會(huì)隨T-DNA整合到植物染色體DNA中，最后通過

技術(shù)可培育出轉(zhuǎn)基因植物。

目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程①轉(zhuǎn)化：②農(nóng)桿菌特點(diǎn)：農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有

，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將

上的______（___________）轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其_________________________；Ti質(zhì)粒Ti質(zhì)粒T-DNA可轉(zhuǎn)移的DNA